Способ получения моногалактозилдиглицерида

 

-а, „

Дальневосточный государственный университет и ВсесэювныД. научно-исследовательский институт прикладной биохимии -Й

Научно-производственного, обьединенйя Биохимреактнв (7I) Заявители (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОГАЛАКТОЗИЛДИГЛИЦ РИДА

Изобретение относится к медицинско% промышленности и касаешься получения. гликолипидов из сырья растительного происхождения.

Известен способ получения моногалак . тозилдиглицерида, включающий экстрак-.mIo липндов органически растворителем-нз сырья растительного происхождения с последующим растворением упаренногоэкстракта в хлороформе, выделением це - --.iO левого продукта на колонке с силикагелем и его элюцией смесью хлороформ -аце тон (1).

Однако известный способ не обеспечиВает достаточно Высокого ВыхОда. целевО го продукта, получаемого в смеси с пии, ментом.

Белью изобретения является повыше

7 ние выхода н чистоты целевого продукта..

Бель достигается тем, что в.способе - получения моногалактозилдиглицерида, включающем экстракцию липидов органи- —ческим растворителем нз сырья раститель ного пронсхожде ния с последующим рас2 творением упаренного экстракта в хлороформе, выделением целевого продукта на колонке с силикагелем и его элюцией смесью хлороформ-ацетон, экс тракции ацетоном подвергают водоросли Pe EVe Oa

% f 84 1, затем проводят их повторную экстракцию смесью хлороформ-ацетон при

HK cooTHoIIIeII9H l: 1, упаренный sKGTpBKT предварительно растворяют в смеси мета нол-гексан при их соотношении 1: 1 и доселе перерастворения в хлороформе въщеш » ют целевой продукт на колонке с силикагелем нри соотношений экстракт-силикагель 1:30, а элюцию целевого продукта смесью хлороформ-ацетон проводят при их соотношении 9: 1 и дополнительно нсполь зуют смесь хлороформ - серный. эфир при их соотношении /9:1/ - /8:2/.

Пример 1. a) получение экстракта. 0,7 кг сырой ткани водоросли PehltMo мгМ Ий измельчают на мясорубке, экстрагируют ацетоном (ткань.растворитэль 1:5) в гомогенизаторе в течение

3 мин, фильтруют. Остаток ткани экстра

3 993943 4 гируют дважды хлороформ-ацетоном 1:1 ... ход 230 мг. 27-42 колоночными обЬ (ткантрастворитель 1: 5). К ацетоновому емами элюируют моногалактозщщигпнцеэкстракту добавляют равное количество рид с примесью зеленого пигмента. Выхлороформа и небольшое количество воды ход 30 мг, чистота 98%. до Разделения на 2 фазы. Водный слой и > Общий выход целевого продукта 17,3% межслой отбрасывают. Нижний хлорофор- от общих липндов исходного экстракта. менный слой объединяют с хлороформ- Вьщеленный. продукт имеет структурацетоновыми экстрактами, упаривают до ную формулу: суха, перерастворяют в 20 мл метанол„, ю 1: 1 и провод т проточное 10 . 2 ееслееделелле. В леллеельлЗю ее елку с лл ) О Í О

1 л метанол-гексановой смеси 1: 1 вы Ц ливают обогащенный гликолипидамы экст- ОН H — С вЂ” Π— C — и ракт водоросли, перемешивают и оставля- ) o ют до полного разделения, после чего д „ Н р Π— р

tt (,0Н нижнюю метанольную фазу сливают в другую делительную воронку и добавля- R,Й . жирные кислм ы.

t ют до полного разделения. Процедуру по- . Для микро-тонкослойной. хроматографии вторяют 6 раэ, после чего нижний ме- целевого продукта использовали: танольный слой упвривают досуха и пере- .2О 1- одномерную хроматографию в системе растворяют в хлороформе. Из 0,7 кг во- ацетон-бенэол-вода 91:30:8. На пластиндоросли получают 1,5 r обогащенного ке, обнаруживается единственное пятно; гликолипидами экстракта, гликолипиды 2. двумерную: 1, направление хлороформсоставляют 74,2%. В их состав входят: -ацетон-метанол-муравьиная кислота моногалактозилдиглицерид 24,4%,дигалак- gg 1 50: 43: 43 . 9: 8 2, напРавление апетон-. тоэилдиглицерид - 30,5%, сульфохиновоз- бензол-муравьиная кислота-вода 200: илдиглицериц - 31,4%, неизвестный гли- .27: 2,7: 8,5. колипид — 1 3,6%. Двумерная микро-тонкослойная хромаВыделение моногалактозилдиглицерида тография показывает единственное пятно. на колонке с силикагелем. Жирные кислоты:

6) 45 г силикагеля cL40/100 и С14 ..О 1,4% Сщ .О. 0,7% . чехословакия) замачивают в хлороформе С qg 0 0.1% . С щ:1 4,6% и выливают, в колонку (диаметр 1,9; вы- С1Ь,О 5,9% С19.2 9,7% сота столбца адсорбента -.26 см). С1Ь:1 0p7% Сщ

1,5 г обогащенной гликолипидами C>z ..О 0,1% С 8 3 М3 1 5,4% фракции растворенной в 30 мл хлороформа С в »4 3 25,3%

35 садят на приготовленную колонку, исполь» Cga 4MG 16 8% зуя соотношение гликолипидный экстракт- С о: 4 3 1,2% силиклгель 1: 30 (г/г). Норма тока С . 5ы 3 14,6%

3,5 мл/мин. Молекулярный вес 795,30

1. 16 колоночных объемов (1,3 л) Пример 2, а) получение экстраксистемы хлороформ-серный эфир 9: 1 элюируют пигменты (желтые, оранжевые). Экстракт получают как в примере 1.

