Способ выявления антигенов

 

Изобретение относится к медицине , а именно к лабораторному выявлению антигенов в организме. Цель изобретения - упрощение технической постановки способа выявления антигенов . В пробирку с цитратной кровью добавляют дистиллированную, воду. Суспензию клеток центрифугиpywTjf надоеадочную жидкость отсасывают . Осадок лейкоцитов ресуспендируют . К взвеси лейкоцитов добавляют 0,1-0,2 мл взвеси эритроцитариого антигенного диагностикума. Смесь инкубируют при температуре 37-37, в течение 5-6 мин и центрифугируют. Надосадочную жидкость удаляют, осадок ресуспендируют в интактиой сыворотке . Из полученной суспензии клеток делают мазок. Высушивают мазок , фиксируют его и окрашивают по Романовскому-Гимза. Под микроскопом в мазке подсчитывают число розетко (Л образукнцих клеток. 2 табл.

А1

«м an (so 4 А 61 К 39/ОО

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

°

° °

° °

М

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21);3387290/28-!4 (22) 25.01.82 ,(46) 07.11.86. Бюл. Ф 41 (71) Пермский государственный меди-,. цинский институт (72) А.С.Закс, А.А.Быкова и Т.А.Евтеева (53) 61 5 .373 (088 .8) (56) Фримель Х. Иммунологические методы. Мир, 1979,.с. 90. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторному выявлению антигенов в организме. Цель изобретения — упрощение технической постановки способа выявления антигенов ° В пробирку с цитратной кровью добавляют дистиллированную, воду. Суспензию клеток центрифугируют„ надосадочную жидкость отса" сывают. Осадок лейкоцитов ресуспендируют. К взвеси лейкоцитов добавляют 0 1-0,2 мл взвеси зритроцитарного антигенного диагностикума. Смесь инкубируют при температуре 37-37,5 С в течение 5-6 мин и центрифугируют °

Надосадочную жидкость удаляют, оса" док ресуспендируют в интактной сыворотке. Из полученной суспенэии клеток делают мазок. Высушивают мазок, фиксируют его и окрашивают по

Романовскому-Гимза. Под микроскопом в мазке подсчитывают число роэеткообразующих клеток. 2 табл.

1 126&1

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторному выявлению антигенов в организм".

Цель изобретения - ускорение и упрощение технической постановки 5 способа выявления антигенов при сохранении его специфичности и чувствительности.

Способ осуществляют следующим образом.

1О

Забирают одну-две капли крови (0,05-0,1 мл) иэ пальца обследуемого человека в центрифужную пробирку с

0,1-0,2 мл 5Х-ного свежеприготовленного раствора цитрата натрия для предупреждения свертывания крови.

После тщательного встряхивания про". бирки в нее добавляют для лизирования эритроцитов 0,8-0,9 мл дистиллированной воды. Суспензию клеток центрифугируют 5-6 мин при

1500 об./мин, после чего недостаточную жидкость отсасывают пипеткой, а осадок лейкоцитов ресуспендируют в 0,1-0,2 мл изотонического раство- 2S ра хлорида натрия . К полученной взвеси лейкоцитов добавляют 0,10,2 мл 0,5Х -ной взвеси зритроцитарного антигенного диагностикума и ннкубируют смесь при 37-3?,5 С в 30 течение 5-6 мин, после чего ее центрифугируит при 1500 об. /мин в течение

10-15 мин, надосадочную жидкость удаляют с помощью пипетки, а осадок ресуспендируют в капле любой интактной сыворотки (бычьей, лошадиной, человеческой)

Из полученной суспензии клеток делают мазок, который высушивают, фиксируют в метиловом (3-4 мин) или зтиловом (20-25 мин) спирте и окрашива- 40 ют по Романовскому-Гимза. Просматривают в мазке под микроскопом при

900-кратном увеличении l00 лимфоцитов, отмечая среди них число (в Х) лейкоцитов, фиксировавших на себе 45 три и более зритроцита (розеткообразующие клетки РОК).

