Способ дифференциальной диагностики тиреотоксического и нетоксического зоба у детей

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИ4ЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

09) (11) OllHCAHHE ИЗОБРЕТЕНИЯ ц

К ABTOPCHOlVlV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР пО ДЕЛА ИЗОБРЕТЕНИЙ V ОТКРЫТИЙ (21) 3469823/28-14 (22) 08.06.82 (46) 28.02.86. Бюл. В 8 (7 1) Ленинградский ордена Трудового

Красного Знамени педиатрический медицинский институт (72) Л.А.Сальникова и Е.Е.Дубинина (53) 616. 438 (088. 8) (56) Авторское свидетельство СССР

Ф 602162, кл. А 61 В 10/00, 1978. (54) (57) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ

ДИАГНОСТИКИ ТИРЕОТОКСИЧЕСКОГО И НЕТОКСИЧЕСКОГО ЗОБОВ У ДЕТЕЙ путем (Ю У А 61 В 10/00 G 01 и 33/48 определения активности фермента в крови, отличающийся тем, что, с целью ранней диагностики, в эритроцитах определяют активность супероксиддисмутазы и при значениях ее у детей в возрасте 3-12 лет

1,41-1,69 усл.ед./мп и 1,041, 26 усл. ед. /мл диагностируют соответ ственно тиреотоксический и нетокси" ческий зобы, а при значениях активности супероксиддисмутазы 1,691, 87 усл. ед. /мл и 1, 26-1, 48 усл. ед. /мп в 13" 14 лет диагностируют тиреотоксический и нетоксический зобы соответственно.

Изобретение относится к педиатрии, точнее к лабораторным способам дифференциальной диагностики тиреотоксического и эутиреоидного увеличения щитовидной железы у детей.

Цель изобретения — проведение ранней диагностики тиреотоксического и нетоксического зобов у детей путем определения в эритроцитах активности супероксиддисмутазы.

Способ осуществляют следующим образом, У ребенка с увеличенной щитовидной железой берут 1-2 мп крови, в ,качестве антикоагулянта используют гепарин. Эритроциты отмывают от плазмы физиологическим раствором

3-4 раза с повторным центрифугированием (6 тыс.об./мин при t = 4 C). ь

Отмытые эритроциты геомолизируют добавлением раствора трис-НС1

{5 мМ) в соотношении 1: 10. Гемоглобин осаждают смесью этанола с хлороформом (соотношение 1: 0, 25: О, 15) с последующим перемешиванием и центри1)угированием (12 тыс.об./мин при

= 4 С) По 15 мин.

Об активности фермента в надосадочной жидкости судят по степени ингибирования восстановления нитросинего тетразолия в присутствии НАДН и феназинметасульфата.

Инкубацию осуществляют в течение 10 мин в темноте при комнатной температуре (20-22 C) в аэробных усО ловиях. В состав инкубационной смеси входят 1 мкИ ЭДТА, 1 мг желатины, 0,407 мМ нитросинего тетразолия, 1,8 мкИ феназннметасульфата и 0,1 мл 1 мМ раствора НАДН . Общий объем инкубационной смеси доводят до 3,0 мл фосфатным буферным раствором (0, 15 N) с рН 7,8. В контрольной пробе содержатся все компоненты реакционной смеси за исключением препарата фермента. НАДН добавляют в контрольную и опытную пробы в последнюю очередь. В опытную пробу помещают 0,04-0,06 мл надосадочной жидкости, что вызывает торможение восстановления нитросинего тетразолия от 30 до 707. Наблюдают линейную зависимость между объемом надосадочной жидкости (количеством фермента) и скоростью ферментативной реакции.

Измерение проводят на спектрофотометре при длине волны 540 нм.

214090 2

Степень ингибирования определяют по следукицей формуле: т - " Е оо), F- к где Т вЂ” процент ингибирования скорости реакции, Š— оптическая плотность инхук бационной смеси в отсутст10 вин ферме нт а, Š— оптическая плотность инкуб бационной смеси в присутствии фермента.

Активность супероксиддисмутазы

15 выражают в условных единицах. 50Х ингибирования скорости реакции соответствует одной условной единице (1 усл.ед.).

