Циклический аналог ангиотензина,обладающий способностью ингибировать прессорное и миотропное действие ангиотензина

 

Циклический аналог ангиотензина формулы -Tyr-ne-His- rO-GIU

СОЮЗ С08ЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

-Arg Vat обладающий способностью ингибировать . гиотензина, прессорное и миотропное действие анГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3349493/23-04 (22) 30,10.81 (46) 15.01,86, Бюл. Ф 2 (71) Ордена Трудового Красного

Знамени институт органического синтеза АН Латв.ССР (72) Г.И. Чипенс, IO.Å. Анцанс, Д.А, Берга, З.Э.Лиепинып, И,П.Мисиня, З,IT, Пудане и И,П, Секацис (53) 547,964.4.07(088.8) (56) Anderson С.Н., Streeten D,Í.Р,, Ра1.а Kos Т.О. "Pressor response to

1-sar-8-а1а-angiotensin 11(Saralasin)

in hypertensive subjects", Circ.

Res., 1977, 40, 243.

Keim 1t.S °, Drayer S.I,, Сазе D,Â, "А role for reni.n in rebound hyper—

„„SU„„1067796 (я) 4 С 07 К 7/14 А 61 К 37/02

tension and encephatopathy after

infusion of saralasin acetate (sar -ala -angiotensin 11), New.

Enge. !,Ned., !976, 295, 1175.

Вегнер P.Ý,, Чипенс Г.И., Гринштейне И.В., Иьпплякова Н,В,, Афанасьева Г,А., Восекална И.А.

Синтез линейных и циклических аналогов ангиотензина, модифицированных в положении I и 5, — "Биоорганическая химия", Ф 7, 325, 1981. (54) ЦИКЛИЧЕСКИЙ АНАЛОГ АНГИОТЕНЗИНА, ОБЛАДА10ЩИЙ СПОСОБНОСТЬЮ ИНГИБИРОВАТЬ ПРЕССОРНОЕ И ИЮТРОПНОЕ

ДЕЙСТВИЕ АНГИОТЕНЗИНА. (57) Циклический аналог ангиотензина формулы — Туг — ле — «Яi s PrQ — G l и

1067796

Изобретение относится к новому биологически активному соединению— циклическому аналогу ангиотензина, обладающему способностью ингибировать прессорное и миотропное действие ангиотензина, и может найти применение в медицине.

Известны ингибиторы ангиотензина, например, саралазин и его аналоги, Однако они не находят применения, поскольку имеют относительно высокую собственную прессорную активность (0,5-1,5Т от прессорного эффекта ангиотензина), а иногда даже после введения очень низких доз вызывают длительное, опасное для жизни повышения кровяного давления, в некоторых случаях даже cBbIBfp 300 мм рт,ст. обладаюшим способностью ингибировать прессорное и миотропное действие ангиотензина, Описываемый циклический аналог ангиотензина синтезируют, замыкая в цикл линейный предшественник посредством амидной связи между аминогруппой б -аминокапроновой кислоты и )" карбоксильной группой глютаминовог кислоты в положении 8.

Описываемый циклический аналог ангиотензина — цикло-(Я=А! 1, А г ), !

66, g - - 1ц 1 -ангиотензин синтезируют по схеме, представленной на чертеже.

Пример, Для синтеза цикло(-.Е = Ak4, А ь), Ке, g- Ри 1 — ангиотензина 11 использовали аминокислоты и их производные фирмы "Реанал", Все аминокислоты имеют L -конфигурацию.

Все температуры плавления, определяемые в открытых капиллярах, приведены без,поправок, Индивидуальность всех полученных соединений контролировали тонкослойной хроматографией на силикагелевых пластинках марки

"Мерк". Приведены хроматографические подвижности Ry в следующих системах:

Л вЂ” хлороформ:этилацетат : этиловый спирт : уксусная кислота: вода (85 : 8 : 5 : 2 : 0,25);

Б — хлороформ : метиловый спирт: уксусная кислота (85:10:5);

 — хлороформ : этиловый спирт н-бутиловый спирт : этилацетат : вода (10:6:4:3:1);

Известны циклические аналоги ангиотензина, являющиеся ближайшими структурными аналогами описываемого г соединения -(дез- Аз, цикло- (— Н

5 = !.р )) — ангиотензин 11 и (дез- Аз, цикло-j И =Огг,(РЬ е 4

Поставленная цель достигается описываемым циклическим аналогом ангиотензина формулы (1!

