Штамм @ @ @ 9-тест-культура для определения @ -фенилаланина

 

Штамм Pseudomonas species М9 (коллекция музея культур промышленных микроорганизмов Института ВНИИ- генетика, коллекционный номер В-3244) - тест-культура для определения L-фенилаланина. СП 4 О

А1 (1% (И) 159 4 С f2 P 13/22 /! С 12 R 1:38

С 2Р 22

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ/ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ И306РЕТЕННИ И ОТНРЫТМЙ (21) 3864844/28-13 (22) 01.03.85 (46) 30.08.86. Бюл. У 32 (71) Белорусский ордена Трудового

Красного Знамени государственный университет им. В.И. Ленина (72) Н.П. Максимова, И.Н. Олехнович, P.,À. Желдакова и Ю.К. Фомичев (53) 663.18 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

В 1191464, кл. С 12 P 13/22, 1985.

Bergey $ Nanual oE Determinativa

Bacteriology. 8th Ed, Baltimore, 1974. (54) ШТАММ PSEUMNONAS SPECIES М9

ТЕСТ-КУЛЬТУРА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ Ь-ФЕН ИЛЛЛАНИНА. (57) Штамм Pseudomonas species И9 (коллекция музея культур промыпшенных микроорганизмов Института "BHHHгенетика", коллекционный номер

В-3244) — тест-культура для определения Ь-фенилаланина.

Штамм Pseudomonas species M9 хранится в Центральном музее промышленных микроорганизмов "ВНИИгенетика" (Москва), Р В-3244.

Штамм Рзеийошопаа sp. «Ч9 имеет следующие характеристики.

1 12

Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается нового штамма, являющегося тесткультурой для определения L-фенилаланина.

Целью изобретения является получение нового штамма Pseudomonas species N9 специфичного и чувствительного к содержанию L-фенилаланина в среде, с помощью которого можно выявлять продукцию L-фенилаланина, начиная с 0 5 мкг/мл, на простых по составу жидких и агаризованных минеральных средах среди различных групп микроорганизмов, в том числе ассимилирующих низшие спирты (этанол и метанол) в качестве источника углерода и энергии.

Предлагаемый штамм Pseudomonas

species И9 получен с. помощью мутагенеза Б-метил-М -нитро-N-нитрозогуанидином и является ауксотрофным фенилаланинэависимым мутантом штамма дикого типа Pseudomonas species, выделенного из сточных вод Минского завода медпрепаратов.

Идентификацию мутации Phe у бактерий Pseudomonas speci.es N9 осуществляли по отсутствию способности расти на минеральных средах без

Ь-фенилаланина. Иинимальная концентрация Ь-фенилаланина, обеспечивающая рост бактерий этого штамма в жидких и агаризованных минеральных средах, соответствует 0,5 мкr /мл.

Морфологические особенности штамма. Клетки прямые, палочковидной формы с округленными концами„

О,б 2-3р подвижные с 2-4 монополяр- ными жгутиками, грамотрицательные, спор не образуют.

Культуральные признаки. Колонии на агаризованных питательных средах (мясо-пептонном агаре, Кинг В агаре) гладкие, плоские, круглые, край ровный, серовато-белые. Через 24 ч при

28 С образуют колонии размером 23 мм. Рост по уколу в. ЯПА умеренный в основном на поверхности среды. В жидких питательных средах образует интенсивную муть.

54005 2

Хорошо растет на минеральных средах простого состава, дополненных

L-фенилаланином, и не нуждается в добавлении ростовых факторов и других аминокислот.

Физиолого-биохимические признаки.

По отношению к кислороду — облигатный аэроб. Оптимальная температура роста 28-30 С, рН среды в пределах

10 6,8-7,8. Азот утилизирует в виде солей аммония, мочевины, нитратов.

Пигменты. Образует желто-зеленый водорастворимый флюоресцирующий пигмент на Кинг В агаре. Внутрикле15 точного пигмента не образует.

