Способ диагностики ревматоидного артрита
Изобретение относится к иммунологии . Цель изобретения - повышение точности диагностики. Клеточную взвесь инкубируют с раствором моноклональных антител к мономорфным детерминантам HLA-DR и обрабатывают кроличьей антисывороткой. После отмывания и центрифугирования клеточную взвесь на стекле исследуют под микроскопом фотометром. Наличие клеток с интенсивностью свечения свыше 150 мА подтверждает диагноз ревматоидного артрита . За счет использования маркера количественного уровня свечения клеток повьшается достоверность диагностики . Од г о о 05
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (19) (И)
27006 А1 (51) 4 G 01 N 33/533
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
IlO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21) 3957961/28-14 (22) 26.07.85 (46) 30.07.87. Бюл. )) 28 (71) Институт клинической иммунологии СО AMH СССР . (72) В.И. Коненков, Ю.Н. Наумов, M.È. Мусатов и В.Ф. Прокофьев (53) 615.375(088.8) (56) Kluim — Nelemans Н.С. et al.—
J. Rheumatol, 1984, v. 11, р.272-276. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ РВВИАТОИД
НОГО АРТРИТА (57) Изобретение относится к иммунологии. Цель изобретения — повышение точности диагностики. Клеточную взвесь инкубируют с раствором моноклональных антител к мономорфным детерминантам HLA-DR и обрабатывают кроличьей антисывороткой. После отмывания и центрифугирования клеточную взвесь на стекле исследуют под микроскопом фотометром. Наличие клеток с интенсивностью свечения свыше 150 мА подтверждает диагноз ревматоидного артрита. За счет использования маркера количественного уровня свечения клеток повышается достоверность диагностики.
1327006
Формула изобретения
Составитель В. Фролова
Техред И.Попович
Корректор Т. Колб
Редактор M. Петрова
Подписное
Заказ 3382/40 Тираж 776
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологическим способам диагностики заболеваний, в частности ревматоидного артрита (PA).
Цель изобретения — повышение точности диагностики
Пример. Мононуклеарные клетки выделяют из 5 мл дефибринированной венозной крови центрифугированием на градиенте плотности фиколлверографина (d=1,077 г/см ), содержащем 0,051 азида натрия, при 400 у в течение 40 мин. После трех отмывок средой 199 с последующим центрифугированием при 1000 об./мин в течение
5 мин клеточную взвесь (30 млн/мл)
s объеме 0 05 мл (всего 1,5 млн.клеток) обрабатывают 17.-ным раствором параформальдегида в фосфатном буфере . с рН 7,4 в течение 30 с. После этого вновь производят две отмывки, только уже эабуференным физиологическим раствором (ЗФР) ° После отмывок клеточную взвесь (1,5 млн ° кле ток) в объеме 0,05 мл инкубируют с равным объемом (0,05 мл) раствора моноклональных антител BL-DR (ГДР) к мономорфным детерминантам HLA-DR.
После 60 мин инкубации на шейкере (200 цикл/мин) и последующих двух отмывок ЗФР клеточную взвесь обрабатывают кроличьей антисывороткой против глобулинов мыши, меченной ФИТЦ, в объеме 0,05 мп в течение 60 мин на шейкере. После окончательных двух отмывок ЗФР с последующим центрифугйрованием при 1000 об,/мин в течение
5 мин клеточную взвесь переносят на предметное стекло для учета результатов. Для моноклональных антител
BL-DR конечное разведение составило
1:40, а для кроличьей антисыворотки—
1:4. Учет НЬА-DR — позитивных клеток и измерение величины их свечения проводят на микроскопе-фотометре под масляной иммерсией гри увеличении
6,3 х 63 с использованием селектив5 ного для ФИТЦ блока фильтров 12.Идентифицируют 100 клеток по размерам и структуре в проходящем свете. Из числа клеток определяют клетки, ко д торые обладают специфическим мембранным свечением или имеют флюоресцентные шапочки (в ультрафиолетовом режиме). Затем замеряют специфическое мембранное свечение единичного лимфоцита в течение 0,25 с. Свечение всех 100 лимфоцитов отражают на ги-. стограмме распределения свечения клеток в диапазоне от 0 до 250 мА. Клетки с интенсивностью свечения свыше
150 мА говорят о наличии ревматоидного артрита, причем достаточно ббнаружить хотя бы одну такую клетку.!
Положительный эффект достигается
25 за счет выявления неизвестного ранее для ревматоидного артрита маркера количественного уровня свечения клеток, что позволяет поставить верный диагноз с достоверностью, близкой
Способ диагностики ревмато35 идного артрита путем иммунофлуоресцентного определения НЬА-DR антигена на лимфоцитах крови больного, о. т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности диагностики, определяют уровень свечения HLA-DR антигена на лимфоцитах и при величине его выше 150 мА диагностируют ревматоидный артрит.
