Биологический способ определения экдистерона в теле насекомого

 

БИОЛОГИЧЕСКИЙ СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭКДИСТЕРОНА В ТЕЖ НАСЕКОМОГО, отличающийся тем, что, с целью повышения точности анализа и сокращения времени его проведения в 16рюшко насекомого производят трансплантацию слюнной железы личинки Drosophila viritis, железу 41нкубируют в насекомом 1560 мин, затем извлекают ее из брюшка, готовят давленьй ацето-орсеиновый препарат и проводят кариологический анализ препарата, при этом о наличии экдистерона судят по экспрессии пуфов в индикаторных районах.

СС103 СС1%ТСНИХ

РЕСПУБЛИК

6% 01) 1 @ С 12 Я. Ol/32 "

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАЖТЖНН1е1Й КОМИ И:Т CCCP

llO ДЮАМ И396РОЕНИЙ И OfHPbffMA (21) 3558375/30-15 (22) 04. 11. 82 (46) 30. 11.84. Бюл. 11 44 (72) Е.В.Полуэктова, В.Г.Митрофанов," .Н.И.Кожанова и В.Н.Буров (71) Институт биологии развития им. Н.К.Кольцова и Всесоюзный научно-йсследовательский институт .защиты растений (53) 543.9.595.7(088.8) (56) 1. Becker E. Plagge Е. Zbl

1939, 9. 59, р.326-351. .2. Karlson P., Shaaya S.J.

Insus. Physiol„ ч. 10, М 5, .1964, р.797-804.

3. De Reggi МЛ, Him М.Н., Эе1ааяеМ.А.,Siochem. and Biophys.

Research C0msnnjcatiопэ iч . 66, У 4, 1975, р. 1307-1315.

4. Delbecque G.P., Him М., De lachambre Л., de Reggi М., Deve1op. Вео1., V.64, Ф 1, 1978, р.l1-30. (54) (57) БИОЛОГИЧЕСКИЙ СПОСОБ . ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭКДИСТЕРОНА В ТЕЛЕ

НАСЕКОМОГО, отличающийся тем, что, с целью повышения точности анализа и сокращения времени его проведения в брюшко насекомого проР изводят трансплантацию слюнной железы личинки Drosophila viriИЗ, железу .инкубируют в насекомом 1560 мин, затем извлекают ее из брюшка, готовят давленый ацето-орсеиновый препарат и проводят кариологический анализ препарата, при этом о наличии экдистерона судят по экспрессии пуфов в индикаторных районах.! 1!26600

Изобретение относится к сельско- О хозяйственной, медицинской и лесной и днако способ наложения лигат ур огранйчен личиночной ста ней "К энтомологии и биологии а именно ф " р на о к методам биологической борьбы с

Э ора тест треб ет на о р у накопления синхровреднымя насекомыми, и может быть низированного материала ля и д получе-. ния гомогената(10-l5 r) а ко использовано в сельском и лесном (), а количестх.оэяйстве, а также в медицине в венная оценка гормона по нему затруд,нена, так как гормон те яется качестве экспресс-тест-системы ля р я в определения биологически активных и для процессе многократной об абот р ки иатевеществ. t0 риала и в нем могут быть прииес и, токсичные для реципиента что с

В настоящее время с целью охран ы надежность способа ио о снижает биосферы исследуются возможности, рад оиммунный использования биологических методов способ трудоемок, технически с ложен, борьбы с насекомыми-вредителями. б продолжителен (анализ по нем у длится олее 3 мес, включает в себя

Одним иэ таких подходов может быть }5 я работу использование гормонов насекомых, е с высокотоксичными и р иоакт ад ив ными веществами. Использование его в для регуляции численности популяций .. энтомологнческой лабо ато ьн ° необходим способ определения наличия Ц и биологической активности гормонов ель изобретения состоит в повыов 20 шенин точности анализа и сок на разных стадиях развития особей времени его проведения. ращении

Для определений экдистерона ",Указанная ель одного из ан г, казанная цель достигается- тем, алогов гормона линьки на- что согласно биолог ч секоиых экдизона — извес е иологическому способу ест и способ определения э исте о наложения лигатур, который заключа- о кд терона в теле насеся в том, что личинок насекомых ет заключа- 25 коиого производят трансплантацию перевязывают до склеротизации кутику ,слюнкой железы личинки Рг Ь передней трети тела и. По окуклн

virx.és в брюшко насеко инкубируют в насекомом 15-60 мин, судят о наличии гормона в них Я . извлекают ее иэ б ю ее иэ рюшка, готовят

