Штамм @ @ сн-1-продуцент @ -валина

 

Штамм Corynebacterixjm glutami- cum CH-l (коллекция музея промьшшенных микроорганизмов Института ВНИИгенетика, коллекционный номер ЦМПМ-В- -3139) - продуцентL-валика. (Л с к ее ю О5 оо

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

RO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3813272/28-13 (22) 20.11.84 (46) 23.05.86. Бюл. У 19 (7l) Научно-исследовательский технологический институт аминокислот (72) С.В.Кажоян, Н.С.Бабасян, M.Á.×èò÷ÿí, Б.П.Карабеков и А.С.Ханамирян (53) 668. 394 (088. 8) (56) Та Kayasu Tsuchida et al. Production of 1. -valine big 2-Thiazolealanine Resistant Mutants Derived

from glutamic acid Producing Bacteria. — Agr. Biol. Chem., 33 (6), 1975, 1319-1322.

Патент Франции 11 2349651, кл. С 12 P 13/08, опублик. 1977.

„.Я0„„232681 А 1 (5D 4 С 12 P 13/08 // g 12 "Р И/68; — — - -..:

12 l:15 (54) ШТАМИ CORYNEBACTERIUM GLUTAMICUM СН-1 — ПРОДУЦЕНТ . -ВАЛИНА, (57) Штамм Corynebacterium glutamicum СН-1 (коллекция музея промышленных микроорганизмов Института "ВНИИгенетика", коллекционный номер ЦИПИ-В-3139) " продуцент L --валина.

l 232681

Изобретение относится к микробиологической промышленности и представляет собой новый штамм Corynebacterium .glutamicum СН-1, обладающий свойством продуцировать L -- валин,,на- 5 ходящий применение в медицине для приготовления аминокислотных смесей для парентерального введения, в химикофармацевтической промьппленности для синтеза гормонов белковой при10 роды (ийсулина, гормона роста и т.д.) а также в микробиологии и биохимии для исследовательских целей.

Цель изобретения — получение штамма Corynebacterium д2ы аппcum CH-l, 15 продуцирующего L -валин с большей активностью, расширяющего коллекцию штаммов — продуцентов валина, позволяющего упростить процесс получения валина в промышленных масштабах

20 вследствие значительного уменьшения количества компонентов ферментационной среды.

Схема получения штамма Corynebac25

terium glutamicum СН-1, С.glutamicum, АТСС 13032 (исходный штамм). (биотин, тиамин ) отбор ауксотрофных мутантов после обработки N-метил-N -нит30

1 ро=2Ч-нитрозогуанидином (химический мутаген).

Ауксотрофные мутанты отбор на продуктивность по

L -валину

С.g.lutamicum-!78

35 (биотин, тиамин, аргинин

8-10 г/л 1. -валина)

i отбор мутантов, устойчивых к -аминомасляной кислоте.

Мутанты, устойчивые к с †.аминомасляной кислоте отбор на продуктивность по

1--валину

С. glutamicum АН-10 (биотин, тиамин, аргинин, устойчив к d.-аминомасляной кислоте, 14-15 г/л L -валина) отбор мутантов, устойчивых к

S-2-аминоэтилцистеину.

Мутанты, устойчивые к S-2-аминоэтипцистеину

t отбор на продуктивность по

Ь-валину 55

С. glutami curn СН-1 (биотин, тиамин, аргинин, устойчив к -аминомасляной кислоте и S-2-аминоэтилцистеину, 20-22 г/ .

4 -валина) .

Штамм имеет следующие морфо-культуральные признаки. Клетки овальные, короткие палочки размеров 0,6

1,2 мк, бесспоровые, грамположительные, неподвижные. На мясопептонном агаре на 3-и сутки роста образует колонии диаметром 2,0-3,0 мм, круглые с ровными краями, непрозрачные, блестящие, кремового цвета. Рост штриха на 2 сут умеренный, поверхность гладкая, цвет кремовый. На мясо-пептонном бульоне поверхностной пленки не наблюдается, образует осадок.

Физиологические свойства. Аэроб, хорошо растет при 29 — 30 С, рН 6,8

7„8. Использует нитраты, мочевину, соли аммония. Ассимилирует глюкозу, сахарозу, мальтозу, ксилоэу, галактозу, маннозу, ацетат натрия, слабо использует этиловый спирт, не сбраживает лактозу.

Штамм ауксотрофен по аргинину, биотину, тиамину, усточив к ы -аминомасляной кислоте и S-2-аминоэтилцистеину, на питательной среде, содержащей мелассу и гидролизат БВК, синтезирует 20- 22 г/л L -валина.

Пример 1. Культуру Corynebacterium g2utamicum СН-1 выращивают в пробирках со скошенным агаром (1,2X мясо-пептонный агар) при

28 — 30 С в течение 18 — 24 ч. 5Х посевного материала, полученного смывом стерильной водой с агаровых косяков, вносят в 250 мл колбы, содер :ащие 10 мл ферментационной среды следующего состава мас.7.: меласса

20; БВК 15; СаСО 2, рН 7,2-7,4.

Колбы помещают на круговую качалку (скорость вращения 180 об/мин) и проводят ферментацию в течение 72 ч при

28 — 30 С. Содержание L -валина в культуральной жидкости 20 г/л.

Пример 2. Процесс проводят аналогично примеру 1, только смыв культуры со скошенных агаров переносят в колбы емкостью 750 кп, содержащие 30 мл посевной среды следующего состава, мас.X: меласса 4, БВК 4,8„ рН среды 7,2 — 7,4. Колбы помещают на круговую качалку со скоростью вращения 180 об/мин и выращивают в течение 16 — 18 ч лри 28-30 С. 57. приготовленного таким образом посевного материала засевают в ферментационные

1232681 4 ральной жидкости составляет 22 г/л, что на 8-12Х выше по сравнению со способом, осуществляемим с активностью известного штамма. колбы (250 мл), содержащие 10 мл ферментационной питательной среды, и далее процесс проводят как в примере I. Содержание I.-âàëèíà в культуСоставитель Н.Афанасьева

Техред И.Попович Корректор И.Муска

Редактор Н. Гунько!

Заказ 2737/27 Тираж 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, r.ужгород, ул.Проектная, 4