Способ выявления ореолообразующих клеток лейкоцитов

 

Оп ИСАНИ Е изов итения

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советскик

Социапистическик

Республик ()930049 (5 l ) M. Кл. (6l ) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 15. 09. 76 (2! ) 2401670/28-13 с присоединением заявки М 2536529/28-13, 2598711/28-13 2933481/28-13 (23) Приоритет

G 01 bf 1/28 д 61 В 5/00

3Ьеудврственый каинтвт

СССР ю двлаи нзо4ретеннй н вткрыткй (53) УД К 616-091. .8(088.8) Опубликовано23. 05.82. Бюллетень ¹19

Дата опубликования описания 23.05.82 (72) Автор изобретения

M.Â. Голованов (7l) Заявитель (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ бРЕОЛООБРАЗУЮЦИХ КЛЕТОК

ЛЕЙКОЦИТОВ

Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано при обследовании больных в клинике.

Известен способ выявления клеток лейкоцитов путем приготовления мазков

S из суспенэии клеток периферической крови или лимфатической ткани Я.

Однако известный способ не позво" ляет выявить реактивные ореолообра10 эующие клетки иммунокомпетентной ткани.

Цель изобретения - выявление ореоло. образующих реактивных клеток иммунокомпетентной ткани.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу выявления ореолообраэующих клеток лейкоцитов, осуществляемому путем приготовления мазков иэ суспензии клеток периферической крови или лимфатической ткани, суспенэию клеток до приготовления мазков помещают в течение 10-10 мин в раствор, содержащий вес.Ф:

Хлористый натрий 1-20

- Тушь 0,6-2,6 или эритроциты 0,02-0,03

Вода Остальное

Способ осуществляется следующим образом.

К одной капле крови (0,03 мл) добавляют одну каплю (0,03 мл) клеточной суспензии иммунокомпетентной ткани (например, тимуса, костного мозга, селезенки, лимфатического узла и др.) и 4 капли (О, 12 мл) раствора неорганических ионов (например хлористого натрия) в концентрации

100-200 г/л. В течение 30 с все перемешивают, затем смесь помещают в камеру инкубации ("Плакметр"специальная камера для инкубации и подсчета бляшек, ореолов и др. объектов). Препарат инкубируют в те чение 10 мин при 18-2f С, затем подсчитывают максимальное количество ореолообразующих клеток иммуно930049 4

55 компетентных тканей в препарате при"уееличении микроскопа в 100 раз.

Ореолы вокруг некоторых клеток иммунокомпетентных тканей образуются е результате наблюдаемого отхождения от центральной клетки в радиальных направлениях остальных клеток (фоновых клеток: эритроцитов, клеток дрожжей, т.е. таких, которые сами ореолов не образуют) .

Количество исследуемой крови, а именно одна капля - позволяет про1 водить клинические анализы в массовом масштабе. С целью удешевления способа можно вместо крови (взвесь эритроцитов) брать суспензию клеток дрожжей, с той же плотностью клеток, что и плотность эритроцитов

s крови.

Количество добавляемого раствора неорганических ионов, а именно

4 капли, позволяет в пять раз развести кровь, чтобы создать оптимальные условия для формирования ореолов вокруг некоторых клеток. При большем разведении ореол как фигура существовать не будет, Концентрация электролита в пределах 10-20 . (100200 г/л) способствует оптимальным образом выявить ореолообразующие клетки иммунокомпетентных тканей; при концентрации меньше 100 г/л ореолы эа 5-10 мин не ббразуются, а при концентрации выше 200 г/л происходит высаливание белков, находящихся в плазме, что затрудняет процесс формирования ореолов. Перемешивание необходимо для равномерного распределения клеток и электролита е клеточной суспензии. Помещение капли смеси в плоской микрокамере ("Плакметр" или камера из предметного и покровного стекол) необходимо для наблюдения за формированием ореолов.

Инкубация при 18-22 С в течение

10 мин необходима для выявления мак. сймального количества ореолообразующих клеток. Среди неорганических ионов, используемых для обнаружения ореолообразующих клеток, можно использовать хлористый натрий, хлористый калий, иодистый калий, бромистый натрий и другие соединения одновалентных катионов.

Пример 1. К одной капле (0„03 .мл) крови добавляют 1 каплю (0,03 мл) клеточной суспензии иммунокомпетентных тканей и 4 капли (0,12 мл) 15l раствора бромистого

35 ю

45 натрия. Все перемешивают и одну каплю (0,03 мл) смеси помещают в плоскую камеру высотой 100 мкм. Камеру изолируют от воздуха вазелином, Через 10 мин инкубации при 18-22 С подсчитывают количество образовавшихся ореолов в поле зрения микроскопа при увеличении в 100 раз.Раствор готовят обычным способом. К 15 r кристаллического порошка добавляют дистиллированную воду до метки 100 мл.

Клеточную суспензию иммунокомпетентных тканей готовят, используя метод бесферментной дезагрегации тканей.

Плоскую камеру держат в горизонтальном положении. Перемешивание и отмеривание капли проводят с использованием глазной или другой пипетки.

Пример 2. К одной капле (0,03 мл) крови добавляют 1 каплю (0,03 мл) клеточной суспенэии иммунокомпетентных тканей.и 4 капли (0,12 мл) 20 -ного раствора хлористого натрия и 0,6i туши. Все перемешивают и одну каплю (0,03 мл) смеси помещают в плоскую камеру высотой

100 мкм. Камеру изолируют от воздуха вазелином. Через 10 с инкубации при о

18-22 С подсчитывают количество образовавшихся ореолов в поле зрения микроскопа при увеличении в 100 раз.

Предлагаемый способ позволяет выявить ореолообраэующие клетки иммунокомпетентных тканей, обладающие свойством не разрушать эритроциты, а только отодвигать их на расстояния до 100 мкм за счет формирования электрически заряженной коллоидной массы из гликокаликса в отличие от бляшкообразующих клеток, * которые синтезируют и выделяют антитела, лизирующие эритроциты. Следовательно, ореолообраэующие клетки не синтезируют антитела-гемолизины и этим отличаются от известных иммунологических бляшкообразующих клеток.

В результате применения предлагаемого способа можно в течение

5- l5 с выявить ореолообразующие клетки (электрически активные клетки), количество ко-.орых могут свидетельствовать о ранней иммунологической перестройке в организме (исследование пунктатов иммунокомпетентных тканей и органов, крови), в этих тканях ореолы образуют полиморфноядерные лейкоциты, а также бластные клетки, или свидетельствовать о

Составитель Л. Стебаева .

Редактор Т. Киселева Техред M. Tenep Корректор А. Дзятко

Тираж 883 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, N-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 3453/52

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул; Проектная, 4

5 930049 6 физиологическом состоянии опухоле- " что, с целью выявления реактивных вой ткани - ореолы образуют юные клеток иммунокомпетентной ткани, недифференцированные опухолевые суспензию клеток до приготовления клетки, их количество может отражать мазков помещают в течение 10-10 мин состояние ткани в динамике. в раствор, содержащий, вес.3

Хлористый натрий 1"20

Тушь 0,6-2,6

Формула изобретения или эритроциты 0,02-0,03

Вода Остальное

Способ выявления ореолообразующих l0 Источники информации, клеток лейкоцитов путем приготовле- принятые во внимание при экспертизе ния мазков из суспензии клеток пери" 1, Кост Е.А. Справочник по клиниферической крови или лимфатической ческим лабораторным методам исследоткани, отличающийся тем,. вания. M. Медгиз, 1975, с. 38-159. !