Способ определения активности тромбопластина плазмы крови

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТРОМБОПЛАСТИНА ПЛАЗМЫ КРОВИ, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют время свертьшания донорской и исследуемой плазмы в присутствии бестромбопластиновой плазмы , а активность тромбопластина определяют по формуле ) i А активность тромбопластина где исследуемой плазмы; время свертьшания донорской плазмы; i,i время свертьшания исследуемой плазмы. (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

NHMHCh

РЕСПУБЛИК

0% (11) 3m С 01 N 33 48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЬГПФ (21) 3615465/28-13 (22) 05. 07 .83 (46) 23.09.84. Бюл. 9 35 (72) А.Ш. Бышевский, О.А. Терсенов, В.А. Усольцева, С.Я. Стасенко и Г.В. Мелихова (71) Тюменскии государственный медицинский институт (53) 612. 015 (088. 8) (56) 1. Зубаиров Д.М., Андрушко И.А., Сторожев А.Ле Роль сосудистых и тромбоцитарных мембран в гиперкоагулемии. — "Кардиология", 1974,,У 11, с. 75. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ТРОМБОПЛАСТИНА ПЛАЗМЫ КРОВИ, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют время свертывания донорской и исследуемой плазмы в присутствии бестромбопластиновой плазмы, а активность тромбопластина определяют по формуле

С1

Д= — -<00 Х где и — активность тромбопластина исследуемой плазмы; 1 — время свертывания донорской плазмы; - время свертывания исследуемой плазмы.

1114951

Изобретение относится к медицине, а именно биохимии, точнее к способам определения активности факторов свертывания крови, и может быть использовано научно-исследовательскими и клинико-диагностическими лабораториями для изучения роли тромбопластина плазмы крови в процессах свертывания и в развитии нарушений свертывающей ак- 10 тивности.

Известен способ определения тромбопластина, заключающийся в том, что в исследуемой плазме устанавливается содержание 5 -нуклеотидазы, 1 являющейся индикатором наличия в кровотоке фрагментов клеточных мембран, представляющих собой тромбопластин. Определение 5 -нуклеотидазы, проводится с помощью адено- 2О зин-5-монофосфорной кислоты (АМФ), которая гидролизуется с высвобождением неорганического фосфата преимущественно исследуемым ферментом. Появление неорганического 25 фосфата при инкубации сыворотки крови с АМФ пропорционально активности нуклеотидазы, что косвенно отражает количество фрагментов кле-. точных мембран в кровотоке (1), I .

К недостаткам известного способа

;относятся: недостаточная точность и специфичность, связанная с тем, что со держание в.сыворотке 5 - нуклеоти- З5 дазы отражает только наличие фрагментов клеточных мембран и не отражает их активности в качестве тромбопластина, а также с тем, что отщепление неорганического фосфата 40 от АМФ катализирует не только 5 — нуклеотидазу, но и другие фосфатазы, хотя и с меньшей скоростью, сложность определения, заключающаяся в том, что выполнение анализа требует приготовления семи реактивов, из которых два неустойчивы при хранении, в связи с чем их необходимо готовить перед каждым определением, а также в том, что окрас- 50 ка, развивающаяся при взаимодействии неорганического фосфата с молибденовым реактивом неустойчива и, следовательно, колориметрия должна проводиться через строго определенный 55 промежуток после начала реакции— это затрудняет проведение серийных анализов.

Целью изобретения явпяется повышение точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения активности тромбопластина плазмы крови определяют время свертывания донорской и исследуемой плазмы в присутствии бестромбопластиновой плазмы, а активность тромбопластина определяют по формуле

А = — 100, 2 где А — активность тромбопластина исследуемой плазмы;

t1 — время свертывания донорской плазмы, — время свертывания исследуе2 мой плазмы.

Способ осуществляют следующим образом.

Смешанную бестромбоцитную плазму

5-6 доноров центрифугируют 60 мин при 52000 g для удаления фрагментов клеточных мембран (получение субстратной бестромбопластиновой плазмы) .

Определяют время свертывания смеси равных объемов смешанной донорской бестромбоцитной плазмы и субстратной (бестромбопластиновой) плазмы.

Затем определяют время свертывания смеси равных объемов исследуемой плазмы, освобожденной от тромбоцитов, и субстратной плазмы и по

«Е1 формуле А = — — - 100 определяют 2. активность тромбопластина в исследуемой пробе.

Пример . Получают субстратную бестромбоцитную плазму. Получают смешанную плазму 5 доноров и исследуемую плазму подготавливают для исследования {освобождают от тромбоцитов) .

Приготавливают смесь 0,1 мл донорской плазмы и 0,1 мл субстратной плазмы в пробирке на водяной бане при 37 С. Определяют время свертывания смеси, добавляя к ней

О,1 мл 0,557.-ного раствора хлорида кальция. Время свертывания 327 с.

Аналогичным образом определяют время свертывания смеси 0,1 мл исследуемой плазмы и 0,1 мл субстратной плазмы. Время свертывания., 248 с.

Пользуясь формулой, определяют активность тромбопластина в иссле1114951

Составитель Е. Житникова

Техред М.Гергель Корректор С. Черни

Редактор В. Иванова Заказ 67бО/30 Тирах 822 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб,, д. 4/5

Филиал ППП "Патент"; r. Ухгород, ул . Проектная, 4

3 дуемом образце плазмы, которая ока" зывается равной 131Х.

По результатам наблюдений, про .веденных у 50 доноров, активность тромбопластина в условиях физиологической нормы колеблется в пределах от 100 + 6,8Х.

Воспроизводимость способа (— 100), m установленная на основании 10 опре делений активности тромбопластина, выполненных в одном образце плазмы, равна 4,1Х.

Предложенный способ позволяет точно определить специфическую активность тромбопластина пу" ! тем излучения влияния исследуе" мой плазмы на время свертывания субстратной плазмы, содержание тромбопластина в которой сникено

У с помощью. центрифугйрования."

Точность возрастает на 18 -20 X.

Кроме того, предлагаемый способ прост в осуществлении.