Способ фракционирования антибиотика спирамицина на его составляющие.

 

№ 118401

Класс 30h, 6

ОПИСАНИК ИЗОЬ1 КТКНИЯ

К ПАТЕНТУ

Заявитель

Иностранная фирма «Общество химических заводов Рона-Пуленк, акционерное общество» (Франция)

Действительный изобретатель

Иностранец Сергей Челичев

СПОСОБ ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ АНТИБИОТИКА

СПИРАМИЦИНА HA ЕГО СОСТАВЛЯЮЩИЕ

;-1аявлеио 28 марта 1956 г. за № 576580/31 в Министерство здравоохранения СССР

Опубликовано в <;1>юллетеис изобрстеиип: ¹ 5 за ) 960 г.

Предлагается несколько способов выделения кристаллических антибиотиков.

Первый способ заключается в использовании метода распределения противотоком, например, в аппарате Крейга.

Второй способ заключается в проведении сепарации путем хроматографии на окиси алюминия. Для отделения спирамицина 1 от спир:>мицинов II u III целесообразно применять хороший растворитель спирамнцина, например бензол или эфир

Для отделения спирамицина II от спирамицина Ш используют слабый растворитель спирамицинов, например смесь циклогексана и бензола или циклогексана и эфира.

Третий способ (дающий наилучшие результаты) заключается в проведении грубого разделения оснований с последующей очисткой противоточной экстракцией или хроматографированием на окиси алюминия.

При м ер 1, 20 г спирамицина в виде необработанного основания ерракционируют .в аппарате Крейга, состоящем из 60 камер, емкостью

200 сма каждая. В качестве растворителя применяют обе сепарированные фазы следующей смеси: бензол 1 объем оуферный раствор: рН 6,47 (РО НгК вЂ” 6, 35 е; РО .HNa:. 12Н О- — 7, 14 г; воды gs — 1 л)

В каждую камеру аппарата Крейга, помещенного в реду с постоянной температурой 24, загружают 100 см водной фазы и растворяют спирамицин в 200 сма бензола. Затем производят фракционировашгое

¹ 118401

ОСНОВНЫЕ СВОЙСТВА СПИРАМИЦИНОВ I, II u III! (Фиэпкс-хим

Спирамицин l; Спирамицин ll; Спира минин lll показатели

Эмпирическая формула

С .

46 — 48

79 — 83

15 — !6

46 — 48

79 — 83

15 — 16

46 — 48

79 — 83

16 — 17

О

Молекулярный вес (найден эбуллиометрически) около 900 около 800 около 800

7,6

7,6

7,7

РКВ.

)28 †1

130 — 3

134 —

Т. пл. (блок Маккена) Максимум поглащения в ультрафиолете (раствор в эти ловом спирте), 232 л1мк

232 и.як

232 ч.ик

Rf (хроматография на бумаге) 0,22

0,015

0,04

П р и мер 2. 100 г спирамицина в виде необработанного основания растворяют при температуре кипения в 120 см бензола, раствор охлаждают до 10 и в течение 15 час. подвергают медленному встряхиванию; полученные кристаллы центрифугируют, промывают 30 см бензола и просушивают, в результате чего получают первую фракцию кристаллов. разделение по общепринятой технологии. В первую камеру вводят

100 сма раствора спирамицина в бензольной среде, встряхивают, осветляют и переводят бензольную фазу из второй камеры в третью, а из первой камеры во вторую. Фракционирование продолжают, вводя после каждого осветления в первую камеру 100 сма бензольной фазы.

После проведения 59 последовательных перемещений разделение можно считать законченным.

Компоненты в стречаются в чистом виде в растворах соответственно следующих камер:

Спирамицин I — камеры 5 — 15

Спирамицин I I — » 21 — 28

Спирамицин III — » 35 — 45

Бензольные растворы, содержащие одинаковые компоненты в чистом виде, собирают, растворитель удаляют посредством дистилляции под пониженным давлением, а осадок после дистилляции высушивают в вакууме. В результате получают спирамицина 1 — 7,8 г, спирамицина II — 2,7 г, спирамицина III — 3,4 г с константами, приведенными в таблице.

Маточники, к которым добавляют фильтрат после промывки, упаривают в вакууме до 60 см, и полученный раствор подвергают кристаллизации, как было указа но, в результате чего получают вторую фракцию кристаллов, Третья фракция получает,"я путем выпаривания досуха маточных вод. 50 г первой, фракции перекристаллизовывают из 100 см бензола, как было указано, полученные кристаллы промывают 20 см бензола и высушивают. Получают 29 г кристаллического продукта.

