Способ определения активности спленина

 

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ СПЛЕНИНА, отличающийся тем, что, с целью повьгаюния чувствительности и специфичности, пробы ппленина инкубируют с вьщеленными тучными клетками интактных крыс в буфер .ном растворе при рН 7,0 в течение 5-7 мин и температуре 37-38°С и после охлаждения определяют активность по вьщелившемуся из клеток гистамину.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОбРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

Н ASTOPCHOINV СВИДЕтръствУ экю G 01 N 33 48 (21) 3465157/28-19 (22). 07.07.82 (46) 07.12.84. Бюл. № 45 (72) В.П.Комиссаренко. И.С.Гущин, А.В.Шевченко, С.В.Покровский и А.И.Зебрев (71) Киевский научно-исследователь в . ский институт эндокринологии и обмена веществ и Научно-исследовательский институт иммунологии AMH СССР (53) 615-015(088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР № 619857, кл. G 01 N 33/48, 1976.

„SU.„128176. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ СПЛЕНИНА, отличающийся тем, что, с целью повьппения чувствительности и специфичности, пробы ппленина инкубируют с выделенными .тучными клетками интактныхкрыс в буферном растворе при рН 7,0 в течение

5-7 мин и температуре 37-38 С и после охлаждения определяют активность по вьделившеиуся из клеток гистамину.

Таблица 1

88,8

100

83,2

98,4

1,65

86,4

85,8

84,8

2,9

97,1 д

85,3

92,4

80,4

7,6

81,4 (1 ЕД) 151 ЕД

l5,2

84,8

72,3 в

76,2 в

S 1128176 3

Изобретение относится к химико- ставленному протоколу экспернменфармацевтической промьппленности и та табл.l)-.вносят буферный раствор касается определения активности 11 (155 мкл) н по 20 мкл соответствую-. лекарственных препаратов, которые щего разведения образца спленина. могут найти применение в медицинской* В контрольные пробирки 1. и 2 вместо практике. спленина добавляют 20 мкл буфера Il.

Известен способ определения актив- Штатив с пробирками помещают на ности спленина, основанный на способ- 2 мин в баню с t=37 C для прогрева ности последнего предотвращать тер- и ".строго по времени добавляют 25 мкл мокоагуляцию альбумина 1„13.. 1б полученной ранее клеточной взвеси

Однако известный способ обладает с интервалом 10 с поочередно, начиневысокой чувствительностью и весьма "ная с первой пробирки. Инкубацию в относительной биологической специфич- бане проводят 5 мнн, считая от моностью. .мента внесения клеток в первую проЦельизобретения - повышение чувст- Ig бирку, затем в той же последовавительности и специфичности способа. тельности с интервалом 10 с пробирки

Указанная цель достигается тем, переносят в ледяную. баню (О С), зачто согласно способу определения . Фем в каждую пробу добавляют по активности спленина пробы спленииа 2 мл охлалденного буфера li и пробы.:, инкубируют с выделенными тучнймн клет- центрифугируют при 2000 об/мин к камиинтактных крыс в буферном раство- течение 10 мин при 4 С. Супернатант ре при рН 7,0. в течение 5-7 мии и сливают. К клеточным осадкам добавтемпературе. 37-38 С и после охлажде- .ляют 2 мп дистиллированной воды и ния определяют активность по выделив- подвергают интенсивному встряхишемуся из клеток гистамину. 2 ванию. В полученном растворе опреПример. Тучные клетки полу- деляют количество гистамина флюорометчают у крысы известным способом. В рическим методом с помощью ортофта-. подготовленные пробирки согласно пред- левого альдегида.

- Продолжение табл. 1

1128176

70,2

29,8

57,5

65,6

52,8

62,.6

37,4

56,7

В табл. 2.представлены данные on-. 15 ределения активности спленина и оценю ка чувствительности предлагаемого и известного способов.

Продолжение табл.

Таблица 2

Активность спленииа

О, 0066

Количество спленина в пробе,мл:

I5,2 25 .

О, 005

7,6

Известный Предлагаемый способ способ

О, 0033

О 0025

1,65

Не определя:ется

О, 001

58

0,5

Представленные данные . свидетель-. ствуют о том, что наименьшее Koljjl»

;чество исследуемого нрепарата, при .Ю; : 40 котоРом ейе возможно определение активости снленина известныч спо- . собом, 0,2 мл, в то время как по, предлагаемому способу определение. ак» тивности возможно в пробе, содержа» шей в 100 раз меньше спленина (0,002 мп ).

0,25

10

0,2

Не определяется

0 18

0,02

37 4

29,8

0,01

Составитель В.Колчина

Техред О.Неце Корректор С.Черни

Редактор . В.Петраш

Филиал ППП "Натент", г.Ужгород, ул.Проектная, 4

Заказ .9022/33, Тираж 822 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5