Иэв-те. та же способ Калл фор тест, технически более сложный и ора и проводят ка иолог р л гический анализ чеи способ наложения лигатур. Он йрепарата, п и этом р м о наличии экдистерона судят по экспрессии пу "в в основан на экстракции экдистерона индикаторных районах. иэ гомогената ..анализируемого насекомого метанолом, бутанолом и пет- ралейным эфиром. Конечный продукт fp и и е р l. На жуке Tenebrio шо 1 ог(большой мучной хр ак1. экстракции после многократного ные железы личинок Drosophifa viri Pi реэкстрагирования инъецируют а у г1 дs, личинкам Калли а в б линия Р— 40 на 46-50фора в рюшной отдел ночного возраста выделяют в О,бй-ном за лигатурой и по размерам склероти" 40 растворе NaCr a трансплантируют в знрованной кутикулы в отшнурован-.i б рюшко куколок реципиента на разнйх нои сегменте определяют титр экдизона 2) . .- < ° сроках развития, культивируют их

30 иин, затем готовят давленые ацето-орсеиновые препараты хромосом

Радиоимиунный способ определения следующим, образом: переносят железу а предметное стекло, экдистерона наиболее сложен. Он . из краски на предметы е включает в себя накопление синхрони краску удаляют, помещают железу в зированного материала анализируемой каплю насыщенного раствора хлорапстадии(5 мг сухого веса), который подвергают сложной обработке для 50 (через 3-4 с), смывают его 453-ной по 51 го антигенного связывания с меченым уксусной кислотой то, помещают железу по 1 гормональным производным, в каплю 503-ной молочной кислоты; синтез и очистку экдизонового произ- покрывают покровным стеклом, прижимая водного, получение экдистерон-альбу- его к предметно иу, и проводят кариоминового комнлекса, которым иммуни" 55 логический анализ индикаторных райо-. зируют кроликов и определяют анти- нов хромосом показ ва й, оказывающи, что на сывороточную специфичность по техни- стадии 4-дневной ке диализа 3). (3). о куколки в хромосомах слюнных желез присутствуют все пуфы1126600

Составитель Л.Чибисова

Редактор М.уткина Техред Т.Маточка КорректоР Е.Снрохман

Заказ 8640/20 . Тираж 521 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

ll3035, Москва, 3-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

:индикаторы, что указывает на высокое содержание экдистерона в геиолимфе куколок жука и проницаемость гормона в клетки тоансплантата. Полученные данные хорошо согласуются с литера турными по содержанию экдистерона в процессе развития Tenebrio monitor, выявленному по радиоиииунному способу (4) .

Н р и м е р 2. На клопе Eurigaster 10

integriceps (вредная черепашка).

Условия культивирования желез личинок дрозофилы в брюшке этого насекомого способ приготовления давленых ацетоорсеиновых препаратов хромосом и кариологический анализ их такие же, как в примере l. ™ариологический анализ индикаторных районов хромосом трансплантата на стадии личинки этого клопа выявил присутствие 20 четких пуфов в конце личиночного возраста(5-дневные личинки Eurigaster

7 возраста), что говорит о присутствии и высоком содержании экдистерона в гемолиифе этих особей, как,и у д

Tenebrio(4-дневная куколка,-пример

I). На стадии имаго самки Eurigastår в диапаузе пуфов-индикаторов не име", ли, как и личинки более ранних ." строков развития, в трансплантатах которых наблюдали лишь отдельные слабо развитые п фы, что интерпрети: руется как резкое снижение содержания гормона в их гемолиифе. Трансплантаты из брюшка яйцекладущнх самок Еигдразйег имели все пуфы33 индикаторы, кроме пуфа 2-.3) --3, что свидетельствует о наличии в гемо" лимфе незначительного количества гормона, так как пуфы выражены. слабо.

Таким образом, данные примеров 1 н 2 достоверно подтверждают возможность определения экдистерона в геиолимфе насекомых-вредителЕй посредством пуффинга полнтенных хромосом трансплантата на разных стадиях развития испытываемого насекомого.

В качестве трансплантата кроме слюнных желез Dnosophifa virifis могут быть использованы органы всех насекоиык; обладающих тканями с полнтенным кариотипом.

Разработанный способ определения зкдистерона в теле насекомого посредатвои пуффинга индикаторных районов хромосом трансплантата может быть использован на всех стадиях развития реципиента, не требует накопления синхронизированного материала исследуемого насекомого, дает возможность определять экдистерон непосредственно в теле насекомого, устраняет потерю гормона в процессе обработки, что существенно повышает надежность способа, сокращает продолжительность анализа до 3 дн.(48 ч - срок развития личинки дроэофилы,7 ч — кариологичес- кий анализ}, исключает многочисленные трудоемкие операции и применение высокотоксичных и радиоактивных веществ. Техническая просто. та предлагаемого способа позволяет использовать его как экспресс"тест на экдистерон непосредственно в

Ф полевых условиям.