Третья перекристаллизация описанного продукта из 40 см бензола позволяет получить 14 г кристаллов, содержащих только смесь спирамицинов Il и IП, с содержанием спирамицина II 56% (по весу).

25 г основания, обогащенного спирамицином I и содержащегося во фракции 1, растворяют в 125 смз эфира и раствор хроматографируют на колонке с окисью алюминия (вес окиси алюминия 500 г, диаметр колонки 28 мм). После пропускания эфирного раствора хроматограмму проявляют в эфире с тем, чтобы удалить спирамицины II и III, затем элюируют спирамицин I пропусканием через колонку эфирноапетоновой смеси (с объемным соотношением 1: 1).

В результате получают спирамицин 1 с константами, приведенными в таблице примера 1.

20 г спирамицина II и Ш, полученного тремя последовательными кристаллизациями и имеющего следующий состав: 56% по весу спирамицина II, 44% по весу спирамицина Ш, фракционируют в аппарате

Крейга по методике, описанной в примере 1.

Оба компонента содержатся в чистом виде в растворах, взятых из следующих камер: спирамицин II — из камер от 6 до 15 спирамицин IП » от 21 до 31

Бензольные растворы, соответствующие этим двум группам камер, высушивают и полученные основания кристаллизуют из бензола так же, как в примере 1.

Получают 7,2 г спирамицина П и 5,1 г спирамицина Ш в кристаллическом виде с константами, приведенными в таблице примера 1.

Пример 3. 50 г кристаллизованной смеси спирамицинов II u

II I, приготовленной как в примере 2, со следующим составом:

56 вес. % спирамицина II, 44 вес. % спирамицина ПI растворяют в

450 смз смеси циклогексан-эфира (2: 1 по объему) и хроматографируют на колонке с окисью алюминия (вес окиси алюминия 600 г, диамеlp колонки 35 мм) . Хроматограмму проявляют сначала той же смесью циклогексан-эфир, затем последовательно эфиром и смесью эфирацетон (1: 1 по объему).

Фракцию, полученную при проявлении смесью циклогексан-эфир, упаривают под пониженным давлением и осадок высушивают, а затем кристаллизуют из 12 см бензола, как указано в примере 1. При этом получают 4 г спирамицина Ш в виде кристаллического основания.

Обработка таким же способом фракции, полученной при проявлении смесью эфир-ацетон, с последующей кристаллизацией по указанному в примере 1 способу дает 5,8 г спирамицина II в виде кристаллического основания.

Константы обоих соединений соответствуют приведенным в таблице примера 1.

Пример 4, 50 г спирамицина в виде необработанного основания растворяют в 500 смз бензола и раствор хроматографируют на колонке, содержащей 750 г окиси алюминия (диаметр колонки 40 мм). После .пропускания бензольного раствора, хроматограмму проявляют в бензо¹ 118401 ле, в результате чего спирамицины II и Ш полностью элюируются. Затем для проявления используют смесь бензол-ацетон (1: 3 по обы:щу), в результате чего элюируется спирамицин 1 Он имеет константы, приведенные в таблице примера 1.

При последующей хроматографии смеси оснований фракций 1 и 2 по методу, приведенному в примере 3, можно получить основания спирамицинов П и III в кристаллическом виде.

Предмет изобретения

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете )йинистров СССР

Редактор А. К. Лейкина Гр. 13S

Информационно-издательский отдел.

Объем 0,34 п. л. Зак. 2888

Поди, к печ. ЗI.III-60 г.

Тираж 700 Цена 50 коп.

Типография Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Петровка, 14.

1. Способ фракционирования антибиотика спирамицина на его составляющие, отличающийся тем, что раствор спирамицина обрабатывают в аппарате для противоточного распределения (напримср, аппарате Крейга) с использованием в качестве органической фазы растворителя — смеси ароматических углеводородов, а в качестве водной фазы — буферного раствора при рН между б и 7. причем обе фазы предварительно взаимно насыщают, а после фракционирования три различные компонента спирамицина изолируют по редством экстрагироыяния, подщюлячивяния испарения и кристаллизации В ароматических углеводородах.

2, Видоизменение способа но и. 1, о т л и ч а ю щ е е с я тем, что, первую стадию фракционирования спирамицина проводят методом хроматографического разделения на гидроокиси алюминия, с последующим экстрагированием и другой обработкой по п. 1.

3, Видоизменение способа по п. 1, о тли ч а ю щеее я 1ем, что фракционирование спирамицина проводят путем последовательных перекристаллизапий в органических растворителях.