Способ определения возраста у самцов крыс

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЗРАСтА У СйМЦОВ КРЫС по морфометрическим | .. пекаэателям животных, о т л и ч а й;щ и и с я тем, что, с целью повыае4 ния точности. Дополнительно проводят О11 ределение концентрации тестостерог на в плазме крови и определение актяв11ОСТИ поглощения И -тестостерона клетками кожи гепитальной области, а отношение,.этих величин используют (ДЛЯ установления возраста.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

$$9A 61 В 10 0

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

И ABTQPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

i (21 } 3305392/30-15 (22) 02.03.81 ..(46) 07.07,83. Бюл.925 (72) Л.Ю. Сергиенко и Л.В. Панченко (71) .Харьковский научно-исследова-.тельский институт энйокринологии . и химии горионов (53) 599.323.4 (088.8) : (56} 1..Эападнюк И.П. и др. Лабора, тоРные животные. Кирв,,1974, с.15.

„„80„„! 026777 А (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВОЗРАСТ у. САМЦОВ КРЫС:по.морфометрическим пеказателям животных, о т л и ч а ю-. шийся тем, что, с целью повыще-

:ния точности, дополйительно проводят определение концентрации тестостеро- . на в плазме крови и определение активности поглощения Н -тестостерона

Клетками кожи гепитальной области, а отношение..этих величин используют,,:для установления возраста. I

1026777

Определение активности поглощения НЗ -тестостерона ан2июгенизависимой тканью - кожей проводят сле 60 дующим образом. Обездвижив животное с помощью эфирного наркоза, удаляют шерстяной покров на ограниченнои участке кожи мошонки. Кожу обра батиВжют спиртому протирают насухо 65

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использоваHo при проведении любых медикобиологических экспериментов °

Современная экспериментальная медицина.и биология требуют четкого . указания возраста или возрастного периода лабораторных. животных, на которых проведен тот или иной эксперимент, так как у животных различных возрастаных групп одни и те же воз- 10 действия вызывают не толжко количественно, но и качественно неоднотип. ные реакции. Отсутствие в научных публикациях указаний на возраст . экспериментальных животных лишает исследователей возможности сопоставлять результаты, полученные в разных лабораториях.

Наиболее точным способом определения возраста, а значит и Возрастного периода, является их паспортизация.

Однако при массовом разведении животных в питомниках эта работа по тем или иным причинам не проводится, и научно-исследовательские институты и лаборатории часто снабжаются не. паспортизированными животными.

Известен способ установления возраста животных по весу и длине ту. ловища (1) . . 30

Однако эти эоометрические параметры могут служить лишь ориентировочными показателями, так как в большей мере зависят не только от возраста, но -и условий содержания, кормления, от индивидуальных особенностей, линии и породы животного. Известный способ не обеспечивает точ. ного определения возраста, а зна,чит и возрастного периода лабора", торных животных. 40

Целью изобретения является повышение точности при определении возраста, у самцов крыс.

Цель достигается тем, что согласно способу определения возраста у самцов крыс по морфометрическим показателям животных, дополнительно проводят определение концентрации тестостерона в плазме крови и определение активности поглощения.

Нз-тестостерона клетками кожи гепитальной области, а отношение этих величин используют для установления . возраста.

Пример. Тестостерон плазмы крови крыс линии Вистар определяют спектрофлоуриметрическим.методом . стерильным тампоном и, захватив браншами стерильного пинцета, срезают ее стерильной бритвой. Захват кожи необходимо производить таким образом, чтобы после срезания выступили. мелкие капли крови, что свидетельст вует о проникновении в глубокие слои кожи. Ранку зашивают 2-3 швами, а кусочек кожи, взвесив на торсионных весах, помещают во флакон со средой

Игла, содержащей 0,5 мкк Н5. -тестостерона в 1 мл среды. Флаконы находятся в термостате при 37ОС, На флаконах отмечают номер животного и время йачала инкубации. Продолжительность инкубации биопсий - 1 ч.

После этого их извлекают, промывают в 3-х порциях подогретого до 37 С

0 раствора Хэнкса и гомогенизяруют в концентрированной мураввиной кислоте. Объем гомогената 1,5 мл. Гомогенат переносят во флаконы, зали- вают 15 мл диоксанового сцинтиллято ра и радиоактивность проб считывают на жидкостном сцинтилляционном счетчике СБС.-2 или на другом аналогичном приборе. Величину активности поглощения н Ъ -тестостерона биопсиям кожи выражают в имп/мин/мг ткани.