à — хлороформ : этиловый сгирт изо-пропиловый спирт; этилацетат : вода (10;6:4:3:));

Д вЂ” н-бутиловый спирт : уксусная кислота : вода (4:l:1);

Š— этилацетат : н-бутиловый спирт : уксусная кислота вода (2:!:1:1);

Ж вЂ” этилацетат : пиридин : уксусная кислота : вода (5:3:1:2);

3 вЂ,н-бутиловый спирт : пиридин вода : уксусная кислота (15:10:12:3) 1

И вЂ” н-бутиловый спирт : пиридин уксусная кислота : вода (4:1:1:2);

К вЂ” н-бутиловый спирт : пиридин вода : уксусная кислота (48:20:5.:24), а также электрофоретическая подвижность по отношению к гистидину Ег,; на бумаге FN — 15 в 5 н.(рН 1,4) уксусной кислоте.. Для всех соединений

45 данные элементарного анализа удовлетворительно соответствовали вычисленным значениям содержания С, Н, N.

Анализ аминокислотного состава выпол. няли на приборе Liguimat III, ФРГ, 50 !, Метиловлгй эфир трет-.бутилоксист карбонил- N -бензил-гистидил-пролина (3).

К охлажденному до 0 С раствору

34,5 г (О,! ммоль} трет-бутилоксикарбонил- l! -бензил- гистидина (1) и

13,5 r (0,1 ммоль) 1-гидроксибензотриазола в 200 мл диметилформамида (ДМФА) приливают раствор 20,6 г

3 l0 (0,1 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в 60 мл ДМФА, выдерживают 1 ч при (-2) †(+2) С и добавляют охлажденный о до -2 С раствор метилового эфира пролина, приготовленный добавлением

13,8 мл (О,! ммоль) триэтиламина к охлажденному до -10 0 раствору

16,6 r (0,1 ммоль) гидрохлорида метилового эфира пролина (2) в 50 мл

ДИФА (выпавший осадок хлористого триэтиламмония отфильтровывают).

Реакционную смесь выдерживают

24 час при 4 С, осадок (дициклогеко силмочевина) отфильтровывают и маточник упаривают в вакууме. Остаток растворяют в 300 мл зтилацетата и промывают последовательно 5 .-ным бикарбонатом калия, водой, 5 -ным бисульфатом натрия, водой, высушивают над

Na

Р 0 /KOH.

Выход: 41 г (90X); F!, =0,65 (рН 1,91; Rg =0,7 (В); Rf, =0,9 (Ж);

R = 0,42 (Д) .

2, Дигидрохлорид метилового эфира

К -бензил-гистидил-пролина (5)..

К раствору 41 r (0,1 ммоль) метилового эфира трет-бутилоксикарбонил" -бензил-гистидил-пролина (3) в

200 мл уксусной кислоты. добавляют

87,5 мл (0,35 ммоль) 4 н.раствора соляной кислоты в уксусной кислоте.

Выдерживают при 20 С 30 мин. Упаривают в вакууме. Остаток растирают с эфиром, отфильтровывают и высушивают в вакууме над Р О /КОН.

Выход: 37,4 г (97 ); т.пл. 8082 С;Е д; = 1,1 (рН 1,9); Ry = 0,28 (В) R f = Оэ 16 (Д) R y = О ° 64 (Ж) .

Е!айдено, С 53,67; Н 6,2; N 13,0.

С з Н И 05 2ПС1, Вычислено, : С 53,00; Н 6,1;

Л 13 05.

