Препарат иммобилизованного трипсина

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

<п>863638

=Ф (61) Дополнительное к авт. свид-ву— .(22) Заявлено 231179 (21) 2903451/28-13 (5!)М. Кл с присоединением заявки Мо

С 12 и 9/76

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет (53) УДК 615. 362. .342.4(088.8) Опубликовано 15.0981. Бюллетень Й9 34

Дата опубликования описания 150981

Ф.Б.Левин, Т.Т.Березов, Л.В.Сорокина и Т.Н худякова ! . :. Й ", ",: .;т я Д московский ордена трудового красного знамени мй йцийский стоматологический институт им. Н.A.Семашкб и Университет дружбы народов им. Патриса Лумумбы (72) Авторы изобретения (71) Заявители (54) ПРЕПАРАТ ИММОБИЛИЗОВАННОГО ТРИПСИНА

938,4-943,3

56,7-61,6

Трипсин

Тромбоциты

Изобретение относится к технике получения ферментных препаратов, а именно иммобилизованного трипсина, используемого в экспериментальной биологии и медицине.

Известен препарат иимобилизованного трипсина, включающий биоструктуру и ковалентно связанный с ней трипсин (1 ).

t0

Однако известный препарат обладает невысокой удельной активностью, что обусловлено тем, что применяемые носители-эритроциты обладают относительно малой способностью к активированию сшивающими химическими реагентами и последующему связыванию молекул ферментов. Изготовление препарата связано с затратами больших количеств дорогостоящих кристаллических ферментов, из которых неболь- 20 шая часть иммобилизуется на эритроцитах. Кроме того, в связи с малой активностью препарата для получения эффекта требуется вводить в организм его в больших дозах, содержащих балластные белки.

Целью изобретения является повышение ферментативной активности препарата.

Эта цель достигается тем, что препарат иммобилизованного трипсина, включающий биоструктуру и ковалентно связанный с ней трипсин, в качестве биоструктуры содержит тромбоциты при следующем соотношении ингредиентов, мг:

Пример. Трипсин, полученный иммобилизацией на тромбоцитах кролика.

Для иммобилизации используют кристаллический трипсин Ленинградского завода медицинских препаратов.

Свежую кровь из ушной вены кролика с добавлением 1/10 части

3,8%-ного цитрата натрия центрифугируют при 1000 об/мин 15 мин, обогащенную тромбоцитами плазму отсасывают и тромбоциты осаждают. центрнфугированием при 3000 об/мин 10 мин.

Далее осадок тромбоцитов промывают

2 раза 0,15 M раствором хлористого натрия и взвешивают в трех объемах этого раствора. К взвеси тромбоцитов добавляют два объема 0,1Ъ-ного раствора глутаральдегида на 0,1 М фосфатном буфере при рН 6,8, содер863638

Активность препарара — содержание исходного фермента в сухом препарате,мг/г

Способ иммобилизации

Препараты

Носитель

1,9

ЭритРоциты Ковалентное связывание с помощью глутарового диальдегида

Известный

56,7

То же

Предлагаемый Тромбоциты

938,4-943,3

56,7-61,6

Трипсин

Тромбоциты

Составитель A.Áðàæíèêoâà

ТехредМ. Рейвес Корректор Е.Рошко

Редактор М.Петрова

Заказ 7701/39 Тираж 531 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 жащем 0,15 М раствора хлористого натрия и инкубируют 1-6 ч при качании на шуттель-аппарате при комнатной температуре или при 4 С. Затем суспензию отмывают 4 раза 20-кратными объемами холодного физиологического раствора до полного отсутствия

5 глутаральдегида в последней порции отмывающего раствора.

Полученный таким образом осадок тромбоцитов инкубируют с раствором фермента на 0,1 М фосфатном буфере при рН 6,8, так, что конечная кон- . центрация трипсина составляет

10 мг/мл. Инкубацию проводят 1-4.ч при качании на шуттель-аппарате при комнатной температуре или при 4 С. . !5 о

Полученную суспензию отмывают 57 раэ 20-кратными объемами холодного физиологического раствора до полного отсутствия активности фермента в последней порции отмывающего 20 раствора. Препараты осаждают центрио фугированием и хранят при 4 С.

В 1 г сухого полученного препарата содержится 56,7 мг иммобилизованного фермента. 25

В таблице приведены данные активности предлагаемого и известного препаратов трипсина.

Формула изобретения

Препарат иммобилизованного трипсина, включающий биоструктуру и ковалентно связанный с ней трипсин, отличающийся тем, что, с целью повышения ферментативной активности препарата, препарат в качестве биоструктуры содержит тромбоци-.. ты при следующем соотношении ингре- 50 диентов.,мг:.

Результаты таблицы показывают, что при использовании предлагаемого биоструктурного носителя — тромбоцитов полученный препарат содержит в 30 раз больше активного фермента, чем при иммобилизации на известном носителе-эритроцитах.

Лабораторно изучен ряд препаратов, химически иммобилизованных на тромбоцитах ферментов, при этом установлено, что их активность во много раз превышает соответствующие эритроцитарные препараты. Так в

1 r сухого препарата, связанного с тромбоцитами химотрипсина, содержится 61,6 мг исходного фермента, а в препарате на эритроцитарном носителе — 0,9 мг.

Таким образом, получаемый по сравнению с известным препарат имеет повышенную ферментативную активность и может быть использован в производстве ферментных препаратов медикобиологического назначения и в лечебных целях, а также в научных институтах, занимающихся проблемами свертывания крови.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Терешин И.М,, Москвичев Б.В.

Иммобилизованные ферменты. Тезисы

Ц Всесоюзного симпозиума. M., 1976.