Способ контроля активности препарата маллеина

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советсиик

Соцнапистнчесник

Ресиублнн ()933098 (61) Дополнительное к авт. свнд-ву (22) Заявлено 22.08.80 (21) 2976186/30-15 с присоединением заявки,% 2987590/30-15 (23).приоритет

Опубликовано 07.06.82 ° бюллетень № 21 (5I)M. Кл.

А 61 К 39/02

1всудаустванны11 квинтет

CCCP йв Ленам нзебрвтеннй н oroyaw11 (53) УЯ К616 г 682..27(088.8) Дата опубликования описания 07.06.82. сюннн

1 .Г„

:. . > ный;.;институт

А.Н.Шаров, Н.К.Букова, А.А.Гринев, В.M.

А.А.Сорокина и В.А.Апехин (72) Авторы изобретения

Всесоюзный государственный научно-контр ветеринарных препаратов (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОНТРОЛЯ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА

ИАЛЛЕИНА

Предлагаемое изобретение относится к области ветеринарной иммунологии, в частности к разработке способа контроля активности -сапного аллергена маллеина.

В связи с ликвидацией сапа в нашей стране и отсутствием лаборатор-. ной модели невозможно проведение контроля активности маллеина. Вслед ствие этого выпуск производственных серий маллеина осуществляется без проверки активности препарата, что сказывается на его стандартности и эффективности исследования животных на сап.

Импорт значительного количества лошадей, в том числе из стран, неблагополучных по сапу, требует строгого контроля за состоянием страны по данному заболеванию. Поэтому разработка лабораторных способов контроля активности маллеина является актуальной проблемой.

В настоящее время известен способ проверки активности маллеина на больных сапом лошадях во внутрикожной градуированной пробе в дозах 2; 1;

0,5; 0,25 и 0,125 мг, которые сравS нивали с контропьной серией маялеина, Реакцию учитывали по величине припухлости кожи 111.

Недостатком этого способа является

1О опасность заражения сапом человека, а отсутствие на территории СССР сапных лошадей не позволяет использовать его в нашей стране.

Известен также способ проверки активности малленна на крупном ро15 гатом скоте, сенсибилизированном подкожным введением убитой сапной культуры в смеси с парафиновым маслом, путем внутрикожной инъекции испытуемой и контрольной серий препарата в цельном виде с последукш1им учетом реакции по среднему диаметру папулы на месте введения. Активность испытуемой серии выражается

40

3 93309 в процентах активности контрольной серии (2 ).

Недостатком этого способа является невысокая его чувствительность и использование в качестве лабораторной модели дорогостоящего животного - крупного рогатого скота.

Цель изобретения — повышение чувствительности способа.

Цель достигается благодаря тому, 10 что в качестве опытного животного используют морских свинок, убитую культуру ActiпоЬас111us ma 11ei разбавляют физиологическим раствором до концентрации 0,75 г/мл — 4,5- 15

5 5 частей, а в качестве адъюванта используют легкое минеральное масло

8,0-9,0 частей, ланолин 1,0-2,0 части, раствор испытуемого препарата маллеина вводят по 0,09-0,11 мп в двух дозах с шагом разведения 10, а в качестве контрольного препарата бе.берут сухой очищенный маллеопротеин и вводят его в дозах 1 и 10 единиц действия.

II р и м е р I. Для изготовления

150 мп препарата для сенсибилизации морских свинок взвесь сапной культуры готовят следуюшим образом.

В стерильную центрифужную пробирку, предварительно взвешенную на аналитических весах, вносят убитую бакмассу и центрифугируют при.

6 тыс. об/мин в течение 15 мин. Насадочную жидкость отбрасывают и пробирку вновь взвешивают. Осадок

35 разводят стерильным физиологическим раствором с таким расчетом, чтобы в 1 мл взвеси содержалось 0,75 r культуры.

Затем смесь из предварительно разогретых до 70 С в водяной бане

85 мл легкого минерального масла для вакцин и 15 мл ланолина помещают в стакан гомогенизатора. Туда же при помешивании наливают взвесь

45 сапной культуры в физиологическом растворе в объеме 50 мл.

Полученную смесь гомогенизируют при 5 тыс. об/мин в течение

5 мин и готовой сапной эмульсинантиген фасфасовывают в стерильные ампулы или флаконы.

Пример 2, Для изготовления сапного эмульсин-антигена возможно применение сухой бакмассы. Чтобы приготовить 150 мл антигена делают навеску из 37,5 г сухой сапной бакмассы и разводят ее стерильным фи8 4 зиологическим раствором в объеме

50 мп.

Антиген может сохраняться в течение года при 6-8 С. Перед применением его прогревают в водяной бане при 370Ñ и тщательно взбалтывают.

Морских свинок сенсибилизнруют введением О,IgO Ol мп антигена в заднебедренную группу иппц. Через месяц животные могут .быть использованы для контроля маплеина.

