Способ диагностики инфаркта миокарда

 

ОП ИСАНИЕ

ИЗЬБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик („)982659 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 25.03.81 (21) 3261482/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (51) М. К .

А 61 В 10/00

Гееударстеелиый кемитет (53) УДК Ь 616-07 (088.8) Опубликовано 23.12.82. Бюллетень №47

Дата опубликования описания 28.12.82

IIo делам изобретений и еткрмтий (72) Авторы изобретения

Ф. Б. Левин и В. Ю. Тиунов! ь (7! ) Заявитель (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИНФАРКТА МИОКАРДА

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим способам диагностики.

Известен способ диагностики инфаркта миокарда путем определения активности креатинфосфокиназы в цельной крови измерением флюоресценции креатина в комплексе с нингидрином 11).

Однако этот способ является довольно трудоемким. Количество крови, необходимой для анализа, довольно велико. При массовых обследованиях больных значительно увеличиваются затраты времени на производство анализа.

Целью изобретения является ускорение анализа и уменьшение количества используемой крови.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу диагностики инфаркта миокарда путем определения активности креатинфосфокиназы в цельной крови измерением флюоресценции креатина в комплексе с нингидрином, каплю исследуемой крОви инкубируют с каплей изотонического раствора креатинфосфата при 20 — 23 С, затем аликвоту образовавшегося креатина наносят на полоску фильтровальной бумаги, дваж2 ды обработанной 1%-ным раствором нингидрина, подсушивают, смачивают 20%-ным раствором гидроокиси калия, далее определяют флюоресценцию образовавшегося пятна и при увеличении флюоресценции в опытной пробе по сравнению с нормой диагностируют инфаркт миокарда.

Способ осуществляют следующим образом.

Каплю крови инкубируют с каплей изотонического раствора креатининфосфата при 20 — 23 С. При этом происходит одновременное оседание эритроцитов и накоплению в смеси продукта креатинофосфокиназной реакции — креатина.

Аликвоту креатина насасывают из верхней части мениска и наносят на полоску фильтровальной бумаги, дважды обработанную !%-ным раствором нингидрина, подсушивают, смачивают 20%-ным раствором гидроокиси калия. Определяют флюоресценцию образовавшегося пятна при облучении, например, ртутной лампой с фильтром УФС вЂ” 3. При увеличении флюоресценции в опытной пробе по сравнению с нормой диагностируют инфаркт миокарда.

982659

Совпадение с клиническим

Активность

КФК по

Результаты анализа

КфК-микротест

Количество исследований диагнозом известному способу

Группа обследуемых

Предполагаемый

Соотношение флюоресценции пятен опыт/

/контроль количество диагноз

1-2 2-3 3-16

Инфаркт миокарда

0 0 28 Инфаркт 309-1946 28

100

9 сомнительных

Другие заболевания

38 29 9 0

21 21 0 0 случаев

Здоровы

Здоровые

В качестве стандартного раствора формента используется кровь здорового человека. В качестве стандартов сравнения используют шкалу флюоресцирующих красителей, соответствующих по спектру флюоресценции креатину с оценкой высушенных на бумаге светящихся пятен в баллах.

Пример. В ряд углубленных гнезд пластины для гемаглютинации помещают по капле изотонической субстратной смеси, содержащей в 5 мл 0,06 М трисацетатного буфера рН 6,8:

Креатинфосфат 2ч

Цистеин 1ч.

Аденозиндифосфат тринатриевая соль 13 ч.

Мдяо;7Н,О 4ч.

NaC1 11 ч.

В другой ряд гнезд помещают контрольную смесь (не содержащую АДФ). В опытную (субстратную) и контрольную смеси добавляют по капле исследуемой крови (с добавкой гепарина), а также в отдельные гнезда кровь здорового человека (в качестве стандарта). Пластинку с пробами выдерживают при 20 — 23 C -в течение 25 мин.

Затем торцом полосы хроматографической бумаги (дважды обработанной спиртовым

1О/о-ным раствором нингидрина) касаются мениска смеси, насасывая пятно надосадка иссЛедуемой крови в виде полукруга диаметром около 1 см. Пятно надосадка исследуемой крови и стандарта на бумаге слегка подсушивают, смачивают раствором 20% КОН, затем вновь подсушивают, после чего наблюдают зеленое свечение при облучении ртутной лампой с фильтром УФЦ вЂ” 3 (350 ммк), например, на аппарате для определения витаминов. При этом на шкале флюоресценции определяют интенсивность свечения в баллах пятен «опыта» и «контроля» и их

5 соотношение. Если соотношение опыт/контроль лежит в пределах 1 — 2 (что соответствует активности КФК здорового человека), диагноз инфаркта исключают, если это соотношение 2 — 3 — предполагают сомнительный случай. При соотношении выше 3-х ставят положительный диагноз.

Сопоставление результатов диагностики инфаркта миокарда представлено в таблице.

Способ КФК-микротест позволяет проводить диагностику инфаркта миокарда, результаты которой совпадают с диагностикой по известному способу и клиническому обследованию.

Способ пригоден для производства как одиночных, так и серийных определений.

При этом на производство 10 анализов требуется 35 мин., тогда как при аналогичном анализе по известному способу требуется

2,5 ч. Количество расходуемой крови по сравнению с известным способом снижено

25 более чем в три раза. Инкубацию смеси можно проводить как при комнатной, так и при

37 С (для ускорения).

Таким образом, изобретение позволяет ускорить анализ, уменьшить количество зо крови, забираемой у больного. Способ обладает малой трудоемкостью, не требует сложной аппаратуры, может быть использован вне лаборатории.

982б59

Формула изобретения

Составитель М. Ковалевская

Редактор Т. Кугрышева Техред И. Верес Корректор Г. Решетняк

Заказ 9766/6 Тираж 714 1Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, K — 36, Раушская наб., д. 4/6

Филиал ППП <Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Способ диагностики инфаркта миокарда путем определения активности креатинфосфокиназы в цельной крови измерением флюоресценции креатина в комплексе с нингидрином, отличающийся тем, что, с целью ускорения анализа и уменьшения количества используемой крови, каплю исследуемой крови инкубируют с каплей изотонического раствора креатинфосфата при

20 — 23 С, затем аликвоту образовавшегося креатина наносят на полоску фильтровальной бумаги, дважды обработанной 1о/о-ным раствором нингидрина, подсушивают, смачивают 20%-ным раствором гидроокиси калия, далее определяют флюоресценцию образовавшегося пятна и при увеличении флюоресценции в опытной пробе по сравнению с нормой диагностируют инфаркт миокарда.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Авторское свидетельство СССР № 531078, кл. G О1 N 33/48, 1974.