Способ оценки качества овулировавшей икры рыб

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН уд) A 01 К 61/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1, 1у (sio

ГОСУДАРСТВЕННЬ1Й КОМИТЕТ СССР

IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЦТИЙ (21 ) 3495547/28-13 (22),05.08.82 (46) 15.12.84. Бюл.. )) 46 (72) В.Н.Жукинский, Р.И.Гош, П.С.Вовк.и В.P.Àëåêñååíêî (71) Институт гидробиологии АН УССР. (53) 639.3.034.2 (088.8) (56) 1. Владимиров В;И. Способ оценки качества овулировавшей икры. "Вопросы ихтиологии",. 1964, т. 4, в. 1., с. 30.

2. Мильштейн В.В. Осетроводство.

M "Пищевая промышленность", 1972, 4 ) с. 36-37. (54)(57) СПОСОБ ОЦЕНКИ КАЧЕСТВА ОВУЛИРОВАВШЕИ ИКРЫ РЫБ, преимущественно

„„SU;„, 112 А карповых лород, путем определения ее Физиологического состояния, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения достоверности и объективности оценки и ускорения процесса, овулировавшую икру в количестве 0,3-0,35 г помещают в термостатированную;ячейку полярограФа, подводят к ячейке ток при напряжении 0,6-0,8 В и производят определение интенсивности дыхания овулировавшей икры путем измерения концентрации кислорода, а о Физиологическом состоянии икры .судят по полученным показателям интенсивности дыхания, сравнивая их с-заранее установлен Р ными эталонными значениями. ю

1128880

Изобретение относится к методам оценки качества овулировавшей икры промысловых рыб, преимущественно карповых пород, и может быть использовано в рыбоводстве для отбора доброкачественной икры перед ее искусственным осеменением на рыбоводных заводах.

Известен способ оценки качества овулировавшей икры рыб, основанный на определении количества неоплодотворенных икринок на стадии крупноклеточной морулы после 4 ч и выживаемости эмбрионов на стадии гаст. .рулы после 7-8 ч с момента оплодотворения Г1) . 15

Недостатками данного способа являются ненадежность и длительность оценки. За этот период овулировавшая икра, даже при хранении ее при низких температурах, теряет способ- 2О ность к оплодотворению.

Кроме того, способ не дает исчер-, пывающей оценки качества икры и не позволяет объективно прогнозировать ее результаты.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемому эффекту является способ оценки качества овулировавшей икры рыб путем определения ее физиологичес. кого .состояния (2j .

При осуществлении этого способа критерием физиологического состояния икры является зрелость икры, которую определяют по различной,способности обесцвечивания ею водного раствЬра метиленовой сини, являющейся индикатором.

Пробу икры в количестве 1 см на

5 смз раствора метиленовой сини йомещают в плотно закрывающий бюкс, 40 перемешивают и выдерживают 10-60 мин при комнатной температуре.

Оценку качества икры осуществляют по шкале::незрелая икра — раствор не обесцвечивается; зрелая — 45 обесцвечивание раствора в течение

30-60 мин, перезрелая — обесцвечивается через 10-15 мин, Однако известный способ характеризуется недостаточной достоверностью,. 5g так как метиленовая синь при соприкосновении с воздухом окисляется -и обесцвечивается, что приводит к искажению результатов анализа.

Кроме того, способ неэффективен из-за трудности его реализации, так как требует тщательности и внимательности при осуществлении. !

Целью Изобретения является повышение достоверности и объективности оценки и ускорение процесса.

Эти корреляции позволили .разработать эталонную шкалу-тест, распределяющую икру по качеству на три категории: "хорошая", "удовлетворительная" и "плохая".

Для растительноядных рыб показатели интенсивности дыхания икры в соответствии с этими категориями имеют следующие значения: л

Поставленная цель, достигается тем, что согласно способу:оценки качества овулировавшей икры рыб, преимущественно карповых пород, путем 65 определения ее фИзиологического состояния, овулировавшую икру в количестве 0,3 — 0,35 г помещают в термостатированную ячейку полярографа, подводят к ячейке ток при напряжении 0,6 — 0,8 В и производят определение интенсивности дыхания овулировавшей икры путем измерения концентрации кислорода, а о физиологическом состоянии икры судят по полученным показателям интенсивности дыхания, сравнивая его с заранее установленными эталонными значения-. ми °

Сущность способа состоит в том, что после инъецирования,самок гипофизарными инъекциями и получения овулировавшей икры последнюю от каждой самки отцеживают в отдельные стандартные пластмассовые миски и тщательно перемешивают гусиным пером.

Икру в мисках ставят на короткое время в холодильник во избежание ее порчи. Небольшую часть икры, навеской не менее 1 г, берут .из каждой миски и помещают в фарфоровые чашки.

