Способ замораживания спермы птиц

 

СПОСОБ ЗАМОРАЖИВАНИЯ СПЕРМЫ ПТИЦ, включающий разбавление спермы, охлаждение, эквилибрацию с криопротектором, замораживание в емкостях и последующее хранение спермы в жидком хладагенте, отличающийся тем, что, с целью повышения оплодотворящей способности спермы, замораживание осуществляют в морозильной камере путем вращения . емкости в горизонтальном положении вокруг продольной оси со скоростью 6-12 об/мин при температуре в морозильной камере (-60) - (-75) °С в течение 165-195 с, с последующим введением в морозильную камеру паров азота в течение 45-65 с, причем сперму в емкость вносят в количестве, обеспечивающем толщину слоя спермы при вращении 0,1 -1,0 мм. о

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

4 @ А 61 Р 7/02

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А ВТОРСНОМЪ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР по делАм изОБРетений и ОткРытий (21) 3324549/30 — 15 (22) 20.07.81 (46) 30.01.85. Бюл. № 4 (72) Б. И. Иванов, А. Д. Курбатов и

И. И. Попов (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт разведения и генетики сельскохозяйственных животных (53) 636.082.453.5 (088.8) (56) 1. Авторское свидетельство СССР № 656621, кл. А 61 D 7/02, 1976.

2. Авторское свидетельство СССР № 912165, кл. А 61 D 7/02, 1980 (прототип). (54) (57) СПОСОБ ЗАМОРАЖИВАНИЯ

СПЕРМЫ ПТИЦ, включающий разбавле..SU 1136806 А ние спермы, охлаждение, эквилибрацию с криопротектором, замораживание в емкостях и последующее хранение спермы в жидком хладоагенте, отличающийся тем, что, с целью повышения оплодотворящей способности спермы, замораживание -. осуществляют в морозильной камере путем вращения емкости в горизонтальном положении вокруг продольной оси со скоростью

6 — 12 об/мин при температуре в морозильной камере (-60) — (-75) С в течение

165 — 195 с, с последующим введением в морозильную камеру паров азота в течение 45 — 65 с, причем сперму в емкость вносят в количестве, обеспечивающем толщину слоя спермы при вращении 0,1 — 1,0 мм.

ll

Изобретение относится к разведению сельскохозяйственных птиц, а именно к способам замораживания спермы петухов при искусственном осеменении кур.

Известен способ замораживания спермы птиц, заключающийся в том, что сперму разбавляют при комнатной температуре, эквилибрируют при 2 — 4 С в течение 60 мин, накапывают в виде гранул объемом

0,10 — 0,15 мл на предварительно охлажденную до -60 — 75 С фторпластовую пластину, выдерживают пластину с гранулами в парах испаряющегося азота 60с и опускают в жидкий азот. Оттаивание гранул производят в пенициллиновых флаконах в водяной бане при 70 — 75 С в течение

7- — 10 с (1).

Иедостатком данного способа является нестаоильная скорость охлаждения спер- . мы из-эа невозможности получения одинаковых ио объему гранул, различий экспозиции нахождения гранул HB фторопластовой пластине, соприкосновения гранул с окружающей воздушной средой. В результате этого биологическая полноценность спермиев после замораживания различна, что приводит к невысоким результатам по оплодотворенности яиц (61%) и по выводу молодняка (41,6%), при этом расход цельной спермы на одно осеменение в 8 — 10 раз больше обычного.

Известен способ пристеночного намораживания препаратов крови, вакцин и сывороток, заключающийся в том, что намораживание жидкости производят путем вращения флаконов емкостью 0,5 — 1,0 л вокруг их !.оризонтальной оси в ванне с охлаждакгщим раствором до (- 20) (- 40) С.

Данный способ применяется с целью увеличе IHH поверхности биопрепаратов для сублимационной сушки.

