Способ определения вазопрессорной активности гормонов задней доли гипофиза

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВХЗОПРЕС) СОРНОЙ АКТИВНОСТИ ГОРМОНОВ ЗАДНЕЙ ДОЛИ ГИПОФИЗА, включающий сэденку их биологического действия на животных , отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве животных используют ювенильных золотых рыбок Carassius auratus, а оценку биологического действия гормонов задней доли гипофиза производят по увеличению веса 1%1бок после их помещения в раствор испытуемого го1жона и повторного взвешивания через 25-30 мин и 5560 мин.

61 61}

СООЗ COBETCHHX СЭЮМЭВ Ю

РЕСПУБЛИК

3@0 A 61 К 37/24 A 61 К 37 32

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ASTOPCHOINf СВИДЕТЕЛЬСТВУ. ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПС ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3252627/30-15 (22) 27.02.81 (46) 23.04.83. Веаи. В 15 (72) О.В.Бурлакова, A.A.Ãåèäðîëéñ, Е.Н.Калистратова, Р.И.Хлимас,Д.В.Попов и З.A.Ñîêîëîâà (71) Иосковский ордена Ленина, ордена Октябрьской Революции и ордена

Трудового Красного Знамени государственный, университет им. И.В.Ломоносова н Каунасский завод эйдокринных препаратов (53) 631.811. 982 (088. 8) (56) .1. Авторское свидетельство СССР

9 331795, кл. A 61 К 17/06, 1968.

2. Временная фармакопейная статья

Ф 42-904-79, ИЗ СССР, 1979. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВАЗОНРЕС 1

СОРНОЙ АКТИВНОСТИ ГОРМОНОВ ЗАДНЕЙ

ДОЛИ ГИПОФИЗА, включающий оценку нх биологичесного действия на животных, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве животных используют ювенильных золотых рыбок Carassius

auratus, а оценку биологического действия гормонов задней доли гипофиза производят по увеличению веса рыбок после их помещения в раствор испытуемого гормона и повторного . взвешивания через 25-30 мин и 55.60 мин.

1012912 честве животных используют ювенильных золотых рыбок Carasstus auratus, а оценку биологического действия гормонов задней доли гипофиэа производят по увеличению веса рыбок после их помещения в раствор ие пытуемого гормона и повторного взве-. шивания через 25-30 мин .и 55-60 мин.

Пример. Берут 40 ювенильйцх рыб Carassius auratus, раэводщ

О испытуемый препарат гормона в де щи рированной воде, добавляя соответеф. венно 15 ; 7,5, 5, 3,75 2,5j 2,14 I

1,9; 1,7; 1,5 мл испытуемого препарата, доводя объем каждого рабочего раствора водой до 500 мп. Рыб взвешивают группами по 4 штуки. Вес Х-oN группы 40,870 мг, й-ой 38 120 мг, 18-ей 43,100 мг, ХУ-ой 36,250 мг, 2-й 39,180 мг; УХ-ой 36,440 мг, YII-ой 31 250 мг, YIII-ой 31,790 мг, ..ХХ oN ЗЬ,320 мг, X-ой 35,950 мг и помещают I-ую группу в концентрацию испытуемого вещества 15/500, П-ю

7,5/500, И-ю 5/500, ХУ-ю 3,75/500, У-ую 3/500, УХ-ую 2,5/500, УИ-ю

2 14/500, УИ-ю 1,9/500, ХХ-ю

1,7/500, Х-ю 1,5/500, держат при комнатной температуре на лаборатор" ном столе при обычном освещении.

Через ЗО мин взвешивают .вторично, вес I-ой группы 41,390 г; П-ой

38,570 г; Ю-ей 43,450 г;, ХУ-ой .36,610 .г; Y-ой 39,520 г,УХ-ой

36,310 r;; УП-ой 31,250 г;YIII-ой

31 690 г"IX-ой 36,300 г, Х-й

35,900 г, Каждую группу рыб снова

:помещают в те же растворы. Еще через 30 мин взвешивания повторяют. ,Bec I-ой группы 42,000 г П-ой

39,020 г;Ш-ей 43,970 r;IV-ой 36,980 г, У oN 39,810 r, YI-oN 36,200 r, YII-ой

31,190.r; Ylll-ой 31,640 г;ХХ-ой 36,200 r;

Х-ой 35,900 r.

Таким образом, увеличение веса рыб на 0,81% и более происходит в .растворах концентрации: 15/500

7,5/500; 5/500 i 3,75/500 и 3/500.