Номера самок на метках, на этикетках мисок и на чашках должны совпадать.

Пробы икры переносят в лабораторию и начинают работу по определению интенсивности дыхания. Навеску икры в количестве 0,3 — 0,35 r помещают-в термостатированную ячейку полярограйа с температурой воды

25 — 25,5 С, перемешивают магнитной мешалкой, а затем к ячейке подводят ток при напряжении 0,6 — 0,8 В и производят определение интенсивности дыхания икры путем измерения концентрации кислорода в"ячейке, поскольку в основе способа лежит принцип оценки общего физиологического состояния овулировавшей икры по такому интегральному показателю ее метаболизма, как интенсивность дыхания.

Критерием определения ее служит реакция восстановления кислорода на катоде полярографа.

Была установлена четкая корреляционная зависимость между выживаемостью эмбрионов на стадиях гаструлы и предличинок и интенсивностью дыхания овулировавшей икры; чем выше интенсивность дыхания, тем выше выживаемость эмбрионов и наоборот.

1128880

Цй- B)

45 где 3 — интенсивность дыхания, мкатом о/мин/1 г

Йи  — число делений шкалы между точками A и 8 на полярограммах, ограничивающих прямолинейную часть кривой;

A - 6 — прирост величины потребляемого кислорода за 0,5 мин, время в минутах, соответствующее этой части кривой между точками A и В; биологическая калибровка (цена одного деления 1 мм/

/ленты).

Для определения величины F перед началом серийных измерений интен- 60 сивности дыхания овулировавшей икры производят калибровку электрода, основной целью которой является выяснение того, насколько прямолинейна зависимость между показаниями 65

Икра "хорошая" 0,401 и выше

Икра "удовлетворительная" 0,4-0,3

Икра "плохая" 0,299 и ниже

Для карпа данные показатели смещены в сторону относительно более высокой интенсивности дыхания и име. ют значение:

Икра "хорошая" 0,801 и выше

Икра "удовлет.— ворительная" 0,8-0,5

Икра "плохая" 0,499 и ниже

В табл. 1, 2 и 3 приведены данные по сопоставлению интенсивности дыхания овулировавшей икры разных 15 категорий качества с выживаемостью получаемых из нее эмбрионов и предличинок для белого амура, белого толстолобика и карпа соответственно.

Из табл. 1 — 3 видно, что чем вы-. ше.показатель интенсивности дыхания и, следовательно, лучше качество икры, тем больший процент выживаемости имеют эмбрионы и предличинки.

При осуществлении способа в качестве катода используют платиновый электрод, а в качестве электрода сравнения — серебряно-хлоридный.

Изучение интенсивности дыхания производят с помощью электрода закрытого типа, который подключают к полярографу при напряжении 0,6

0,8 В и скорости движения ленты самописца 20-40 мм/мин. На фиг.1 приведены полярограммы интенсивности

1 дыхания овулировавшей икры белого амура, на фиг.2 — белого толстолобика; на фиг.3 — карпа. Интенсивность дыхания икры определяют по формуле 40 электрода и концентрацией кислорода на участке от нуля до максимальной величины измеряемой концентрации.

Биологическую калибровку проводят с помощью дрожжей.

На фиг.2 приведена полярограмма дыхания дрожжей и рассчитана скорость дыхания (цена одного деления ленты выражена в мкатом о/мин/1 г) .

Отклонение пера самописца в раст- . воре без дрожжей от линии остаточного тока (т.е. тока, который остается после исчерпания кислорода в ячейке) дает величину кислорода, который растворен при данной температуре.

Судя по графику на фиг.2,перо самописца прописывает за 2,5 мин 81 деление при скорости ленты 40 мм/мин.

Следовательно,за 1 мин перо прописывает 81 деление: 2,5 мин=32,4 деления. В 1 мл среды содержится 0,5 мкА, кислорода (согласно справочным таблицам).

Таким образом, Р— цена одного деления (1 мм)ленты соответствует — 0,015 мкА кисделения лорода.

Полученную по формуле величину 0 (интенсивность дыхания) сравнивают с эталонной, приведенной в тесттаблицах (табл. 1, 2 и 3),и таким образом устанавливают качество икры"хорошее", "удовлетворительное" или

"плохое", Весь процесс измерения интенсивности дыхания икры и оценки ее качества занимает 10-15 мин.

Заключение о качестве овулировавшей икры конкретных самок передают в инкубационный цех. Если икра по результатам полярографического из-мерения интенсивности дыхания оказывается как хорошая, то ее немедленно оплодотворяют спер лой,а затем закладывают на инкубацию в водоструйные инкубационные аппараты. Если икра оценивается как удовлетворительная,т( ее также немедленно оплодотворяют и закладывают на инкубацию, которую проводят в оптимизированном температурном режиме, чтобы максимально повысить восход личинок из этой икры.

