Способ выявления антител против блестящей оболочки яйцеклетки у женщин

 

Изобретение позволяет повысить точность способа. Свиные эритроциты, используемые для абсорбции исследуемых сывороток , типируют по групповым антигенам с помощью панели антисывороток к следующим антигенам эритроцитов. Ас, Еа, Ed, Ef, Eg, Ej, Ек, Em, Eb, Fc, Kf Zb, Bb, Eb, Ее, Ea, Ka, Kb, Li. Lj, Lk, LJ, ga, gb. Затем к 0,5 мл исследуемой сыворотки крови человека добавляют 2 капли отмытых свиных эритроцитов , содержащих минимальное число эритроцитарных антигенов Eg, Ef, Ек, Kf, Lb, встряхивают, инкубируют 1 ч при 37°С, затем центрифугируют 20 мин при 500 g. Каплю адсорбированной сыворотки наносят на мазок их взвеси свиных яйцеклеток, инкубируют 30 мин во влажной камере при комнатной температуре, трижды отмывают забуференным физиологическим раствором, высущивают и наносят каплю моноспецифической люминесцентной сыворотки против иммуноглобулинов человека классов g, М., А. Инкубируют 1 ч во влажной камере при комнатной температуре, трижды отмывают забуференным физиологическим раствором, высушивают, наносят каплю забуференного глицерина и исследуют с помощью люминесцентного микроскопа. (О (Л ю со ю 00

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

„„Я0„„1292778 Д1 (50 4 А 61 К 3900

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3820188/28-14 (22) 06.12.84 (46) 28.02.87. Бюл. № 8 (71) Киевский научно-исследовательский институт педиатрии, акушерства и гинекологии им. М. М. Буйко (72) В. П. Чернышов и И. К. Галанина (53) 615.373 (088.8) (56) Journal of Experimental Zoology, 1978, 204, р. 181 — 184. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ

ПРОТИВ БЛЕСТЯЩЕЙ ОБОЛОЧКИ ЯЙЦЕКЛЕТКИ У ЖЕНЩИН (57) Изобретение позволяет повысить точность способа. Свиные эритроциты, используемые для абсорбции исследуемых сывороток, типируют по групповым антигенам с помощью панели антисывороток к следующим антигенам эритроцитов, Ас, Еа, Ed, Ef, Eg, Ej, Ек, Em, Fb, Fc, Kf Zb, ВЬ, ЕЬ, Ее, Fa, Ка, КЬ, Li. Lj, Lk, Ll„ga, gb. Затем к 0,5 мл исследуемой сыворотки крови человека добавляют 2 капли отмытых свиных эритроцитов, содержащих минимальное число эритроцитарных антигенов Eg, Ef, Ек, Kf, 1Ь, встряхивают, инкубируют 1 ч при 37 С, затем центрифугируют 20 мин при 500 g. Каплю адсорбированной сыворотки наносят на мазок их взвеси свиных яйцеклеток, инкубируют 30 мин во влажной камере при комнатной температуре, трижды отмывают забуференным физиологическим раствором, высушивают и наносят каплю моноспецифической люминесцентной сыворотки против иммуноглобулинов человека классов g,,М, А.

Инкубируют 1 ч во влажной камере при комнатной температуре, трижды отмывают забуференным физиологическим раствором, высушивают, наносят каплю забуференного глицерина и исследуют с помощью люминесцентного микроскопа.

1292778

Формула изобретения

Составитель М. Г1озняк

Редактор А. Лежнина Техред И. Верес Корректор А. Тяско

Заказ 3()8/б Тираж 596 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

1! 3035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано при лабораторной иммунологической диагностике бесплодия.

Целью изобретения является повышение точности способа путем про ведени абсорбции сыворотки свиными эритроцитами, содержащими минимальное число эритроцитарных антигенов типа Eg, Ef, Ek, К, Lb.

Способ осугцествляют следующим образом.

Свиные эритроциты, используемые для абсорбции исследуемых сывороток, типируют по групповым антигенам с помощью панели антисывороток к следующим антигенам эритроцитов Ас, Ea, Ed, Ef, Eg, Ej, Ek, Em, Fb, Fc, Kf, Lb, ВЬ, Eb, Ее, Fa, Ка, Kb, Li, Lj, Lk, Lf, Яа, gb.

Затем к 0,5 мл исследуемой сыворотки крови человека добавляют 2 капли отмытых свиных эритроцитов, содержаших минимальное число эритроцитарных антигенов

Eg, Ef, Ek, Kf, Lb, встряхивают, инкубируют

1 ч при 37 С, затем центрифугируют 20 мин при 500 g. Полученную абсорбированную сыворотку используют для определения антител против блестящей оболочки яйцеклетки. Каплю абсорбированной сыворотки наносят на мазок из взвеси свиных яйцеклеток, инкубируют 30 мин во влажной камере при комнатной температуре, трижды отмывают забуференным физиологическим раствором, высушивают и наносят каплю моноспецифической люминесцентной сыворотки против иммуноглобулинов человека классов ф,М, A.

Инкубируют 1 ч во. влажной камере при комнатной температуре, трижды отмывают забуференным физиологическим раствором, высушивают, наносят каплю забуференного глицерина, накрывают покровным стеклом и учитывают результат с помощью люминесцентного микроскопа, отмечая наличие или отсутствие свечения блестящей оболочки яйцеклетки. Свечение блестящей оболочки свидетельствует о наличии антител против нее.

Пример. К 0,5 мл сыворотки крови больной В. добавляют 2 капли эритроцитов с минимальным содержанием эритроцитарных антигенов Eg, Ef, Ek, Kf, Lb. Пробирку встряхивают, инкубируют 1 ч при 37 С, центрифугируют 20 мин при 500 g. 1 каплю надосадочной жидкости, представлявшую собой абсорбированную сыворотку, наносят на мазок из взвеси свиных яйце10 клеток. Мазок инкубируют 30 мин во влажной камере при комнатной температуре, трижды отмывают забуференным физиологическим раствором, высушивают. На мазок наносят моноспецифичес кую люминесцентную антисыворотку против иммуноглобулинов человека классов g, М, А. Мазок инкубируют 1 ч во влажной камере при комнатной температу.ре, трижды отмывают забуференным физиологическим раствором и высушивают. При люминесцентной микроскопии выявляют интенсивное (+ + + + ) свечение блестящей оболочки яйцеклетки, что свидетельствует о наличии в сыворотке крови исследуемой больной антител против блестящей оболочки яйцеклетки.

При использовании эритроцитов, содер25 жаших антигены ЕЛ, Eg, Ek, Kf, Lb, частота неопределенных результатов составила

89о/о, в то время как при использовании эритроцитов, содержащих антигены Eg, Ek, Kf, Lb, — 22 /о, а эритроцитов, содержащих антигены Ek, Kf или Ef, Lb, или Eg, Fk — Оо/р

ЗО

Способ выявления антител против блестящей оболочки яйцеклетки у женшин пу35 тем абсорбции исследуемои сыворотки эритроцитами свиньи, инкубации ее с яйцеклетками свиньи с последующим выявлением связавшихся антител при помощи реакции непрямой иммунофлуоресценции, отличаю40 и4ийся тем, что, с целью повышения точности способа, абсорбцию проводят эритроцитами свиньи, содержащими минимальное число эритроцитарных антигенов типа Eg, Ef, Ek, Kf, Lb.