2, 23 колоночных объема (1,8 л) сис- б) Вьщеление моногалактоэилдиглицетемы хлороформ-серный эфир 8:2 элю- . Рида. Ва колонке с силикагелем. ируют зеленые пигменты;

34 r силикагеля с 40/100м (Чехо3. 3 колоночных объема (0,2 л) сис- словакия) замачивают в хлороформе и темы хлороформ-серный эфир 1: 1 элю- выливают в колонку (диаметр 1,9 см; ируют следы пигментов; высота столба адсорбента - 19 см).2,3г

4. 42 колоночных объема (3,4 л) сис - б гащенной гликолипидамн фракции, растемы хлороформ-ацетон 9:1. Первые пять творенной в 20 мл хлороформа, садят на

50 колоночных объемов отбрасывают. 6-26 приготовленную колонку, используя соотколоночных объемы собирают отдельно, ношение гликолипидный экстракт: силикакак содержащие основную часть монога- гель 1:15 (гlг) Норма тока растворилактозилдиглицерида, составляющего 85% теля 4,5 мл/мин. от всего количества моногалактозилдн- > Для элюции используют; глицерила в исходном липидном экстрак-. 1. 20 колоночных объемов (1,06 л) те или 15,3% от общих липндов исходного системы хлороформ . серный эфир 9:1. экстракта. Чистота продукта 99,5%. Вы- Элюируют KpacabIe IIHrMew-. и наблюда5 9939 ют проскок гликолипидов (моно-«AHl àïàêтозилдиглицерид, сульфохиновозилдигли ерид, неизвестный гликолипид). 2. 25 колоночных объема (1,3 л)сио темы хлороформ:.серный эфир 8: 2. Элю-ируются зеленйе пигменты с проскоком .гликолипидов.

3; 3 копоночиых объема (0,16л) системы хлороформ: сернйй эфир l: l. Злю-. ируются следы пигментов, небольшое . ко- )0 личество гликолипидов.

4. 50 колоночный объемов (2,6 л) системы хлороформ: ацетон 9: 1. Элюидют моногалактозипдиглиперид с примесью

: неизвестного гликолипида и дигалактозил» 15 диглицерида. Чистота целевого продукта составляет около 83%.

Использование предлагаемого способа въщеления моногалактозющиглиперида -по сравнению с известным способам позва ляет быстро и просто получить хроматографически чистый продукт за счет получения обогащенного гликолипндами эк- . стракта, его предварительной очистки от ps пщментов йротивоточным распределением и. разделения на силикагелевой колонке, с дочисткой щпментов смесями хлораформсерный эфир и злюцией целевого продукта хлороформ-ацетоном. 30

Получаемый моногалактозилдиглицерид в 40-45 раз дешевле стоимости прсьдукта близкой чистоты, выпускаемого в

США фирмой «Supe8co».

43 6

Формула изобретения

Способ получения моногалактозилди глнцерида, включающий экстракпию липидов.органическим растворителем из сырья растительного происхождения с последу ющим растворением упаренного экстракта в хлороформе, выделением пелевого продукта на колонке с силикагелем и его элюцией смесью хлороформ-ацетон, о тл и ч а ю m и и с я тем, что, с целью повышения выхода и чистоты целевого. продукта, зкстракции ацетоном подвергают водоросли РеРчеОа зч1 1с Ми, затем проводят их повторную зкстракпию смесью хлороформ-апетон при их соотношении 1: 1, упаренный экстракт цредварительно растворяют в смеси метанол-гексан при их соотношении 1: 1 и после перерастворения в хлороформе юаделяют целевой продукт иа колонке с силикаге лем при соотношении экстракт-силикагель

1:30, à злюцию целевого продукта смесью хлороформ апетон проводят при их соотношении 9: 1 и дополнительно используют смесь хлороформ - серный зфнр при нх соотношении /9 . 1/ — /8: 2/.

Источники информапии, принятые во внимание при экспертизе

1. И. ramada and М. 0hmori. The

separation and the quantitative determi na t i on of g l ucoand phos pug l yce r i

des from leaves by à single ы11«с1с соlumn chromabography. Sc i рар. col .

gen. educ. un 1ч. Tokyo, 1974, 24 (l), 53-63.

Составитель В. Брусиловская

Редактор Е. Хейфиц Техред С.Мигунова Корректор М. Шароши

Заказ 693/3 Тираж 711 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР

-. цо делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент», r. Ужгород, ул. Проектная, 4