3. Метиловый эфир, трет-бутилоксикарбонил-изолейцил-N -бензил-гистидил-пролина (6) ° о

К охлажденному до 0 С раствору

19,9 r (86 ммоль) трет-бутилоксикарбонил-изолейцина (4) и 11,62 r (86 ммоль) 1 гидроксибензотриазола в 150 мл метиленхлорида приливают раствор 17,74 r (86 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в 100 мл метиленхлорида, выдерживают 1 ч при (-2)(+2) С, добавляют охлажденный ро о

0 С раствор метилового эдьира М о Щ бензил-гистидил-пролина (5 ), приго67796 4 товленный добавлением 23,74 чл (172 ммоль) триэтиламина к охлажденному до -1О C раствору 37 г (86 ммоль) (5) в 150 мл метилепхлорида (осадок хлористого триэтиламмония отфильтровывают).

Реакционную смесь выдерживают

24 ч при +4 С, осадок (дициклогексил. мочевина) отфильтровывают, фильтрат промывают последовательно 5 -ным бикарбонатом калия, водой, 5 -ным бисульфатом натрия, водой, высушивают над Ма БГ4/MgSO и упаривают досуха в вакууме. Остаток растирают с гексаном, осадок отфильтровывают.

Высушивают в вакууме над Р Г5./KOH.

Выход: 43,6 г (89 ); Е =0,57 (pH 1,9); Я =0,74 (В); К =0,91 (Ж);

R = 0,42 (Д), 4. Метиловый эфир трет-бутилоксикарбонил-О-бензил-тирозил-изолейцилЙ" -бензил-rHcwupmt-пролина (9).

К охлажденному до 0 С раствору

23 г (42 ммоль) дигидрохлорида мети2 лового эфира изолейпил-Й -бензилгистидил-пролина (8), полученному с

96 . выходом удалением трет-бутилоксикарбонил-группы из соединения (6) согласно методике 2, в 100 мл ДМФА при перемешивании добавляют 11,6 мл (84 ммоль) триэтиламина, осадок хлористого триэтиламмония отфильтровывают и к фильтрату добавляют раствор 20,7 г (42 ммоль) нитрофенилового эфира трет-бутилоксикарбонил-0бензил-тирозина (7) в 100 мл ДМФА, Выдерживают при комнатной температуре 48 ч, ДМФА отгоняют в вакууме, остаток растворяют в этилацетате и промывают последовательно 5 -ным би40 карбонатом калия, водой, 5 .-ным бикарбонатом натрия, водой, высушивают над Na>SO

К =0,62 (Д) .

Найдено,7,: С 66,6; Н 6,97;

N 9,99. С46 E158N6n S

Вычислено,7: С 67,13; Н 7,1;

N 10,21.

5,Дигидрохлорид метилового эфира0-бензил-тирозил-иэолейпил-й -бенэил-гистидил-пролина.

Получают согласно методике 2.

Выход 95 ; т,лл, 88-90 Г; Е „.

0,8 (рН 1,9); Rg = 0,54 (В);

Й = 0,89 (Ж), 1067796

Найдено,X: С 61,05; Н 6,47;

N 10, 11, С4 1! N О ° 2НС1, Вычислено ° Т: С 61,87; Н 6,59;

N 10,56.

6, Иетиловый эфир трет-бутилокси- 5 карбонил-валил-О-бензил-тирозилизолейцил- Й -бенэил-гистидил-пролина (12), К охлажденному до 0 С раствору 15 г (18 ммоль) дихлоргид- . рата метилового эдира-О-бензил-тирозил-изолейцил-N -бензил-гистидил.пролина (11) в 60 мл Д!!ФА добавляют

6,5 мл (38 ммоль) диизопропилэтиламина, перемешивают 5 мин, добавляют 5,7 г (26 ммоль) пентафторйенилового эфира трет-бутилоксикарбонил-. валина в 20 мл ДМ@А и выдерживают

48 ч при 20 С. Реакционную смесь вью ливают в 400 мл насьш енного раствора хлористого натрия, Выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой и высушивают в вакууме над

P 0 /VOH, промывают эфиром, высушивают в вакууме над P 0 /КОН.

Выход: 17 r (98X); т,лл. 176178 С; Rg = О 39 (Б); Ry =О 71 (В);

К О 65 (1); Е>, 0»55 (рН 1 9)

7. Гидразид трет-бутилоксикарбонил-валил-О-бензил-тироэил-изолейцил-N -бензип-гистидил-пролина (14) .