Т

100 — Т ) где А — количество условных единиц, Т вЂ” процент ингибирования скорости реакции.

25 Полученное количество условных единиц относят к 1 мл эритроцитов и к 1 мг гемоглобина.

0,14 А

О, 02667 ° А

2 Е„У. а где А, — активность фермента, усл.ед./мл эритроцитов

35 А — активность фермента, 2 усл.ед./мг гемоглобина;

А — количество условных еди=.. ниц;

У вЂ” объем добавленного супернатанта

Е„ — оптическая плотность

0,1 мл гемолизата, разбавленного 5 мл аммиака (0,024 н.) при длине волны

540 нм, О, 14 — постоянный коэффициент, отражакиций разведение эритроцитов, 0,0266? — постоянная цифра, складывающаяся из разведения эритроцитов и постоянного коэффициента экстинкции (190,5) 1 г гемоглобина в кювете 3 см при дли5S не волны 540 нм.

Активность супероксиддисмутазы эритроцитов у детей с зобом сравнивают с активностью фермента в контСоставитель И.Позняк

Техред А.Бабинец Корректор А.Зимокосов

Редактор М.Петрова

Заказ 811/5 Тира;к 659 Подпис ное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная, 4

3 12 рольной группе здоровых детей соответствующего возраста.

Пример 1. Больная П-ва, возраст 9 лет. Поступила с жалобами на раздражительность, увеличение щитовидной железы. При поступлении щитовидная железа диффузно увеличена (II степени). Клиническая картина тиреотоксикоза стерта ° В пользу диффузного токсического зоба свидетельствовала тахикардия (100 уд./мин),.

Глазные симптомы не выражены: несколько расширены глазные щели, небольшой блеск глаз. Симптомы Мебиуса, Грефе, Кохера отрицательные.

Артериальное давление нормальное (110/60 мм рт.ст.). В это время ак— тивность супероксиддисмутаэы была уже повышена: 1,52 усл.ед./мг гемоглобина, 364,0 усл.ед./мл эритроцитов. При повторном клиническом наблюдении через 2 мес, когда у девочки развилась типичная картина тиреотоксикоза, и после определения супероксиддисмутазной активности эритроци тов (1,63 усл.ед./мг гемоглобина, 38 1,5 усл.ед./мл эритроцитов) был уточнен диагноз диффузного токсичес- кого зоба II степени, тиреотоксикоза I степени.

Пример 2. Больная Ч-на, возраст 14 лет. Поступила с подозрением на диффузный токсический эоб.

За год потеряла в весе 4 кг, отмечалась потливость, чуство жара, утомляемость, повышенная раздражительность, плохой сон. Увеличение щитовидной железы замечено месяц назад. У матери также имеется увеличение щитовидной железы. При поступлении клиническая картина стерта.

В пользу диффузного токсического

14090 4 зоба свидетельствовала тахикардия (100 уд. /мин) . Щитовидная железа диффуэно увеличена (ТI степени).

Активность супероксиддисмутаэы измерена на следукщий день пребывания ребенка в отделении и соответствовала возрастной норме:

1,42 усл.ед./мг гемоглобина;

319,0 усл.ед./мл эритроцитов. При

II0 повторном осмотре поставлен диагноз: диффузный нетоксический зоб ТТ степени. Вегетососудистая дистония.

Пример 3. Больная К-на, возраст 8 лет. Поступила с подозрением на диффузный токсический зоб с жалобами на боли в области сердца, сердцебиение, периодически возникающее чувство жара. Наследственность отягощена: у матери был диффузный токсический эоб, леченный оперативно. При поступлении отмечена тахикардия (92 уд./мин), при беспокойстве — до 120 уд./мин. Щитовидная железа диффуэно увеличена (II степени). Активность супероксиддиомутазы также соответствовала нормальным возрастным показателям.

1,04 усл.ед./мг гемоглобина, 30 223,5 усл.ед./мл эритроцитов. Диагноз: диффузный нетоксический зоб

II степени. Вегетососудистая дистония .

Во всех случаях диагнозы были подтверждены клиническим наблюдением и параклиническими методами обследования (ЭКГ, определение холеастерина в сыворотке крови, в некоторых случаях радиоиммунологические и радиоизотопные методы исследования функции щитовидной железы).