Способ хранения биологических проб для определения сульфгидрильных групп

 

Союз Советсиик

Социапнетичесннз республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

«ii90578S (61) Дополнительное к авт. свнд-ву (22)Заявлено 02.04.79 (21) 275969 1/28-13 с присоединением заявки М (23) Приоритет

Опубликовано 15.02.82. Бюллетень М 6

Дата опубликования описания 15.02.82 (5I )M. Кл.

G 01 М 33/48

3Ьвударетвонвв кенятет сссР ао делан изобретение н открытий (53) УДК612,13 (088.8) (72) Авторы изобретения

Е.Г.Гаузер, ?!.А.?1ехтиев и Б.Ф.КеримовЂ

Институт фиоиологни им. А.И.Караева (7! ) Заявитель (54) СПОСОБ ХРАНЕНИЯ БИОЛОГИЧЕСКИХ ПРОБ

ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СУЛЬФГИДРИЗЬНЫХ ГРУПП

Изобретение относится к биологии .и медицине и может быть использовано при диагностических исследовани" ях.

Известен способ хранения биоло— гических проб для определения сульфгидрнльных групп путем химической обработки пробы (13 .

Однако известный способ не позволяет длительно хранить биологичесQ кие пробы, так как происходит быстрое окисление SH-групп в течение

4 ч.

Целью изобретения является увеличение сроков хранения.

Эта цель достигается тем, что способ хранения биологических проб для определения сульфгидрильных групп осуществляют путем химической обработки пробы, обрабатывают

5 1(У4?1 раствором хлористой ртути в соотношении 1:2 и затем добавляют сульфосалицнловую или трихлоруксусную кислоту до рН 2,0-2,5.

Способ осуществляют следующим образом.

Свежеотобранные пробы обрабатывают 5 10 И раствором Hg С1 в двойном количестве по отношению к взятому объему пробы и подкисляют о

5Х-ным раствором сульфосалициловой или трихлоруксусной кислоты до рН 2,0-2,5 Hg С1 вступает в реакцию с SH-группами, образуя ста1О бильное меркаптосоединение, дающее возможность восстанавливать первоначальное значение количества SH"ãðóïï, а подкисление преду"

15 преждает образование в пробе иных связей ртути с другими функциональными группами.

Во взятой после хранения пробе избыток Hg Cly, не вошедший в соединение с SH-группами, оттитровывают

-3

1.10 М раствором глутатиона и по разности между внесенными количествами Hg С1л при взятии пробы и оттитрованным в конце определенит

905788 количеством определяют истинное содержание общерастворимых SH-групп.

Прим е р I. К0305мл гемолиэата крови человека, полученного путем разведения цельной крови в 40 раз, добавляют 0,6-1 мл

5 IO M раствора Hg С1, подкисляют 5%-ным раствором сульфосалициловой илн трихлоруксусной кислот до рН 2,0-2,5 и оставляют на хранение в плотнозакрытом флаконе при

4-5ОС.

Во взятой после хранения пробе оттитровывают избыток не вошедших в реакцию ионов ртути 1 ° !О М раствором глутатиона. Конечную точку титрования находят графическим путем. По разности мещцу внесенным количеством HgCIj при взятии пробы и оттитрованным в конце определения находят количество общерастворимых БЙ-групп в расчете на 100 мл цельной крови по формуле где Q — содержание общерастворимых

SH rpyan на 100 мл цельной кровн1

К вЂ” коэффициент поправки, харак" зе териэующий взаимодействие

HgC I я с SH-групнами1

Ч вЂ” объем 5 -10 М раствора HgCf®

4.

Т добавляемого к гемолизату!

Ч вЂ” объем непрореагировавшвго

Hg Clq, определяемый графическим путем1

Чс! — объем гемолизата, взятого для анализа.

Пример 2. K О, 2-0, 3 мл зкст- <О ракта печени свинки, полученного центрифугированием гомогената, приготов" ленного при 4ОС на 0,154 М растворе

КС1 с I М,ц, ЭДТА в соотношении I:19 (эквивалентнык 10-15 мг ткани соответственно), добавляют 0,4-0,6 мл

5: 10" М раствора HgCI, добавлением 5Х-ного раствора сульфосалициловой и трихлоруксусной кислоты, устанавливают в пробе рН 2,0-2,5 и оставляют на хранение в плотноукупоренном флаконе при 4-5 0.

Во взятой после хранения пробе оттитровывают избыток ионов ртути, не вошедших в реакцию, 1 ° 10 M раствором глутатиона. Конечную точку титрования находят графическим путем, откладывая количество добавленного

4 глутатнока на оси абсцисс, а на оси ордннат — силу тока по гальванометру. По разности внесенного количества HgCIg при взятии пробы и оттитрованного в конце определения определяют количество общерастворнмых сульфгндрильных групп в пересчете на 100 r ткани по формуле

405K(vт- iT)

6= г где Q — содержание общерастворимых

SH-групп в расчете на IOO г ткани, К вЂ” коэффициент поправки, характеризующий взаимодействие

Hg С1 с SH-группами гомогената печени;

V — объем 5 10 М раствора HgCII! добавленного к гомогенату!

Чт — объем непрореагировавшего

5 10 M раствора HgCl

g — количество ткани печейи г т ° ) взятого для анализа.

Пример 3. К 0,2-0,3 мл экстракта селезенки крысы, полученного центрифугированием гомогената, приготовленного при 4бС на 0,154 М раствора КС! с 1 М, - ЭДТА, в соотношении

1:19 (эквивалентных !0-1! мг ткани), добавляют 0,4-0,6 мл 5 ° 10 4М раствора HgClg и 57-ным .раствором сульфосалициловой или трихлоруксусной кислоты устанавливают в пробе рН 2,02,5. Пробу оставляют на хранение при

4 5оС.

Через месяц после хранения во взятой пробе избыток ионов ртути, не вошедших в реакцию, оттитровывают

I *1О М раствором глутатиона. Определение содержания общерастворимых

SH-групп проводят по формуле, как в примере 2.

Использование предлагаемого способа хранения биологических проб позволяет заготавливать и сохранять взятые для анализа пробы в течение продолжительного времени (до 30 дней) .с надежным сохранением имеющегося уровня SH-групп.

Способ прост в осуществлении и может быть использован в клинических и экспедиционных условиях, исключающих необходимость немедленного использования проб.

Формула изобретения

Способ хранения биологических проб для определения сульфгидрильСоставитель С.Малютина

Техред М. Надь Корректор Г.Назарова

Редактор Л.Пписак

Заказ 357 63 Тираж 882 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

5 905788 d нык групп путем химической обработки сульфосалициловую илн трихлоруксуспробы, отличающийся ную кислоту до рН 2,0-2,5. тем, что, с целью увеличения сро- Источники информации, ков хранения, пробу обрабатывают принятые во внимание при экспертизе

5;l(f4 М раствором хлористой ртути в s !. Апа1уй В1осИея, ч. 25, 1968, соотношении 1:2 и затем добавляют р. 192.