Наименьшая концентрация исследуемого вещества, вызвавшая увеличение веса рыб, составляет 3/500, таким образом, этот раствор имеет гормональную активность 0,03 ЕД/мп.

Определяем исходную активность препарата расчетным путем по формуООЗа

С и

55 где С60

0,03

Изобретение относится к фармакологии, а именно к способам определе ния активности гормональных препаратов, и может быть применено в Раз нообраэных эндокринологических и биохимических исследованиях. 5

Известен способ определения активности. гормонов задней доли гипофиза по активности, препарата адиурекрина, основанный. на его способности повышать проницаемость изолирован- 1 ного мочевого пузыря лягушки, который заключается в том, что в опорожненный мочевой пузырь лягушки вводят разведенный в 10 раз раствор

Рингера, удаляют обе доли пузыря, взвешивают их, переносят одну иэ долей в раствор Рингера со стандарт-. ным препаратом, а другую - с исследуемым„ взвешивают их повторно с интервалами 30-.35 мин и по снижению веса в интервале между 45 и 75 мин инкубации оценивают активность испытуемого препарата, причем испытуемый и стандартный препарат рекомендуют брать в концентрации 0,8 и

6, 4 мЕД/мл f 1 ).

Таким образом, согласно этому способу, можно количественно определить Содержание гормона лишь в очень узких пределах концентраций, к тому же тестирование достаточно осложнено изготовлением изолированного препарата мочевого пузыря.

Известен способ определения вазопрессорной активности гормонов задней доли гипофиза, основанный на понижении кровяного давления у ,петухов или на его повышении у крыс под действием вазопрессина, заклю.чающийся в том, что наркотиэированным животным (петухам породы белый 40 леггорн массой 1,2-2,2 кг или самкам белой крысы массой 300-400 .г ) в кровяное руело вводят раствор

Международного стандарта и испытуемый Раствор, причем каждая доза 45 должна быть введена не менее пяти раз, а определение проводят не . менее двух раэ с каждым образцом испытуемого препарата. Кровяное давление регистрируют на ленте кимографа, активность испытуемого препарата рассчитывают по формуле (2).

Однако этот способ трудоемок, требует достаточно высокой квалификации и использования дорогостоящих животных, которых употребляют только однократно, что в свою очередь сниьает точность способа, поскольку при определении активности препарата экспериментатор может себе позволить лишь небольшое число повторных испытаний.

Цель изобретения — упрощение способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу в каискомая активность гормона,.

ЕД/мп 1 общий объем воды, в который помещены рыбы; объем исходного препарата, добавленного к раствору ;

ЕД/мл — постоянная величина, выбранная эмпирически.

1012912

Составитель A. Филиппова

Редактор A. Козориз Техред И.Гайду Корректор Ю. Макаренко

Заказ. 2835/б .Тираж 711 . Подписное

ВНИИПИ Государственного кбмитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Поскольку объем а всегда постоянен и равен, как в предлагаемом случае, 500 мл, то формула упрощается и прививает вин1 0 0 03 000 10 н . п ЕП/ии

15 а в примере: — = 5 ЕД/мп.

3 .По окончании тестирования рыб помещают в условия обычного содержания. . Через сутки их можно использовать вторично.

При необходимости более точного определения активности препарата выполняют второй этап работы, производят те же действия, что и в пер. вом этапе, но в ряду рабочих разведений добавляевьайвобъем мл испытуемого препарата есть член арифметической прогрессии вида 15 и где и равно и определенп и+ ного на первом этапе рабочего раст-, вора, по которому вычисляют активность испытуемого препарата, а

О, 1, 2 .. °,. 9.

Для воспроизведения предлагаемого способа в раствор каждой концентрации достаточно поместить 3-5 штук золотых рыбок, поскольку такое количество необходимо к достаточно для получения статистически достоверных результатов. Предложенный метод разведения (Ряд 3 ны ров на первом этапе и 15 1 5 а и и в 500 мп раствора во втором этапе является оптимальным, поскольку позволяет определить активность с точ-

10 ностью до десятых долей едицины во втором случае и до целых — в первом.

Большой интервал разведейий снижает точность метода, а меньший вы,ходит за пределы чувствительности.

35 Ювенильные рыбы выбраны так, что после наступления половой, зрелос- ти (y золотой рыбки к 12 месяцам ) чувствительность к экзогенным гормонам становится зависящей от ста-. дии зрелости рыбы и в силу этого меняется периодически в течение полового цикла.

Точность предлагаемого способа при определении активности питуи25 трнна 0,01 ЕД/мл.

Предлагаемый способ в сравнении с известными более прост, точен и экономичен.