Реакция на оксидазу и каталазу положительная. Реакция Фогес-Проскауэра отрицательная. Индол не образует. Тест на анаэробную аргинин-де2О гидролазу положительный. Реакция на анаэробную денитрификацию отрицательная. Лецитинаэная активность отсутствует.

Н гидролиэует крахмал, желатин, 25 Твин-80.

B качестве источников углерода используют глюкозу, глицерин, сахарозу, галактозу, мальтоэу, фруктоэу, этанол, метанол, тирозин, фенилаланин, орнитин, глицин, лейцин, глютаминовую кислоту, аснарагиновую кислоту. Не утилизирует арабинозу, маннозу, ксилозу, лактозу, маннит, раффинозу, дульцит, сорбит, целлобиозу, инозит, серии, лизин, триптофан, антраниловую кислоту, ацетамид.

Штамм идентифицирован как Pseudoшопаз species согласно определителю

Bergey.

Пример 1. Определение про дукции Ь-фенилаланина с помощью тест-культуры Pseudomonas species N9 производят следующим образом. Делают посев культуры Pseudomonas зресхез М9 с косяка в МПБ (мясо-пептонный

45 бульон) либо другую питательную среду, обеспечивающую рост бактерий, и культивируют в течение 10-12 ч при

28 C. Затем бактериальные клетки отмывают дважды физиологическим раствором с помощью центрифугирования (10 мин, 5000g) и ресуспендируют до первоначального объема в .этом же растворе, 0,1 мл суспензии клеток вносят в пробирку с 4 мл расплавленного и охлажденного до 45 С минимального полужидкого агара (0,77), приготовленного на основе минеральной среды, содержащего в

Составитель И, Афанасьева

Техред М.Коданич Корректор Л. Пилипенко

Редактор Л. Повхан

Заказ 4687/29

Тираж 490 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, %-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная,4

3 1254 качестве источника углерода глюкозу (в концентрации О, 2 ), и наслаивают вторым слоем на поверхность агариэованной среды {1,5 ) того же состава.

После застывания верхнего слоя с культурой уколом делают посевы от. дельных клонов испытуемых ла продукцию Ь-фенилаланина культур микроорганизмов, утилизирующих в качестве источника углерода и энергии глюкозу 10 (по 20-30 клонов на чашку Петри).

Пробы выращивают в течение 24-48 ч при 28-30 С. Вокруг колоний, клетки которых продуцируют Ь-фенилаланнн, наблюдаются четкие, интенсивные эоны 15 роста индикаторной тест-культуры !

Pseudomonas зр. И9, размеры которых зависят от количества синтезируемого Ь-фенилаланина.

Пример 2. Посевной материал 2о тест-культуры Pseudomonas sp. И9 и последующие процедуры производят как в примере 1, за исключением того, что в качестве источника углерода и энергии в используемые мине- 25 ральные среды добавляют вместо глюкозы этанол (в концентрации 1 ) и делают посевы испытуемых на продук005 4 цию L-фенилаланина культур микроорганизмов, утилизирующих этанол.

Пример 3. Посевной материал тест-культуры Pseodomonas sp. И9 и последующие процедуры производят, как в примере 1, за исключением того, что в качестве источника углерода и энергии в используемые минеральные среды добавляют метанол (в концентрации 1Х) и делают посевы испытуемых на продукцию Ь-фенилаланина культур микроорганизмов, утилизирующих метанол. Пробы выращивают в течение 48-72 ч.

Штамм Pseudomonas sp. И9 является мутантом по Phe-гену, .что обеспечивает его потребность и высокую специфичность по отношению к Ь-фенилаланину. С помощью штамма Pseudomonas sp, И9 можно выявлять и изучать содержание Ь-фенилаланина, начиная с 0,5 мкг/мл, на простых по составу минеральных средах среди различных групп микроорганизмов, в том числе ассимилирующих низшие спирты (этанол и метанол) в качестве источников углерода и энергии.