К раствору 16 5 r метилового эфира трет-бутилоксикарбонил-валил-Обензил-тироэил-изолейцил- N -бенэил- З1 гистидил-пролина в 150 мл ДМФА добавляют 150 мл 50%-ного раствора

1гидразина в ДЕФА, выдерживают при комнатной температуре 64 ч, выливают в 100 мл насьш енного раствора хлорис- 40 того натрия, осадок 0TAHJIüòðîâûBàþò, промывают водой и высушивают в вакууме над Р Р,/КОН, Выход: 14,84 r (90Т); т.пл.183185 С;Е ;з= 0,54 (pH 1,9); К

= 0,48 (В); Rg = 0,12 (Л).

Найдено,X С 64,97; Н 7,12;

N 13,41 С5оF 67N>0> °

1Ъ|числено,7: С 65,13; F! 7,32;

N 13,66.

8, П -Нитробензиловый эфир третбутилоксикарбонил-валил-0-бензилтирозил-изолейцил- N -бензил-гистиi 1П дил-пролил-глутаминовой кислоты (16)

К охлажденному до -20 Г раствору о

9,22 г (10 ммоль) гидразида третбутилоксикарбонил-валил-О-бензил1 1И тнрозил-изолейцил-N -бензил-гистидил-пролина (14) в 90 мл ДЕФА добавляют 10 мл (40 ммоль) 4 н.раствора соляной кислоты в этилацетате, 1, 15 мл (10 ммоль) трет-бутилнитрита в 10 мл ДЕФА и выдерживают 30 мин при -20оС и !О мин при -5 С. Реакцион. о ную смесь охлаждают до -35 Г и прибавляют охлажденный до -10 С раствор

5,52 мл (40 ммоль) триэтиламина в

10 мл ДЕФА и при -20 С раствор ac†- ив о нитробензилового эфира глутаминовой кислоты (15), приготовленный добавлением 1,38 мл (10 ммоль) триэтиламина к охлажденному до 0 С раствору о

3;7 r (10 ммоль) хлоргидрата нитробензилового эфира глутаминовой кислоты в 10 мл ДИФА (осадок хлористого триэтиламмония отфильтровывают), Выдерживают при +4 С 24 ч, ДМФА упаривают в вакууме, остаток растирают водой и фильтруют. Высушивают в вакууме над Р О /KOH.

Выход: 9,25 г (797); т.пл. 155156 Г;Ед; = 0,49 (рН 1,9); R

= 0,88 (В); И = 0,68 (Д), 9, Дигидрохлорид a -rl- íèòðoáåíýèлового эфира валил-О-бензил-тирозилизолейцил-N" .и-бенэил-гистидил-пролилглутаминовой кислоты (18).

Получают согласно методике 2 изм -И-нитробензилового эфира трет-бутилоксикарбонил-валил-О-бензил-тироэил-изолейцил-N -гистидил-пролилглутаминовой кислоты (16), Выход: 96X ; т.пл, 162-164 Г; — 0,58 (PH 1,9)1 Rg = Оэ62 (Г) ф

R = 0,73 (Е); Й = О,бб (И), l0.М -и-нитробензиловый эфир трет-бутилоксикарбонил-аспарагинилN -нитроаргинил-валил-О-бензил-тироG зил-изолейцил-!! -бенэил-гистидилпролил-глутаминовой кислоты (19), К охлажденному до Г С раствору о

0,23 r (5,3 ммоль) трет-бутилоксикарбонил-аспарагинил-N --нитрсаргиниG

7 на (17) и 0,14 r (10,6 ммсль) 1-гидроксибенэотриазола в 25 мл ДЕФА приливают раствор 0,09 r (4,4 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в 5 мл

ДМФА, выдерживают 1 ч при (-2)-О С и добавляют раствор аминокомпоненты, приготовленный добавлением 0,15 мл (8,8 ммоль) ди-изопропилэтиламина о к охлажденному до О Г раствору 0,5 г (4,4 ммоль) ди-хлоргидрата (18) в

40 мл ДЕФА. Реакционную смесь вью держивают при+4 С 48 ч,отфильтровывают осадок дицикломочевины и фипьтрат

7 1067796 8 тоящую из 200 мл на" 14. g — пентафторфениловый, a — и— лористого натрия нитробензиловый эфир Я- аминокапронилраствора бикар- аспарагинил- М -нитроаргинил-валилс ок отфильтровы- О-бензил-тирозил-изолейцил-N -бен-, дой, Очищают вы- зил-гистидил-пролил-глутаминовой матографией на кислоты (24) ° е Б, Получают согласно методике 2 из

2Ж); т,пл. 205- соединения (23);

); Rg =0,57 (Д), Выход: 937; Rg = 0,58 (Е); Ry

74; Р 6,41; lp = 0,62. (Ж); Rg = 0,47 (И) .