Целесообразно также стилизировать выживаемость икры применением различных биологически активных веществ, которые вносят в воду.

Если же икра оценивается, как плохая, то ее просто выбраковывают используют в качестве пищевого продукта.

Количество икры 0,30-0,35 r которое используют при осуществлении способа, подобрано эмпирически на основании серии методических Опытов

1128880

Данная навеска является наиболее оптимальной, так как соответствует максимальной интенсивности дыхания икры при принятых условиях ее измерения и дает наилучшую повторяемость результатов.

При меньших навесках икры карповых рыб (белый амур, белый топатолобик, пестрый толстолобик, карп и др) интенсивность ее дыхания снижается, а результаты, получаемые при-повторных измерениях, становятая неста" бильными. При больших навесках икры интенсивность ее дыхания увеличива° ется, но не пропорционально увеличению навески, что может исказить 11 истинное соотношение между количеством овулировавшей икры и интенсивностью ее дыхания, а значит и повли. ять на достоверность конечных результатов и правильность оценки качест- Zg .ва икры.

Выбор напряжения тока 0,6-0,8 В обусловлен тем, что полярографический

1 метод основан на проведении электролиза исследуемого раствора в электрохимической ячейке и интерпретации зависимости между силой тока и потенциалом электрода.

Обязательным условием работы с электродом является снятие полярографической волны.

Волну снимают по точкам, т.е. начиная от О,последовательно увеличивают напряжение по 0,1 В и после каждого увеличения выжидают одно и то же время (5 мин) для стабилизации электрода при соответствующем потенциале. Соединив полученные на самописце точки, получают полярографическую волну — кривую восстановления кислорода (фиг.3). Плато пре- 40 дельного тока. диффузии лежит в пределах 0,5-0,8 В, Для определений берут напряжение, которое соответствует плато предельного .тока и находится не на переги- 45 бах кривой — 0,6-0,8 В.

Пример 1. Пробу овулировавшей икры белого амура в количестве

0,3 г помещают в термостатированную полярографическую ячейку при темпера gp туре воды в ней 25 С и перемешивают с помощью магнитной мешалки. Затем к ячейке подводят ток и подвергают икру полярографическому исследованию 10 мин, Изучение интенсивности дыхания проводят с помощью электрода закрытого типа, который подключают к полярографу при напряжении 0,6 В.

Скорость движения самописца 40 мм/мин.

Полученная в результате исследо- Щ вания полярограмма 1 изображена на фиг,1., Величина.A — 8 на полярограмме 1 или .6 О за 0,5 мин составляет 7 делений, а за 1 мин эта величина увеличивается вдвое и составляет 14 делений. Поставив известные величины в формулу интенсивности дыхания, получим:

0,015 14

D — — а1- =0,21 мкакам

О/мин/г в расчете на 0,3 r икры.

Конечные результаты представлены. в расчете на 1 г-, поэтому величину

0,21 мкатом/о/мин/1 г следует умножить на 3,3 0,21 мкатом о/мин/1 гю

«3,3 = 0,639 мкатом о/мин/1 г на

1 г икры.

Согласно табл. 1,эту икру следует отнести к икре хорошего качества, так как величина 0,639 выше величины 0,401, соответствующей .икре хорошего качества.

Пример 2. Была взята овулировавшая икра белого амура.

Навеску в количестве 0,3 г помещают в термостатированную полярографическую ячейку при температуре воды 25,5 С. Дальнейшее измерение ино тенсивности дыхания осуществляли в течение 15 мин способом, описанным в примере 1, при напряжении тока

О, 65 В. Скорость движения записываю,щего устройства 40 мм/мин.

Полученная при этом полярограмма 2 изображена на фиг.1. Величина Д- в на полярограмме равна 4 делениям

:за 0,5 мин,а за 1 мин — 8 делениям.

0 015 мкатом о/мин 8.

Г мии

= 0,12 мкатом о/мин на 0,3 г икры

0 12 мкатом о/мин 0,33 = 0,396 мкатом о/мин на 1 г икры.

В соответствии с табл, 1 эту икру следует отнести к категории "удовлетворительная", поскольку величина 0,396 укладывается в пределы 0,4О, 3 ..

FI р и м е р 3. Навеску овулировавшей икры белого амура в количестве 0,3 r подвергали исследованию способом, описанным в примере 1.

Полученная при этом полярограмма 3 изображена на фиг.1.

Величина 5 -6 на полярограмме равна 2,4 деления, а за 1 мин — 4,8, 0,015 4 8

= О 0072 "" то1 о/м ма 0, г икры на 1 г эта величина соответственно

0,0072 мкатом о/мин 3,3=0,238 мкатом о/мин/1 г.