Получив указанные величины, определяют отношение концентрации тесто" стерона в плазме крови у данного животного к активности поглощения

его меченого аналога кожей моШонки этого же животного(Т/Ап) Величину отношения выражали в относительных единицах.

В таблице отражены результаты, полученные при подсчете отношения уровня тестостерона и активности поглощения Н> -тестостерона кожей генитальной области 150 крыс-самцов

1-6 дней жизни (период новорожденности или неонатальиый период), 120 крыс 15-30 дней жизни (неполовозрелый период), 80 крыс 34-45 дней жизни (период полового созревания1, 52 крыс 70-90 дней жизни подслучный период), 100 крыс (120300 дней жизни) репродуктивный период, 150 крыс 12-18 мес. зрелый возраст и 60 крыс 20-24 мес(период престарческих изменений).

Обнаружено, что несмотря на индивидуальные колебания уровня тестостерона.и активности кожной рецепции его мечечного аналога величина их отношения остается постоянной, прйсущей тому или иному возрастному периоду, что и позволяет использовать эту величину в качестве критерия возрастного периода.

Сохраняющееся внутри возрастного периода постоянство отношения указанных величин связано с тем, что эти физиологические параметры составляют 2 звена. функциональной системы "гормон-рецептор". Поскольку

1026777

Возраст животных

Отношение T/An

Возрастной период

1-6 дйей

15-30 дней

1i1 10 3

6,0 ° 10

1,3 ° 10

2,,6 ° 10-Э

3,0 ° 10 . 2 0 ° 10Э

1 5 10 3.

Иеонатальный

Неполовозрелый

Половое созревание

Подслучный

Репродуктивный

Зрелый возраст;.

35-45 дней

70-90 дней

120-300 дней

12-18 месяцев 20-24 месяца

Период предстарческих изменений ю Ю М ° ч ю

L.Составитель А, Макаров

Редактор М. Товтин Техред О.Веце Корректор 9. Макаренко

Заказ 4609/6 Тираж 713 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская иаб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4 сам тестостерон принимает участие в регуляции синтеза специфических рецепторных белков в тестостерончувствительных тканях, а активность рецепции и метаболизма в тканях является одним из факторов, опреде-: 5 ляющих .новообразование и секрецию гормона., между гормоном и активнос-.: тью его поглощения тканями постоян-: но поддерживаются определенные коли чественные соотношения, характерные 1 для того или иного этапа развития организма.

В, виварий .института из питомника. поступила партия крыс-самцов, возраст которых неизвестен., Партия сос )5 тоит из 120 животных, вес которых

110-200 г, т.е, по весу животные могут принадлежать как к неполово.зрелому, так и к репродуктивному возрастному периоду. 20

12 животных {4 шт.весом 110. 115. г, 4 - 150-170 r, и 4 - 190200 г) Исследуют уровень тестосте«

: рона плазмы (т), активность поглоще! ния НЭ -тестостерона (Argy и определяют отношение указанных величин p/An), Получены следующие результаты .. (приведены средние величины), J: группа: Т - 0,15 мкМ/л;

An - 50,0 имп/мин/Mr, Т/Лп - 3,О 1О Э

П группа: Т - 0,14 мкМ/л", An - 45 имп/миу/Mr, . Т/An - 3,0 ° 10 ф группа: Т. — 0,17 мкМ/л, An - 53,3 имп/мин/мг, T/Aï — 3,1 ° 10 у всех 3-х групп животных величина отношения исследуемых параметров одинаковая, характерная для репродукт вного периода. Оопоставление полученных результатов и .данных регистрации указанной партии живот«, ных в питомнике показало, что вывод . об одинаковом возрасте крыс верен, а разница в весе животных объясняет ся тем, что в питомнике не выдерживаются нормы рассадки животных по клеткам.

Преимущество предлагаемого спо.соба заключается в том,.что он осно .ван на определении физиологических i показателей, имеющих четкую возрастную динамику и не зависящих от условий содержания животного. . Способ позволяет объективизиро.вать процеса определения возрастных периодов крыс-самцов, т.е, повысить точность проводимых йаучных экспе-: риментов, сделать сопоставимими. результаты работ, проводящихся в разных лабораториях. После установления видовых уровней названных величин способ может быть применен 6пя оцределения возрастных перио;доз у особ мужского пола других видов животных и человека.