19 °

15,М вЂ” и-нитробензиловый эфир иик4

8 13; Н 6,37; ло-tf -аминокапронил-аспарагинил-k —нитроаргинил-валил-0-бензил-тирозилк -n-нитробен- изолейцил-N -бензил-гистидил-пролиларагинил- 1 -нитро 15 g -глутаминил ) (24). зил-тирозил-изо- 0,21 г (0,12 ммоль) соединения

Ф дил-пролил-глу- (24) растворяют в 10 мл ДИФА, добав21), ляют 300 мл диоксана и прн +12 С доо о методике 2 из бавляют 0 012 мл (О 35. ммоль) диизопропилэтиламина в 100 мл диоксана, 176-180 С;

20 перемешивают при 20 С 48 ч, упаривают о

И = 0,63 (Ж); в вакууме, остаток растирают эфиром, Очищают на силикагеле в системе В. зиловый эфир трет. Выход: О, 01 8 г (1 07); R =О, 35 (В);

-аминокапронил- 5 R g =0,41 (Д); R g = О, 87 (3) . оаргинил-валил-0- 16, Цикло-t-(Z-Ak k,Rsvp) aQe 2t-Ceps ейцил-k -бензил- . ангиотензин II, таминовой кисло- К раствору 0,018 г (0,012 ммоль) соединения (24) в 5 мл смеси метао 0 C 0 4 r

Ф

30 нол-уксусная кислота-вода (5:1:1) нию (21) в 20 мл прибавляют паладиевую чернь и гидмл (0,9 ммоль) рируют 24 ч. Катализатор отфильтроа и 0,18 r вывают, фильтрат упаривают, к остатторденилового ку добавляют 5 мл этанола и упариикарбонил-Я-ами- вают ° Остаток промывают 2 мл этанола, ы (20) в 5 мл З5 осадок отфильтровывают, Полученный ри комнатной тем- продукт растворяют в 5 мл воды и лио-. отгоняют в ва- филизуют. ирают эфиром, Очи Выход: 0,011 г (73,3X); R =.0,4 Ж в системе В.. Оэ45 (3); Rg = О ° 3 (К) °

4,57); R< 40 Аминокислотный состав: Al k -0,98; (К), Asn — 1, 14;Аго — 1,02; ЧаЯ-О,91; ениловый, 0(. -n нит Туг — 1, 04; eke -1, О; Hi 5 -1 ° 09 ° Р О -1,? рет-бутил-ок си- 4 я — 1, 12.

1 онил-аспа аги- Исследована биологическая актив45

55 выливают в смесь,сос сьш1енного раствора х и 30 мл насьш енного боната натрия. Осад вают и промывают во сокоэффективной хро силикагеле в систем

Выход: 0,47 г (7

207 С; Rg = 0,37 (В

Найдено...: С 57, N 15,39, С Н 11 i6 О

Вычислено,7: С 5

N 15,06.

ll. Дигидрохлорид зилового эфира асп аргинил-валил-0-бен лейцил-бензил-гисти таминовой кислоты (Получают согласи соединения (19).

Выход: 95Х; т,пл

Ея; = 0,5 (рН 1,9);

= 0,66 (3), 12, а, -n-Нитробен бутилоксикарбонил-О аспарагинил-11 -нитр и бензил-тирозил-изол гистидил-пролил-глу ты (22), К охлажденному д (0,3 ммоль) соедине

ДЕФА добавляют 0 15 диизопропилэтиламин (0,45 ммоль) пентаф эфира трет-бутилокс нокапроновой кислот

ЛИФА, Выдерживают п пературе 48 ч, ДЕФА кууме, остаток раст щают на силикагеле

Выход: 0,24 г (5

= 0,35 (В); и = 0,8

13. g -Пентафторф робензиловый эфир т карбонил-Е-аминокапр

P нил-N -нитроаргинил-валил-0-бензилтирозил-изолейцил-N -бензил-гистиднл-пролил-глутаминовой кислоты (23).