В соответствии с табл. 1 эту икру следует отнести к икре плохого качества, поскольку величина 0,238 ниже величины 0,299.

Пример 4. Была- взята овулировавшая икра от трех самок белого

1128880

Таблица 1

Плохая

Удовлетво-. рительная

Хорошая

0,401 и выше

0,299 и ниже (мин) 1 ч

0,4-0,3

45,6 g =0,44

P " 0,95

I1 =20

66,9

76,2

17,3 2 =0,57

Р > 0,99

0 =20

35 0

44,5

% коэффициент корреляционного отношения

+ф степень достоверности анализа

+"+tl — количество серий опытов толстолобика, навески 0,3 r подвергали полярографическому исследованию при температуре 25,5 С напряжении тока 0,7 В, скорости движения записывающего устройства 40 мм/мин способом, описанным в примере 1 в течение 15 мин. Полярограммы представлены на фиг.2.

Расчет интенсивности дыхания осу-ществляли по формуле, приведенной выше; При этом были получены следую- 10 щие показатели интенсивности дыханиЯ: длЯ пеРвой Навески — 0,6435 мкатом о/мин/1 г, .для второй—

0,3465 мкатом о/мин/1 г, для третьей. — 0,2475 мкатом о/мин/1 r. 15

Согласно табл,2,икру .первой наЬески следует отнести к категории

"хорошая", второй — "удовлетворительная" и третьей — "плохая".

Пример 5. Взята навеска ову-2р лировавшей икры от трех самок карпа в количестве 0,3 г -каждая.

Измерение интенсивности дыхания проводят так же, как в примере 1.

Полученные полярограммы представ- 25 лены на фиг.3.

Расчет интенсивности дыхания показал, что для первой навески. эта величина составляет 0,891 мкатом о/мин/1 r., для второй †0,7425 мкатом о/мин/1 г, для третьей

0,445 мкатом о/мин/1 r..

Категории качества овулировавшей икры

Интенсивность. дыхания овулировавшей икры мкй кислорода

Выживаемость эмбрионов на ста- дии гаструлы, Ъ

Выживаемость предличинок, % (сразу после их вылупления) Согласно табл.3>качество икры пер-. вой навески следует признать хорошей, второй — удовлетворительной и третьей — плохой.

Ошибка в определении интенсивности дыхания овулировавшей икры в пробах составляет 3% .и, следовательно, предлагаемый способ обеспечивает получение результатов с хорошей воспроизводимостью.

Способ отличается .простотой и быстротой определения, нетрудоемок, полученные данные легко обрабатываются, что позволяет заблаговременно перед искусственным оплодотворением количественно оценить параметры икры и надежно предсказать результаты оценки.

Учитывая быстроту осуществления способа, он может быть рекомендован в качестве экспресс-теста на рыбоводных предприятиях с заводским разведением рыб и существенно повысить выживаемость эмбрионов и выход предличинок в процессе инкубации икры.

Внедрение способа в рыбные хозяйства страны ласт возможность повысить выживаемость личинок в среднем на 5-10% и обеспечить дополнительный выпуск рыбной продукции не ниже

1,2 тыс. т общей стоимостью около

780 тыс. руб.

1128880

Таблица 2

Плохая

Хорошая

Oi33-0i3

0,269-0,2

82,4

67,0

Выживаемость предличинок (сразу после их вылупливания) 61,5

46, 1.5

Ф коэффициент корреляционного отношения

%% степень достоверности связи

%%%

И - количество серий опытов

Таблица 3

Категория качества овулиро- Хорошая . Удовлетвори- Плохая вавшей икры тельная

0,8-.0,5

72,7

92,3

43,2

63,5 % и — количество серий .опытов

+" — коэффициент корреляционного соотношения

Категория качества овулиро-. вавшей икры.

Интенсивность дыхания овулировавшей икры

Выживаемость эмбрионов на стадии гаструлы

Интенсивность дыхания овулировавшей икры

Выживаемость эмбрионов на стадии гаструлы

Выживаемость предличинок (сразу после вылупления) 0,4320,401.0,801 и выше

Удовлетворительная

37,52 =0,73

Р"» о 0,99 п""» =14

11,0 Ц =0,89

Р с 0,999

П =14

0,499 и ниже

51,4 = 21

0,51

22,1 1ъ = 21

0 53

1128880

Зрею, иии, юЯ, пик

Сила mme nu шкапе сакописцо(бусл. ед)

Щи. 3

Составитель С.Филиппова

Техред Т- Маточка КорректоР Л.Пилипенко

Редактор Т.Митейко

Филиал ПЧП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Заказ 9261/2 Тираж 721 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5