Применение этого способа для замораж!!ва!!ия спермы сельскохозяйственных животных неприемлемо из-за несоответствия режимов ох.!аждения необходимых для разного вида биологических объектов, знач! :тел! !!ь!х различий замораживаемых жидкостей.

Известен способ замораживания спермы птиц, преимущественно гусаков, заключающийся в охлаждении и разбавлении спермы, эк вил и бр ации, внесении спермы в тонкостенные металлические кюветы в количестве 0,1 — 2,0 мм в каждую, замораживании со скоростью 40 — 60 град/мм до (-98) --(-127) С, затем со скоростью

8 — 15 град/мин до - 1-96 С.

Литч!"ность оттаянной спермы 3,7 — 0,12 балла, ь .!-.=од молодняка 53,2% (2) .

Не !оста-.:;: данного способа — нестабильная скоро..:!. охлаждения (не оптимальная) из-за соприкосновения спермы в кюветах с воздухом, длительность времени замораживания (8 — 10 мин) и сложность

2 регулирования указанной скорости охлаждения. В результате этого биологическая полноценность спермиев (вывод молодняка от осеменения замороженной по такому режиму спермы) невысока и составляет

53 2%.

Цель изобретения — повышение оплодотворяющей способности спермы.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу замораживания спермы птиц, включающему разбавление спермы, охлаждение, эквилибрацию с криопротектором, замораживание в емкостях и последующее хранение спермы в жидком хяадагенте, замораживание осуществляют в морозильной камере путем вращения емкости в горизонтальном положении вокруг продольной оси со скоростью

6 — 12 об/мин при температуре в морозильной камере (-60) — (-75) С в течение

165 — 195 с с последующим введением в морозильную камеру паров азота в течение 45 — 65 с, причем сперму в емкость вносят в количестве, обеспечивающем толщину слоя спермы при вращении 0,1 — 1,0мм.

Пример 1. Сперму петухов разбавляют средой для замораживания при комнатной температуре, разливают по 1 — 2 мл в стеклянные цилиндрические емкости, объемом 12 см, диаметром 0,2 м, что обеспечивает толщину слоя спермы при вращении 0,1 — 1,0 мм. Закрепляют в устройство для вращения и помещают в холодильник при 2 — 4 С на 45 мин. В сперму добавляют криопротектор, эквилибрируют и помещают в морозильную камеру с температурой

-75 С, где вращают горизонтально со скоростью 8 об/мин в течение 180 с. Затем в камеру пускают пары азота на 60с. Емкости с намороженной спермой толщиной

0,1 — 1,0 мм опускают в хладагент для дальнейшего хранения. Оттаивают сперму в водяной бане при 50 — 55 С. Кур осеменяют один раз в 3 — 5 дней, первые два осеменения через день дозой 0,2 — 0,23 мл. Оплодотворенность яиц кур, осемененных оттаянной спермой, составляет в среднем 83,0%с выводом цыплят 71,8%.

В табл. 1 представлены результаты оплодотворенности яиц и вывода молодняка, полученные по предлагаемому способу замораживания и известному.

Пример 2. Сперму петухов разбавляют

1:1 средами для замораживания (Лейка

ЛКС-1 ВИРГЖ-1 или ЛКС-1) при комнатной температуре, разливают по 1 — 2мл в стеклянные цилиндрические емкости объемом 12 см, диаметром 0,2 м, закрепляют в устройстве для вращения, помещают в холодильник при 2 — 4 С на 45 мин, добавляют криопротектор, эквилибрируют и помещают в морозильную камеру при

-75 С, где вращают горизонтально со ско136806

Та блица 1

Проинкубировано яиц, шт.

Способ

83,0

71,8

1555

Предлагаемый

Известный !1) 60,9

41,6

320

1 з ростью 6 об/мин в течение 180 с, затем в камеру на 60 с пускают пары азота.