К раствору 0,24 г (0,15 ммоль) соединения (22) в 20 мл ДМФА добавляют 0,17 г (0,23 ммоль) комплекса

"Ф" в 5 мл ДЕФА и перемешивают при

20 С 48 ч. Отфильтровывают дициклогексилмочевину и ДЕФА упаривают в вакууме, остаток растирают эфиром и высушивают над P О /КОН, Выход: 0,23 г (88,47); Rg =0,55(B)

Rg = 0 52 (Д); и 1 0,77 (Э), ность циклического аналога ангиотензина в опытах in vivo u in vitro, В опытах in vivo определяют влияние соединения (1) на артериальное давление крыс. Эксперименты проводят на белых крысах обоего пола массой

180-200 г, наркотизированных уретаном (1,25 г/кг). Вещества вводят в бедренную вену в виде инъекций в объеме 0,1 мл/200 r в дозах 0,5500 мкг/кг. Артериальное давление регистрируют из общей сонной артерии с помощью ртутного манометра на закопченной ленте кимографа.

1067796

1О

Установлено, что соединение (!.) обладает весьма низкой прессорной активностью — 0,017 от эффекта ангиотензина. Введение отдельных доэ (l ) 50 мкг/кг перед применением ангиотензинамида в-дозах 0,5 и 5 мкг/кг вызывает уменьшение прессорного эффекта последнего соответственно на

17,9+! и 17+4,67. Перемещение от= ветной кривой ангиотензина в сторону высших концентраций в присутствии (I) указывает на конкурентный антагонизм действий. Увеличение дозы (!) до 500 мкг на 1 кг вызывает понижение прессорного эффекта ангио. тензина в дозе 5 мкг на 1 кг на

41,4+11,9Х. Таким образом, соединение (I) показывает зависящий от дозы антагонистический эффект.

Определение миотропной активности проведено в опытах на изолированной восходящей ободочной кишке крыс, Иэотонические сокращения регистрировали в определенном режиме темперао туре (32 С) и аэрации. Коммупятивные кривые концентрация-эффект с последующим вычислением параметров рА и

I р D2, характеризующих антагонис1ические свойства соединения (1.), регистрировали на модифицированном приборе ВИ6-5МА. Соединение исследовано в диапазоне концентраций

10 9 — 1О

В опытах in vitro установлено, что циклический аналог ангиотенэина (I )обладает как конкурентным антагонизмом (перемешения куммулятивной кривой концентрация-эффект (КККЭ) ангиотензина вправо/ — рА = 6,66 при концентрации (1) 10 М и pJ7 =5,83 при 10 М, так и неконкурентным антагонизмом {понижение по максимуму

10 с изменением угла наклона КККЭ ангиотензина) -f>"z = 6,59 при концентрапии (I) 10 > и p = 5,28 при

Острую токсичность цикло-11 -8

Е У

t 5 (Ak 4- Ачи, g Ю и ) ) ангиотензина изучают в опытах на белых мышах массой 18-20 r при внутривенном введении.

При дозах 10-200 мг/кг токсичес2п кого эффекта не наблюдают. Введение исследуемого соединения в дозах от

300 до 450 мг/кг вызывает паралич задних конечностей, затрудненное дыхание и летальный исход в зависимости от дозы через 1-4 мин. У живот. ных, оставшихся в живых, токсические явления полностью устраняются по истечении суток. Значение JIfI составляет 360(300-432)мг/кг. Таким обзо разом, летальная доза в 720 раз превосходит дозу, при которой наблюдается явный антагонистический эффект соединения в отношении прессорной реакции ангиотенэина (5 мкг/кг).

10Ы79Ь

Pro йЩ ааВи аа

0N5

09Р

ЮАНЬ

ОРф

ОИРУ

ВНИИПИ Заказ 8557/6 Тираж 353 Подписное о

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектйая, 4