Способ определения флавоноидов

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (191 (11) (59 4 С 01 N 33/48 (21) 3466302/28-12 (22) 08.07.82 (46) 23.02.86.Вюл. 1! 7 (71) Иркутский государственный медицинский институт (72) В.А.Пешкова, А.А.Шамырина и В.М.Мирович .(53) 615.32(088.8) (56) В.А.Пешкова, M.Ï,Øóìàéëîâà.

Изучение препаратов растительного и синтетического происхождения. Тезисы научной межвузовской конференции. Томск, 1978, ч.1, 103-104. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЛАВОНОИДОВ путем экстракции растительного сырья этанолом, ферментолиза, растворения агликонов в этаноле с последующей хроматографией на бумаге, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и сокра- щения времени анализа, экстракцию проводят 70-807.-ным этанолом в течение 1,5-2 ч на кипящей водяной бане, затем агликоны разделяют методом противоточной хроматографии с последовательной сменой систем

10-!57 и 55-65Х-ной уксусной кислоты.

1213415

Изобретение относится к анализу лекарственного растительного сырья и может быть использовано для оценки доброкачественности сырья.

Целью изобретения является повышение точности и сокращение време ни анализа.

Пример. Точную навеску, 0,5007 г (А) травы змееголовника поникшего, проходящей через сито с размером отверстий 2 мм, помещают в. колбу емкостью 100 мл, заливают

50 мл (7 „ ) 75Х вЂ но этанола,предварительно взвешивают и экстрагируют на водяной бане (й 85 С ) в о течение 2 ч в колбе с обратным холодильником. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры, доводят да первоначального веса 75Х-ным этаколом и отфильтровывают через фильтр.

Извлечение в объеме 25 мл (Ч, „ ) переносят в выпарительную чашку и удаляют спирт нагреванием на водяной бане. Оставшееся водное извлечение количественно переносят в делительную воронку на 50 мл. Хлорофилл со стенок выпарительной чашки смывают 10 мл хлороформа, добавляя его порциями по 3-4 мл, хлороформ присоединяют к водному извлечению в делительной воронке.

Содержимое делительной воронки аккуратно перемешивают встряхиванием и оставляют в покое до полного расслоения водного и хлороформного слоев.

Затем хлороформное извлечение от— деляют и водный слой сливают в ту же выпарительную чашку. Делительную воронку дважды споласкивают дистиллированной водой порциями по 2 мл и присоединяют к содержимому в выпарительной чашке.

К очищенному таким образом водному извлечению прибавляют 0,1 г фермеитного препарата "Пектаваморин Г

10х" и гидролиз проводят в течео рие 72 ч в термостате при 38 С.

Полноту ферментолиза контролируют методом двухмерной бумажной хроматографии в системах бутанол — уксусная кислота - вода (4:1:2) и

l5X-ная уксусная кислота, -просматривая хроматограммы в УФ-свете.

По окончании ферментолиза гидродизат обрабатывают 95Х-ным этанолом о подогретым до 50 С, добавляя его порциями по 2-3 мл. Спиртовый раст10

2 вор агликонов фильтруют в мерную колбу на 25 мл. Полноту растворения агликонов контролируют капельной пробой на фильтровальной бумаге, отработанной 1Х-ным спиртовым раствором хлористого алюминия. Объем доводят до метки (V,„ ), тщательно обрабатывая чашку и фильтр этанолом.

Полученный раствор агликонов в объеме 0,2 мл (VÄ Ä) нано ят на лист хроматографической бумаги. марки "М" на линию старта сплошной полосой и проводят противоточное хроматографирование, дпя чего хроматографируют в одном направлении в !2Х-йой уксусной кислоте, обеспечивая развитие хроматограммы на всю длину хроматографического листа, После просушивания хроматограммы просматриванием в УФ-свете определяют распо-. ложение флавоноидов и фенолкарбоновых кислот. Затем зону А, соответ; ствующую расположению фенолкарбоновых кислот, срезают. Оставшуюся часть хроматограммы развивают в противоположном направлении в системе

60Х-ной уксусной кислоты. После высушивания хроматограммы детекцию агликонов проводят просматриванием в

УФ-свете.

Зоны хроматограммы, соответствую- . щие определяемым агликонам, paspeзают и высушивают в термостате при о

40-50 С до исчезновения запаха уксусной кислоты. Подготовленные таким образом кусочки хроматограмм помещают в пробирку со шлифом, заливают 4 мл (Van ) абсолютного, этанола и оставляют до достижения равновесной концентрации (2 ч - для апигенина и 4 ч — для лютеолина .

Параллельно аналогичным способом, получают элюаты стандартных агликонов лютеолина и апигенина, обеспев чивая концентрацию их в элюате по

1О мкг/мл.

Оптическую плотность элюатов измеряют на спектрофотометре СФ-16 в области аналитической длины волны (338 нм — для апигенина и 350 нм для лютеолина) при толщине поглощающего слоя 1 см.

В качестве раствора сравнения используют элюат холостой пробы, обработанной аналогичным образом.

Сравнительные данные известного и предлагаемого способов представлены в таблице.

1213415

Относительная ошибка определения, Х

Определяемые агликоны известного способа - предлагаемого способа

6,26

4,76

Тактами образом, точность определения по предлагаемому способу, выше так как относительная. ошибка

Составитель Е.Кссчина

Редактор Т.Кугрышева Техред M.Ïàðîöàé Корректор Т,Колб

Заказ 778/55 Тираж 778 . Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул.Проектная, 4

Лют еолин

Апиге вин

10,60

13,72 определения ниже.Крометого,время анализа по известному способу составляет

104,8 ч,по предлагаемому - 82,4 ч.