Способ определения маркеров вирусных гепатитов

 

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СООИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

00 ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3765751/28-14 (22) Ob, 08. 84 (46) 23,09, 86. Бюл. Ф. 35 (71) Институт вирусологии им. Д. И, Ивановского (72) Е. Н, Прокудина, Н, П. Семенова, С. О, Вязов, Н. В. Дорощенко, В. А. Ананьев, В. N. Стаханова и В. И. Жданов (53) 615.373(088 ° 8) (56) Патент США Я 4012494, кл. G Ol И 33/ОО, 1977. (54) (57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ MAPKEPOB

ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ путем проведения радиоиммунологического анализа на твердой фазе и выявлением радиоактивности иммунного комплекса, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа нри сохранении

его высокой чувствительности, в качестве твердой фазы применяют полиэтиленовую пленку, а радиоактивность иммунного комплекса выявляют авторадиографически, )25841б

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики вирусных гепатитов человека, Цель изобретения — упрощение способа при сохранении его высокой 5 чувствительности за счет использования полиэтиленовой пленки в качестве твердой фазы и выявления радиоактивности методом авторадиографии.

Способ осуществляется следующим образом.

В качестве твердой фазы используют полиэтиленовую пленку (ПЭП) в виде бытовых "мешков полиэтиленовых хозяйственных" 400х230 см, толщина !

0,02 мм, цена 5 коп. Пригодна полиэтиленовая пленка любой толщины, ПЭП расчерчивают шариковой ручкой взаимоперпендикулярными линиями с интервалом 1 см. Затем ПЭП укладывают на стеклянную пластину (расчерченной стороной вниз), покрытую влажной фильтровальной бумагой. Точки пересечения линий служ;т точками нанесения реагентов. Реагенты наносят в объеме 20 мкл, инкубируют 3-18 ч во влажной камере при комнатной температуре и отмывают под струей холодной водопроводной воды, После отмывания последнего реагента — иодирован- 30 ного препарата антител (I-AT)

fig отмытую и высушенную ПЭП авторадиографируют, т. е. помещают на контакт с рентгеновской пленкой на 18 ч„

Рентгеновскую пленку затем проявляют.

Способ поясняется сл".дующими примерами, Пример 1. Диагностика гепатита В по выявлению НВзАд в сыворотках больных. 40

В точки на ПЭП наносят антитела против НВзАд (анти-НВ) в количестве 200 нг в объеме 20 мкл. Инкубируют во влажной камере при комнатной температуре 3 ч. ПЭП промывают под 45 струей водопроводной воды и высушивают фильтровальной бумагой, Наносят исследуемый образец — сыверотку человека, неразвеценную в объеме 20 мкл. Инкубируют при условиях в течение 18 ч. ПЭП промывают и высушивают.

Наносят I-анти-HBs 0,02 мкК в объеме 20 мкл. Инкубируют при условиях в течение 5 ч, ПЭП промывают, высушивают и.укладывают на контакт с рентгеновской пленкой на 18 ч. Рент- . геновскую пленку проявляют и визуально оценивают результаты. Отмечают номера затемненных точек, соответствующих образцам, содержащим HBsAg.

Таким образом, образцы, обеспечившие затемнение рентгеновской пленки, содержат HBsAg, а образцы не обеспечившие затемнение рентгеновской пленки, HBsAg не содержат.

Пример 2. Диагностика гепатита А по выявлению вируса в фекалиях.

В точки на ПЭП наносят антитела против вируса гепатита А (анти-НАУ) в объеме 20 мкл. Инкубируют во влажной камере при комнатной температуре 3 ч. ПЭП промывают под струей водопроводной воды и высушивают фильтровальной бумагой.

Наносят исследуемый образец— экстракт фекалий в объеме 20 мкл.

Инкубируют во влажной камере при комнатной температуре 18 ч. ПЭП промывают и высушивают.

Наносят I-анти-НАУ 0,02 мкК в объеме 20 мкл. Инкубируют во влажной камере 5 ч. ПЭП промывают, высушивают и помещают на контакт с рентгеновской пленкой на 18 ч. Рентгеновскую пленку проявляют и визуально оценивают результаты, Образцы, обеспечивают затемнение рентгеновской пленки, содержат вирус гепатита А, образцы, не обеспечивающие затемнение рентгеновской пленки, вируса гепатита А не содержат, Пример 3, Диагностика гепатита А но выявлению в сыворотках больных антивирусных антител класса М (I@M) .

В точки на ПЭП наносят антитела против антител человека класса М

{ анти-M) в объеме 20 мкл. Инкубируют во влажной камере при комнатной температуре 3 ч. ПЭП промывают под струей водопроводной воды и высушивают фильтровальной бумагой, Наносят исследуемый образец— анализируемую сыворотку человека в объеме 20 мкл. Инкубируют во влажной камере при комнатной температуре 18 ч.

ПЭП промывают и высушивают.

Наносят раствор, содержащий вирус гепатита А: вируссодержащий экстракт фекалий больного в объеме 20 мкл, инкубируют во влажной камере при комнатной температуре 5 ч. ПЭП про " мывают и высушивают.

1258416

Составитель М. Васильев

Редактор С, Патрушева Техред И.Верес

Корректор С. Черни

Заказ 5052/4 Тираж 660

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1 13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д, 4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, r, Ужгород, ул. Проектная, 4, 3

Наносят I-анти-НАУ 0,02 мкК в объеме 20 мкл. Инкубируют, отмывают и высушивают. ПЭП помещают на контакт с рентгеновской пленкой на 18 ч.

Рентгеновскую пленку промывают и визуально оценивают результаты, 4

Образцы, содержащие антитела против вируса гепатита А класса М, обеспечивают затемнением рентгеновской пленки. Образцы, не обеспечивающие затемнения рентгеновской пленки, антивирусных антител не содержат.