После этого емкости с намороженной спермой опускают в хладагент для хранения. Оттаивают в водяной бане при

50 — 55 С. Оплодотворенность яиц кур, осемененных оттаянной спермой в дозе

0,2 — 0,23 мл в один раз в три дня, составляет соответственно 87,7; 82,7; 73,6;

74,2о/p.

В таблице 2 даны результаты искусственного осеменения кур спермой криоконсервированной с различными средами по предлагаемому способу.

Пример 3. Сперму гусей разбавляют 1:3 средой для замораживания при комнатной температуре, разливают по 1 — 2 мл в флаконы из-под пенициллина (объемом 12 см и диаметром 0,2 м), закрепляют в устройство для вращения, помещают в холодильник при 2 — 4 С на 30 мин. Добавляют криопротектор (5 /p этиленгликоля или 8 /p диметилацетамида), эквилибрируют и помещают в морозильную камеру при -75 С, где вращают горизонтально 180 с со скоростью

8об/мин. Потом в камеру на 60 с пускают пары азота, после чего флаконы со спермой, намороженной слоем толщиной

0,1 — !,0 мл, опускают в хладагент на хранение. Оттаивают в водяной бане при

60 — 65 С. Оплодотворенность яиц гусынь, осемененных оттаянной при 65 С спермой в дозе 0,2 мл один раз в пять дней, составляет 76,6 и 83,3о/о с выводом молодняка

69,1 и 74 7о/о

В табл. 3 представлены результаты искусственного осеменения гусей спермой криоконсервированной по предлагаемому способу с различными криопротекторами.

Пример 4. Сперму птиц разбавляют средой для замораживания, . разливают во флаконы из-под пенициллина (объемом

12 см и диаметром 0,2 м), закрепляют в устройство для вращения и помещают в холодильник при 2 — 4 С на 45 мин, добавляют криопротектор, эквилибрируют и помещают в морозильную камеру при

10 - 60 С, где вращают горизонтально со скоростью 12 об/мин, 180 с, после чего в камеру пускают пары азота в течение 60 с.

Емкость хранят в хладагенте. Оттаивают при 50 — 55 С, осеменяют кур по 0,2 — 0,23 мл раз в три дня. Оплодотворенность яиц кур, осемененных такой спермой, 55,0 /о (проинкубировано 400 яиц).

Пример 5. Сперму птиц разбавляют средой для замораживания, разливают во флаконы из-под пенициллина, закрепляют

20 в устройство для вращения и помещают в холодильник с 2 — 4 С на 45 мин, добавляют криопротектор, эквилибрируют и помещают в морозильную камеру при -120 С, где и вращают горизонтально со скоростью

12 об/мин, в течение 180 с, затем в камеру на 60 с пускают пары азота. Хранят емкости в хладагенте. Оттаивают при 50 — 55 С, доза осеменения — 0,2 — 0,23 мл. Оплодотворенность яиц кур, осемененных такой спермой, 18,7о/о.

З0 Предложенный способ замораживания спермы птиц может быть применен в практических условиях для длительного хранения спермы и использования ее в селекционной работе.

Оплодотворение, 7 Вывод молодняка, 7

1136806

Т а блица 2

Проинкубировано яиц. шт.

Среда

Куры яичной породы

123

87,7

78,9

Лейка

75,4

82,7

73,6

74,2

Таблица3

Криопротектор

По предлагаемому способу: с 5% ЭТГ

69,1

76,6

74,7

83,3

90 с 87 ДМАА

126

По известному (21

53,2

73,0

ЛКС-1

ВИРГЖ-2

ЛКС-1

Оплодотворение, 7. Вывод молодняка, Ж

Куры мясных пород

Проинкубировано Оплодотворение, 7 Вывод молодяиц шт. няка, Ж

Составитель В. Романова

Редактор И. Ковальчук Техред И. Верес Корректор В. Синицкая

Заказ 10353/3 Тираж 722 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент>, г. Ужгород, ул. Проектная, 4