Степень сенсибилизации, достаточная для проведения контроля активности маллеина, сохраняется в течение 14 месяцев (срок наблюдения), Предлагаемый способ контроля активности маллеина заключается в следующем..

Сенсибилизируют морских свинок белой масти (допускается использование свинок других мастей с белым окрасом на боках) путем внутримышечного введения в заднебедренную группу мышц 0,1+0,01 мл сапного эмульсии-антигена, представляющего собой смесь из взвеси убитой сапной культуры на физиологическом растворе с концентрацией 0,75 г влажного осадка на мп — 45-55 мл (или из 3540 г лиофилизированной сапной культуры), 80-90 мл легкого минерального масла для вакцин и 10-20 ип ланолина. Затем через месяц после

1 сенсибилизации вводят внутрикожно с обеих сторон тела на боках по

0,1+0,01 мл испытуемый маллеин в цельном виде и разведении 1:10 и раствор маллеопротеина в дозах 1 и 10 ед по скользящей схеме, исключающей влияние места введения на интенсивность реакции.

Учет реакции проводят через сутки после инъекции маллеина и оценивают по среднему диаметру папулы, образующейся в месте введения препарата (в мм). Активность испытуемой серии маллеина выражают в ед/мл.

Пример 3. Сенсибилизацию морских свинок соответствунщей масти проводили путем внутримышечного введения в заднебедренную группу мышц О,1 мл сапного антигена. Антиген предварительно разогрели в о водяной бане при 37 С. Через 5 месяцев сенсибилизированным морским свинкам в количестве 11 гапов вводили внутрикожно по скользящей схеме

933098

1. Без метки

Голова

Спина

4, Крестец

5. . Без метки у6, Голова

8,0

6,5

13,0

13,5

8,0!

1 5

7,5

l3i0

11,5

I l 5

9,5

17,0

3 °!

1,0

7,0

15,5

11,0

9,5

8,5!

6,0

l3 5

4.

16,0

IOi 0

13,0

l4,5

S маллеин серии 68 в цельном виде ,(доза 1) и в разведении 1:10 (доза

2)» а затем — раствор маллепротеина в количестве 1 (доза 3) и

10 ед (доза 4) в объеме 0,1 мл в услввные точки инъекций в депилированнах участках коми на боках, Для разведения препаратов использовали стерильный физиологический раствор.

Каждую дозу испытуемого и контрольного препаратов вводили отдельным шприцем, маркированным в соответствии с ней.

Схема введения препаратов морским свинкам приведена в табл.. 1.

7. . Спина и т.д.. 3

Результаты учета реакции приведены в табл. 2.

Активность испытуемой серии мал леина определяют по формуле С. где А - сумма средних диаметров папул, образующихся на введе. нии контрольного препарата,  — сумма средних диаметров па» пул, образующихся на введе нии испытуемого препарата, С - содержание единиц действия (ед) в 1 мг контрольного препарата (125) .

Расчет:

s 296 .125 = !10 ед/мл

933098 8

Продолжение табл. 2

Интенсивность реакции на введение доз препаратов, мм контрольного испытуемого!

О ед

1 ед цельн. 1:10 ъ

3 4

16,0!

6,0

14,0

8,0

15 О

12 5

9,5

13,0

710

11,0

7,0

l0,5

13,5

10, 10 5

7,5

8,0

10 O

12в5

I0 5

12,5!

8,0

11 0

7,0!

7,0

10,5

13.

14,0

13,0

7,0!

14,0

8,5

12,5

9,5

137,5 178,5

199,0

336,5

296,0

Формула изобретения

Составитель Т.Тулякова

Редактор Г.Прусова Техред З.Фанта Корректор JIÄ Бокшан

Тираж 714 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 4000/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ контроля активности препарата маллеина, включающий подбор опытного животного,. сенсибилизацию его к маллеину путем введения взвеси убытих бактерий Actino"

Ьасi llus mal1еi с адъювантом, введение раствора инъекцируемого препарата маллеина и контрольного препарата с последующим учетом реакции, отличающийся тем, что, целью повышения чувствительности способа, в качестве опытного животH0Fo HcIIoIIb3gioT морских свинок убитую культуру с Actinobacillus mal1е1 разбавляют. физиологическим раст-4> вором до концентрации 0,75 г/мл

4 5 частей„ а в качестве адъюванта используют легкое минеральное масло

8,0-9,0 частей, ланолин 1,0-2,0 части, раствор испытуемого препарата маллеина вводят по 0,09-0,11 мл в двух дозах с шагом разведения, 10 а в качестве контрольного препарата берут сухой очищенный маллепротеин и вводят его в дозах и 10 единиц действия.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе !. Schnorrer J. Uber die Tchlerque1len der Иа1lein augenprobe.

M. tierartze. Monatsschr. 19 115, н. 7.

2. Huitema Н. Production of

mallein РРО Neth. J. vet. sei 1969, 2, 127-133 (прототип).