50

Пример l. Через 10 мин после подкожного введения крысам про.зерина (50 мкг/кг) из хвоста получено 0 1 мл крови для осуществления . предлагаемого способа, после декапи тации собрано 5 мл крови для осуществления известного метода розеткообразования, Установлено, что в крови интактных крыс число розеток, специфичных прозерину, составляло соответственно 6,2+1,12 и 6,0+0,80%, 73

2 а в опыте через 10 мин после введения прозерина оно достигало соответственно 30,2 2,74 и 29,0+1,93Х.

Сравнительный анализ двух способов выявления антигена показал, что предлагаемый способ не уступает по чувствительности и специфичности известному, о чем свидетельствует практически равное число иммунных лимфоцитов, образующих розетки с эритроцитами, сенсибилизированными прозерином, которые выявлены как предлагаемым, так и известным способами.

Пример 2. В крови крыс, которым вводят под кожу 0,3 мл коммерческого раствора риккетсиозного антигена Провачека, с помощью предлагаемого способа выявлено 21,3+

+l,29K РОК, с помощью известного—

23,4+1,4Х, иммунных к антигену Провачека.

Обследование крови детей больных дизентерией и высевающих палочку

Флекснера показало, что число POK специфичных антигену последней колебалось в пределах от 30 до 40Х, тогда как число РОК, специфичных антигенам палочки дизентерии Зонне

"или Григорьева-Шига — в пределах 10

Напротив, если возбудителем болезни являлась палочка дизентерии Зонне, то число РОК, специфичных ее антигену, составляло около 40Х, а специфичных антигенам других возбудителей кишечной группы не превышало 10Х.

При доказательстве того, 1то предлагаемый способ не утрачивает специфичности по сравнению с известным

У установлено, что в крови животных

1 которым вводился сыпно-тифозный антиген Провачека, обоими способами не выявляются лимфоциты, иммунные к .близкому по антигенной структуре сыпно-тифозному возбудителю Музера. !

Результаты осуществления предлагаемого способа с использованием

0,05 мл исследуемой крови, 0,1 мл диагностикума, инкубацией длительностью 5 и 6 мин и температурой 37,0

37,5 С, приведены в табют. l .

Результаты осуществления предла" гаемого способа с использованием

0„l мл исследуемой крови,.0,2 мл диагностикума, инкубацией длительностью 5 и 6 мин и температурой .37,0 и 37,5"С привецены в табл. 2.

Достоверность отличия"

Время ин кубации, мин

При 37,0 С При 37,5 С

5 26,0+1,3 26,5+0,9

6 25,5+1,4 26,6+1,4

Р 0,1

Р >0,1 достоверны при Р < 0,05.

Таблица 2

Отличия

Время ин кубации, мин

Число POK Ж С При 37,5

Достоверность отличия " ри 37,0 ОС

5 26,6 1,8 27,8+1,3

P >0,1

Р >0,1

6 26,0+1,3

26,5+1,3

" Отличия достоверны при P (0,05

Составитель Г.Крюкова

Редактор Н.Бобкова Техред Л.Сердюкова Корректор Е ° ÑèÐ H

Заказ 5955/3 Тираж 660 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Иосква, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная,4

3 12

Преимущества способа заключаются в технической простоте его исполнения, быстроте осуществления (60—

90 мин), -практически немедленном выявлении с его помощью антигенов, попавших в организм, необходимости для анализа микрообъема крови, забираемой из пальца обследуемого, специфичности, высокой чувствительности, возможности использования в случае выявления микробных антигенов промышленных эритроцитарных диагностикумов, необходимости минимального количества доступных реактивов и оборудования, отсутствии необходимости привлечения для осуществления способа высококвалифицированного пер,сонала. Простота исполнения и экспрессность способа позволяет реализоI

68173 4 вать его в любых, в том числе и полевых условиях, дают возможность очень раннего и быстрого выявления антигенов в организме.

Формула изобретения

Способ выявления антигенов путем добавления к клеткам периферической, 1р крови эритроцитарного антигенного диагностикума с последующей инкубацией и подсчетом розеткообраэующих клеток, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, из 0,05-0,1 мл периферической крови выделяют лейкоциты, добавляют к ним 0,1-0 2 мл диагностикума, инкубируют при 37-37,5 С в течение 56 мин и центрифугируют.

2п Таблица 1