Способ получения средства,селективно тормозящего размножение нормальных и лейкемических клеток

 

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУбЛИН (19) (И) 1 у 4 А 61 К 35/28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ @rp:,К llATEHTY

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОбРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3396892/28-14 (62) 3230703/28-14 (22) 23,02,82 (23) 14.01.81 (31) 66/80 (32) 15.01.80 (33) HU (46) 30.04.86. Бюл. N- 16 (71) Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр

РТ (HU) (72) Андраш Балаж, Михай Шайго, Лайош Кишфалуди, Тибор Клупп и Миклошне Барабаш (HU) (53) 615 ° 45:664:38:543.544(088,8) (56) Патент Венгрии 162447, кл. G 01 М 13/00, 1967. (54)(57) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СРЕДСТВА, СЕЛЕКТИВНО .ТОРМОЗЯЩЕГО РАЗМНОЖЕНИЕ

НОРМАЛЬНЫХ И ЛЕЙКЕМИЧЕСКИХ КЛЕТОК, путем экстрагирования сырья животного происхождения органическим растворителем, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения чистоты и активности целевого продукта, в качестве сырья используют селезенку теленка, которую гомогенизируют в органическом растворителе, смешивающемся с водой, отделяют твердую фазу и проводят ее экстрагирование вначале жирорастворяющим органическим растворителем, затем водой, отделяют жидкую фазу и из нее вьделяют фракцию с молекулярной массой менее 10000, после чего вьделенную фракцию подвергают гель-хроматографии и вьделяют фракцию, осаждающуюся между объемными значениями

/ 1,3 и 2,5, лиофилизируют ее, хроматографируют и/или проводят бумажный электрофорез, выделяя белок, положительно реагирующий на хлор" толидин с относительной подвижностью

0,55 и 0,65 в пересчете на аспарагиновую кислоту и показывающий отри-. цательный заряд при рН 6,5 или отсутствие заряда при рН 1,9 с относительной подвижностью 0,26 в пересчете на E-ДНП-лизин с последующей лиофилизацией.

1228776

Т а б л и ц а 1

Thymus — торможение, 7 контроля

В костный мозг — торможение, 7. контроля

Количество опытов

14,6

0,001

53,2

«0,2

7,3

Изобретение относится к медицине, а именно к производству средств, которые могут быть использованы как лекарственные, и касается получения средства, обладающего фармакологической активностью из сырья животного происхождения °

Целью изобретения является повышение частоты и активности целевого продукта, 1О

Способ осуществляется следующим образом.

Пример 1, Получение фракции

61-3 из селезенки теленка.

1000 r очищенной и измельченной селезенки теленка смешивают с охлажо денным до 4 С ацетоном до получения общего объема 4 л, смесь гомогенизируют при этой температуре, в течение 60 мин инкубируют и затем центрифугируют. Отделенное твердое вещество промывают ацетоном и высушивают в вакууме при 20 С.

Сухое твердое вещество экстрагируют 2 л хлороформа в течение 30 мин, затем твердое вещество отделяют, высушивают при комнатной температуре

16 ч, перемешивают 3 л дважды дистиллированной воды и затем центрифугируют с 20000 г. Отделенную жидкость лиофилизируют, лиофилиэат растворяют в 0,05 М буферном растворе кислого карбоната аммония (рН-7,9) и подвергают гель-хроматографии на колонке

Сефадекс 0-15. Фракцию, осажденную между Y / 1 1,3 и 2,5, отделяют и лиофилизируют. Таким образом, получают

3,54 г концентрата эффективного вещества 01-3 в виде белого порошка.

Пример 2. Получение чистого 40 эффективного вещества GP.

300 мг концентрата эффективного вещества 61-3, полученного по примеру 1, наносят на хроматографическую бумагу ватман ЗММ, исходный пункт расположен в середине листа, и общее количество нанесенного образца распределяется по длине 30 см. Электрофорез проводят в буферной смеси из пиридина, уксусной кислоты и воды в объемном соотношении 90:4:900 (рН6,5) в аппарате для электрофореза с горизонтальным расположением, градиентом напряжения 50 В/см и продолжительностью 2 ч. Положение кислого положительно реагирующего на хлор и отрицательно на нингидрин компонента определяют по окраске хлоргидрином. Полученный таким образом активный компонент элюируют с бумаги буферной смесью из уксусной, муравьиной кислот и воды в объемном соотношении 8;2:90 (рН 1,9) и в такой же буферной смеси подвергают дополнительному электрофорезу с градиентом напряжения 80 В/см и продолжительностью 90 мин. Положение активного компонента, не показывающего при этом значения рН заряда, определяют с помощью реакции хлортолидина, Этот активный компонент элюируют такой же буферной смесью (рН-1,91) и элюат лиофилизируют. Таким образом, получают 8 мг чистого эффективного вещества GP в виде белого порошка.!

Селективное действие 100 мг/мл

GP на введение Н-тимидина в кислод тонерастворнмую дезоксирибонуклеиновую кислоту в культурах костного мозга и Thymus показано в табл. действие И-3 и &Р-6-в табл. 2.

1228776

Таблица 2 мг/мг

G1-3

Тип действия ь

Е

МЭК

МЭК

7,8

2,5

430

110

1,6

0,2

90 концентрация.

Полученное в соответствии с изобретением вещество GP можно применять в качестве биологически активного вещества для торможения размноСоставитель Л. Шилина

Редактор И. Рыбченко Техред И.Верес

Корректор. С. Черни

Заказ 2301/62 Тираж 660 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

МФ 3

Введение Н-тимидина в суспензионную культуру костного мозга (3-4 ч) фМ

Образование колоний в капиллярах геля агара (7 дн.) ф

МЭК вЂ” минимальная эффективная

1ф

Все значения измерены.

Все значения подсчитаны.

%Ф жения нормальных и лейкемических кровяных клеток или клеток костного мозга .in vitro в концентрациях 0,210,0 пмоль/мл.