Способ получения термолабильного энтеротоксина кишечной палочки
СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕРМОЛАБИЛЬНОГО ЭНТЕРОТОКСИНА КИШЕЧНОЙ ПАЛОЧКИ путем ыравнивания микробной культуры на питательной среде, с последующим смыЬом микробных клеток , их разрушением, центрифугированием полученного лизата и.отделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, смыв проводят дистиллированной водой до концентрации 90-100. млрд. бактерий в 1 мл, полученную суспензию микроорганизмов инкубируют в течение 1,5-2 ч при 36-37С, а центрифугирование лизата ведут при 24-25с и 8-9 тыс. об/мин. & Р ko
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИН.3(5П, A 61 К 39 108
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ н автогсному свидвтнъству
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPbITMA (21) 2938589/28-13 (22) 10.04.80 (46) 23.02.83. Бюл. Р 7 ((72) В. К. Клеганов, Н. И. Романенкова и М. A. Мухленова (71) Ленинградский ордена Трудового
Красного Знамени научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Пастера (53) 576.8.097.29(088.8) .: (56) 1. Etkin S °, Gordan Б. L., "Studies on entегоtox in from
Escherichia col i assciated with
acute diarrhea in man", Ч. Laboratory clinical med.icine, 1971, v 78, р. 81-87.,.SUÄÄ 907900 A (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕРМОЛАБИЛЬНОГО ЭНТЕРОТОКСИНА КИШЕЧНОЙ
ПАЛОЧКИ путем, выравнивания микробной культуры иа питательной среде, с последующим смывом микробных клеток, их разрушением, центриФугированием полученного лизата и.отделени ем целевого продукта, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, смыв проводят дистиллированной водой до концентрации 90-100.млрд. бактерий в 1 мл, полученную суспензию микроорганизмов инкубируют в течение
1,5-2 ч при 36-37 С, а центрифугирование лизата ведут при 24-25 С и
8-9 тыс. об/мин.
Ф
907900
Составитель С. Мамотина
Редактор Л. Письман Техред,Z.Êàñòåëåâè÷,. Корректор В Вутяга
Заказ 6408/2 Тираж 713 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4
Изобретение относится к медицинской микробиологии, а именно получе нию препаратов энтеротоксина для идентификации энтеротоксигенных кишечных палочек - возбудителей холероподобных заболеваний у людей.
Известен способ получения термолабильного энтеротоксина кишечной палочки путем выращивания микробной культуры на питательной среде с последующим смывом микробных клеток, их разрушением, центрифугированием полученного лизата и отделением целевого продукта (1 ).
Однако известный способ трудоемок, так как требует использования 15 дорогостоящего и мало доступного оборудования и длителен по времени (для получения препарата требуется не менее 4-5 дней).
Целью изобретения является упро- 2р щение и ускорение способа.
Эта цель достигается тем, что способ получения термолабильного энтеротоксина кишечной палочки осуществляют путем выращивания микроб- 75 ной культуры на.питательной среде с последующим смывом микробных клеток, их разрушением, центрифугированием полученного лиэата и отделением целевого продукта, смыв проводят дистиллированной водой до концентрации
90-100 млрд. бактерий в 1 мл, полученную суспензию микроорганизмов инкубируют в течение .1,5-2 ч при 3637 С, а ценприфугирование лизата ведут при 24-25 С и 8-9 тыс.об/мин.
Пример. Штаммом кишечной па-. лочки, выращенным в течение 5-6 ч при 36-37 С в пробирке с 3-4 мл бульона Хоттингера (1:2, рН 7,2-7,4), засевают MRñî-пептонный агар (рН 7,2- 40
7,4) в чашках Петри (100 мм в днам.) .
По поверхности влажного (неподсушенного) агара шпаделем распределяют
1-2 капли бульонной культуры. Через
18-20 ч роста при 36-37 С на газон культуры каждой чашки наносят 3-3,5мл дистиллированной воды и смывают культуру при помощи шпаделя. Взвесь культуры на дистиллированной воде отсасывают с чашки пастеровской пипеткой в центрифужную пробирку. Концентрация такой взвеси составляет 90100 млрд. в 1 мл. Поэтому вэвесью можно пользоваться, не определяя всякий раз ее концентрации. Взвесь бактерий на дистиллированной воде ставят на 1,5-2 ч в термостат (3637 С), после чего дважды центрифугируют на центрифуге без охлаждения (при 24-25 C) при 8-9 тыс.об/мин. в течение 30-45 мин получая препарат в виде недосадочной, слегка опалесцирующей жидкости -.лиэата. Полученный препарат испытывают на соответствующих экспериментальных моделях на наличие термолабильного энтеротоксина.
Полученный препарат по своей биологической активности и специфичности не уступает ультразвуковому лизату, изготовленному по известному способу.
Предлагаемый способ ускоряет получение препарата по крайней мере в 2 раза (вместо 4-5 дней в течение не полных 2 дня). Он существенно сокращает рабочее время, занятое соответствующими операциями. Число процедур минимально, они лишены трудоемкости. Взамен ультразвуковой дезинтеграции (или других, также довольно грубых способов разрушения бактериальной клетки) по предлагаемому способу использовано непродолжительное щадящее действие дистиллированной воды. Упрощена и ускорена процедура центрифугирования.
Предлагаемый способ не нуждается в дорогостоящем и мало доступном оборудовании — в скоростной центрифуге с холодильной установкой, ультразвуковом дезинтеграторе или других заменяющих его аппаратах. Нет необходимости и в аппаратуре для встряхивания, используемой в ряде случаев для получения микробной массы. Отпадает также необходимость в наличии фильтровальных установок, миллипоровых фильтров, в аппарате для лиофильной сушки.
