Способ определения токсичности сыворотки крови
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ СЫВОРОТКИ КРОВИ путем измерения степени воздействия исследуемой сывсротки на форменные.элементы кроэи здорового донора, о т л и ч .а ющ и и с я тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, для исследования используют эритроциты, -инкубируют их с исследуемой и контрольной сыворотками, затем отделяют эритроциты от сыворотки центрифугированием , определяют величины времени фильтрации опытньос и контрольных эритроцитов через мелкопористый фильтр и по их соотношению оценивают степень токсичности исследуемой сыворот- ; ки. §
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР пО делАм изОБРетений и ОтнРытий
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3341276/28-13 (22) 28.09.81 (46) 15.05.83. Бюл. 9 18 (72) Г.Я. Левин, Ю.A. Шереметьев и В.A. Мариничева (71) Горьковский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии (53) 616-074(088.8) (56) 1. Патент США Р 3944381, кл. 23-230В,, 1976.
2. Авторское свндетельство СССР
Р 740233, кл, G 01 N 33/46, 1980 (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТОКСИЧНОСТИ СЫВОРОТКИ КРОВИ путем измере„,SUÄÄ 1018015 А
3(59 С 01 И 33 48 А 61 В 10 00 ния степени воздействия исследуемой сыворотки на форменные влементы крови здорового донора, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью ускорения и упрощения способа, для исследования используют эритроциты, инкубируют их с исследуемой и контрольной сыворотками, затем отделяют эритроциты от сыворотки центрифугированием, определяют величины времени фильтрации опытных и контрольных эритроцитов через мелкопористый фильтр и по их соотношению оценивают степень токсичности исследуемой сыворот-, :ки.
101301 =
Составитель E.. Донцов
Редактор N. Бандура Техред О.,Неце Корректор И. Шароши
"Рипаж g7 3 Подписное
ББИИПИ Государственногo комитета СССР го делам изобретений и открытий
1. 3035,. Москва, n(-35, Раушская наб,„ д. 4/5
Заказ 3529/42
Филиал ППП Патент, г... Ужгород, ул, Проектная, 4
Изобретение относится к медицине и может быть использовано для определения токсических свойств сыворотки крови при различных заболеваниях.
Известен способ определения токсичности сыворотки крови путем культивирования ее на биологическом тест— материале с последующим измерением степени воздействия исследуемой сыворотки на тест-культуру (1 ).
Известен также способ определения .О
-,.îêñè÷íîñòè сыворотки крови при поражении печени, включающий культивирование исслед емой сыворо-.ки с лейкоцитарной пленкой в питательной среде, содержащей плазму крови человека и кролика в соотношении 2,5.1„- и измерение величины зоны миграции зрелых лейкоцитов (2 ).
Однако известный способ является длительным (более суток) и трудоем20 к им ..
Цель v.çoáðåòåíèÿ — ускорение и упрощение способа.
Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения ток=ичности сыворотки крови пу-тем измерения степени воздействия исследуемой сыворотки на форменные элементы крови здорового донора, для исследования иcïîëüçóþò эритроциты.
Г инкубируют их с исследуемой и контрольной сыворотками„ затем отделяют эритроциты от сыворотки центрифугированием, определяют величины времени фильтрации опытных и контрольных эритроцитов через мелкопористый фильTp 35 и по их соотношению оценивают степень токсичности исследуемой сыворотки.
Способ осуществляют следующим образом, 4О
Свежезаготовленную цитратную кров;-. донора центрифугируют при 200 g в течение 15:èB. Плаэму, обогащенную тромбоцитами, отсасывают,. а осадок эритроцитoB дважды отмывctloT в физиологическом растворе с последующим центрифугированием при ?000 g в течение 10 мин. Б клинике, в опытах испсльзуют эритооцить. донорской крови 1 группы (резус — отрицательные) или донорские эритроциты той же группы и резус принадлежности„ что и испытуемая кровь. Б экспериментах и" пользуют эритроциты того же вида животного, что и испытуемая кровь.
1, 5 мл эритроцитов дс -:îðà смешивают с 1, 0 мл испытуемой cûâîðîòêè и инкубируют при 37 С в течение 1,5 ч, После этого взвесь эритроцитов центрифугируют при 200 р в течение 15 мин, плазму отсасывают, а эритроциты отмывают в физиологическом растворе путем однократного центрифугирования при 2000 g в течение 10 мин.
Способность эритроцитов в деформации определяют путем измерения времени их фильтрации через мелкопорис тые фильтры известным методом.
Степень токсичности испытуемой сыворотки оценивают по отношению времени филь-..рации интактных эритроцитoB инкубированных с испытываемой сывороткой, к времени фильтрации тех же эритроцитов, инкубированных с сывороткой здорового донора. Бремя фильтрации нормальных контрольных эритроцитов составляет в среднем
6-7,5 мин (7,16+0,43 мин).
Способ позволяет определять ток—
oBчность сыворо — ê" крови за 2,5-3 ч.
П р и м o p 1, Больная Ч. получила ожог площадью 274 поверхности тела, из них 3-й степени — 12%, 4-й степени — 0,5В; ожог дыхательных путей, На 10-й день госле ожога степень токсичности сыворотки крови больной, определенная предложенным способом, составила 5,3, П р и и е р 2, Экспериментальный ожог 3-й степени на площади 204 поверхности тела у крысы. Через сутки после ожога степень токсичности сыворотки крови — 1,.57.
Таким образом,. предложенный cno:.,oá позволяет значителBHo проще и быстрее по сраьнению с извесФным из.::ерять степень токсичности сыворотки крови, а оценить не изученное ранее действие токсинов на эритроциты. При этом способ может быть использован,. в частности, для обнаружения и колиственного определения токсических веществ, образующихся при ожоговой б-олезни, à -:акже оценки эффективности ее лечения. Кроме того, предлагаемый способ может применяться для оп>еделения токсичности крови и при других заболеваниях (поражениях гече;,и, пачек и пр.).
