Способ выявления структур нервных элементов на гистологическом препарате

 

Изобретение относится к области экспериментальной и клинической медицины , а именно к нейрогистологии. Цель изобретения - удлинение времени сохранности препаратов. Проводят фиксацию мозга 10%-ным этиловым спиртом на физиологическом растворе. Затем осуществляют оксональный ионофорез хлорида кобальта на препарате мозга, который после этого помещают в смесь сульфида натрия и этилового спирта. Окраску гистологического препарата производят по методу Тимма. Изобретение позволяет изучить распределение афферентных и эфферентных волокон, их взаимоотношения: с пости пресинаптическими элементами. (Л с 00 00 00 vl

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН

А1 (19) (11) (51) 4 G 01 N 1/28

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ГОСУДАРСТ8ЕННЫИ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ

К АВТОРСКОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3824752/28-14 (22) 17.12.84 (46) 15,04.87. Бюл. Â 14 (71) Институт мозга Всесоюзного научного центра психического здоровья

АМН СССР (72) П.В. Беличенко (53) 615.475(088.8) (56) Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1981, N - 81, с. 99-104. (54) СПОСОБ ВЬИВЛЕНИЯ СТРУКТУР HEPBHbIX j1E EHT08 HA ГИСТОЛОГИЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ (57) Изобретение относится к области экспериментальной и клинической медицины, а именно к нейрогистологии.

Цель изобретения — удлинение времени сохранности препаратов. Проводят фиксацию мозга 10Х-ным этиловым спиртом на физиологическом растворе. Затем осуществляют оксональный ионофорез хлорида кобальта на препарате мозга, который после этого помещают в смесь сульфида натрия и этилового спирта. Окраску гистологического препарата производят по методу Тимма.

Изобретение позволяет изучить распределение афферентных и эфферентных волокон, их взаимоотношения: с пости пресинаптическими элементами.

1 13038

Изобретение относится к экспери- ментальной и клинической медицине, а именно к нейрогистологии, и может быть использовано для решения психиатрических и неврологических задач при изучении взаимоотношений между системами нервных элементов в мозге, а также в микрохирургической практике для определения наиболее рациональных подходов при операции на 10 мозге.

Целью изобретения является удлинение времени сохранности препаратов.

Указанная цель достигается тем, что перед осуществлением способа про- >5 водят фиксацию мозга 10 . этиловым спиртом в физиологическом растворе при 4 С в течение 2 ч, далее проводят аксональный ионофорез хлорида кобальта на препарате мозга in vitro в 10Х этиловом спирте на физиологическом растворе, последующее выдерживание мозга в смеси, состоящей иэ

2 мл 10 . Na

Изобретение иллюстрируется следую- 30 щими примерами.

Пример 1 (по прототипу).

Животное умерщвляют черезмерной дозой нембутала (60 мг/кг), мозг перфузируют через сердце холодным (4 С) фи- 35 зиологическим раствором, содержащим

154 тпМ ИаС1, 5,6 mN KC1, 2,3 тпМ СаС1

«6Н О, 0,25 N сахарозы в 1 mN -трисНС1 буфере, рН=7,4. Мозг достают из черепной коробки и помещают в фарфо- 10 ровую чашку с физиологическим раствором. Центральные концы волокон тракта или корешка нерва помещают в полиэтиленовую трубку и фиксируют в стенке трубки тканевым клеем или вазелином. Через свободный конец трубки наливают 130 тпМ раствор хлорида кобальта. Последовательно подключают источник постоянного тока, микроамперметр, реостат и два плати- 50 новых электрода. Один платиновый электрод (плюс) помещают в находящийся в трубке раствор хлорида ко-, бальта, а другой (минус) — в раствор, омывающий мозг. Пропускают постоянный электрический ток силой 40 мкА в течение 10 ч. Эксперимент проводят о при 4-6 С, через каждый час полностью меняют раствор, омывающий мозг. Че79 2 рез 10 ч после начала эксперимента подлежащий изучению участок мозга помещают на 10 ч в смесь, состоящую из 2 мл 10 . Naa S и 100 мл 70Х спирта. Далее проводят стандартную проводку и заливку мозга в парафин, получают непрерывные серийные срезы и окрашивают их по методу Тимма.

Таким .образом удается заполнить хлоридом кобальта элементы мозга, находящиеся не далее 25 мм от места аппликации этого. вещества. Сенсорные волокна и их терминальные ветвления заполнены кобальтом и имеют четкие контуры, дендриты можно проследить на расстоянии 100-150 мкм от тела нейрона, набухания и фрагментирования волокон, изменения формы и объеМа нейронов не происходит.

Пример 2. При проведении способа на мозге экспериментального животного его умерщвляют черезмерной дозой нембутала (60 мг/кг). Для удаления крови мозг перфузируют через сердце или сонные артерии холодным (4 С) физиологическим раствором, содержащим 154 тпМ. NaC1, 5,6 mN КС1, 2,3 mM СаС1 6Н О, 0,25 N сахароэы в 1 mN трис-НС1 буфере, рН=7,4. Для фиксации нервной ткани мозг перфузируют холодным (4 С) 10 .-ным этилоо вым спиртом в физиологическом растворе в течение 30 мин. Затем мозг достают из черепной коробки и помещают в фарфоровую чашку с 10Х-ным этиловым спиртом в физиологическом растворе, Центральные концы волокон тракта или корешка нерва помещают в полиэтиленовую трубку и фиксируют к стенке трубки тканевым клеем или вазелином. Через свободный конец трубки наливают 130 mN раствор хлорида кобальта. Последовательно подключают источник постоянного тока, микроамперметр, реостат и два платиновых электрода. Один платиновый электрод (плюс) помещают в находящийся в трубке раствор хлорида кобальта, а другой (минус) — в раствор, омывающий мозг. Пропускают постоянный электрический ток силой 40 мкА в течение 144 ч. Эксперимент проводят о при 4-6 С. Через 144 ч после начала эксперимента подлежающий изучению участок мозга помещают на 10 ч в смесь, состоящую из 2 мл 10Х Na S и 100 мл 70 этилового спирта ° Далее проводят стандартную проводку и заливку мозга в парафин, получают не13038

Формула изобретения

Составитель А.Рыбина

Техред И.Попович

Корректор С.Шекмар

Редактор А.Долинич

Заказ 1299/42

Тираж 777 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул.. Проектная, 4 прерывные серийные срезы и окрашивают их по методу Тимма.

Пример 3. Для проведения способа на трупном материале мозга человека, мозг берут. в первые часы (2-4 ч) после смерти. Мозг достают из черепной коробки и сразу же помещают в холодный (4 С) 10Х-ный этиловый спирт в физиологическом растворе на 2 ч. Через каждые 30 мин раст- 10 вор полностью меняют. Затем мозг помещают в свежий 10Х-ный этиловый спирт на физиологическом растворе и проводят аксональный ионофорез хлорида кобальта по примеру 2. 15

Пример 4. Берут мозг экспериментального животного или трупный материал мозга человека, как описано в примерах 2 и 3, но перфузию мозга проводят в 5Х-ном этиловом спирте 20 на физиологическом растворе.

Пример 5. Берут мозг экспериментального животного или трупный материал мозга человека, как описано в примерах 2 и 3, но перфузию мозга 25 и весь эксперимент проводят в 30-40Х этиловом спирте на физиологическом растворе.

На гистологических препаратах, полученных в результате эксперимен- 30 та по примеру 4 и 5 выявлено, что в случае применения 5Х-ного этилового спирта нормальная структура нервной ткани не сохраняется при проведении опыта более 10 ч, а в случае применения 30-40Х-ного этилового спирта нормальная структура нервI

79 4 ной ткани сохраняется на протяжении всего эксперимента, но аксональный ионофорез хлорида кобальта невозможен.

Предлагаемый способ предварительной фиксации мозга в 10Х-ном этиловом спирте на физиологическом растворе сохраняет нормальную структуру нервной ткани, инактивирует аутолитические процессы, экономит время путем одновременной фиксации мозга и проведения опыта, не препятствует аксональному ионофорезу хлорида кобальта, что позволяет решать многие важные, практические задачи в психиатрии и неврологии путем изучения распределения афферентных и эфферентных волокон на гистологических препаратах, их взаимоотношения с пост- и пресинаптическими элементами.

Способ выявления структур нервных элементов на гистологическом препарате путем аксонального ионофореза хлорида кобальта на препарате мозга

in vitro при силе тока 40 мкА с последующим помещением мозга в состав, состоящий из сульфида натрия и этилового спирта, и окраской полученного гистологического препарата по методу Тимма, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью удлинения времени сохранности препаратов, препарат предварительно фиксируют. 10Х-ным этиловым спиртом на физиологическом о растворе при 4-6 С от 30 мин до 2 ч.