Способ размножения растений
Изобретение относится к области сельского хозяйства. Цель изобретения - повышение выхода растений, упрощение способа. На 4-14-й день от начала прорастания зерновок различных сортов яровой мягкой пшени1 г в стадии разрьша колеоптиля проводят морфологический анализ с целью отбора многозародьппевых форм. Зерновки высаживают в поле. Вычленяют пьшьнйки и культивируют их in vitro до получения взросль1х растений i Выход растений подсчитывают как среднее число растений на один высаженный пыльник и выражают в процентах. В группах сортов с процентом встречаемости многозародышевых семян вьшхе 0,1% выход растений (0,58 и 1,90%) превышает среднее значение выхода растений (0,38%) в 1,5-5 раз. По описанной методике проводят размножение растений стручкового перца из многозародьшёвых семян, 2 табл. СЛ
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (19) (11) (S1) 4 А 01 Н 3 00
gf jР ф214 Ус
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К А BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИЙ (21) 3868303/30-15 (22) 01.04.85 (46) 07.09.87. Бюл. Ф 33 (71) Саратовский государственный университет им. Н.Г.Черньппевского (72) А.С.Селиванов, В.М.Суханов и Н.И.Давоян (53) 581.143.6(088.8) (56) Шевченко С.В. К вопросу о полу чении гаплоидных растений в культуре пыльников. — Nicotiana tabacum 2. (Solanaceae) Ботанический журнал, 2977, т. 62, с. 1176-1179. (54) СПОСОБ РАЗМНОЖЕНИЯ РАСТЕНИЙ (57) Изобретение относится к области сельского хозяйства. Цель изобретения — повьппение выхода растений, упрощение способа. На 4-14-й день от начала прорастания зерновок различных сортов яровой мягкой пшеницы. в стадии разрыва колеоптиля проводят морфоло" гический анализ с целью отбора многозародьппевых форм. Зерновки высаживают в поле. Вычленяют пыльники и культивируют их in vitro до получения взрослых растений. Выход растений подсчитывают как среднее число растений на один высаженный пыльник и выражают в процентах. В группах сортов с процентом встречаемости многозародышевых семян вьппе 0,1 выход растений (0,58 и 1,90%) превышает среднее значение выхода растений (0,38%) в 1,5-5 раз.
По описанной методике проводят размножение растений стручкового перца из многозародышевых семян. 2 табл.
1335205
Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в производстве, в частности в семеноводстве и в селекции растений, для получения и ускоренного размножения ценного исходного материала.
Цель изобретения — повышение выкода растений, упрощение способа.
Пример 1. Размножение растений с использованием в качестве доноров особей сортов пшеницы (Triticum
aestivum L.).
Зерновки 30-ти различных сортов яровой мягкой пшеницы (по 4-19 тыс. зерновок каждого сорта) трижды промывают водопроводной водой, замачивают в водопроводной воде в течение
9 ч, снова трижды промывают водопроводной водой и раскладывают на помещенные в кюветы стекла, обернутые фильтровальной бумагой. В кюветы доливают водопроводной воды до верхнего уровня стекла, а сверху закрывают крышками.. Зерновки проращивают в тем ноте при комнатной температуре. Морфобиологический анализ с целью отбора многозародышевых форм проводят на 4-.14-й день от начала прорастания.
3а этот период все проростки достигают стадии разрыва колиоптиля. В течение этого периода подсчитывают число непроросших семян,. выявляют и подсчитывают число многозародышевых форм для каждого сорта отдельно. После окончания морфобиологического анализа подсчитывают процент многозародышевых форм на число проросших зерновок отдельно для каждого сорта.
Результаты размножения растений с использованием, в качестве доноров пыльников, особей у сортов и селекционных форм пшеницы (Triticum aesti vum Ь.), у которых процент встречаемости многозародьппевых зерновок варьи рует от 0,000 до 0 3007. приведены в табл.
По 100 зерновок каждого сорта высаживают в поле. В стадии трубкования проводят отбор побегов с колосьями.
Срезают побеги, у которых влагалище предпоследнего листа (последний лист флаговый) находится на уровне центральной части колоса. Отобранные колосья вместе с листовой оберткой в асептических условиях операционной комнаты стерилизуют 5-7 мин водным раствором диацида (0,33 r этанол5
-45 50 меркулхлорйда; 0,60 г цетилпиридинийхлорида; О,1 мл Твин-20 на 1 л воды), после чего промывают тремя порциями стерильной, предварительно проавтоклавированной воды.
Колосья освобождают от листовых оберток. Для культивирования вычленяют пыльники иэ двух. нижних цветков
4-14-х -колосков средней части колоса.
В одну пробирку (диаметром 16 мм) с
10 мл питательной среды помещают по
15 пыльников. Среда для культивирования пыльников (среда № 1) содержит, мг/л: макро- и микросоли по Гамборгу (из среды В )1 тиамин 0,5; пиридоксин
0 5 мезоинозит 100; никотиновая 1,О; аскорбиновая 1,0; 2,4-дихлорфеноксиуксусная 0,25 кислоты; сахароза
110000; агар 7000. Перед автоклавированием рН среды доводят до 5,86,0. Пыльники инкубируют в темноте при 27+1 С и относительной влажности
70-80Х. Анализ культур пыльников осуществляют под стереоскопическим микроскопом, начиная с 25 сут от начала культивирования. Подсчитывают общее число структур всех типов, возникающих из пыльцы и отдельно эмбриоидов.
Эмибриоиды отделяют отпыльников и пересаживают в другие пробирки на среду для прорастания (среда ¹ 2), Среда ¹- 2 отличается от среды ¹ 1 тем, что в ней содержание Ре-хеллата составляет вдвое уменьшенную концентрацию; сахарозы 10000 мг/л 2,4-Д заменяется на 3-индолилуксусную кислоту в концентрации 0,2 мг/л.
На среде ¹- ? эмбриоиды выращивают в условиях периодического освещения (освещенность 2000 лк, фотопериод
16 ч в сутки) при 27+1 С и относительной влажности 70-80Х. В таких условиях некоторые эмбриоиды заканчивают дифференцировку и прорастают.
По мере развития растений и появления у них 3-5 листочков и корней, их пересаживают в почву и выращивают до конца вегетации. Выход растений подсчитывают как среднее число растений на один высаженный пыльник и выражают в процентах (табл.1).
Выход растений наблюдается для группы сортов, процент многозародышевых семян в которых находится в интервале 0,051-0,17.. Однако процент выхода растений-(0,23) остается ниже среднего значения выхода растений
1335205 (0,38) для всех исследованных сортов и селекционных форм (т.е. при отсутствии отбора доноров по признаку многозародьппевости семян). В группах сортов с процентом встречаемости многозародыневых семян выше 0,1 выход растений (0,58 и 1,90 ).превышает среднее значение выхода растений (0,38) (в 1,5-5 раз). Поэтому с це- 10 лью повьппения выхода растений в качестве донорных растений целесообразно использовать особи тех сортов, у которых процент встречаемости многозародышевых семян не ниже 0,1Х. 15
Пример 2. Размножение растений с использованием в качестве доноров особей стручкового перца (Capsicum annuum L.) из многоэародьпневых семян. 20
У перца (Capsicum annuum L.) по методике, описанной в примере 1, отбирают лишь многозародьппевую форму (АД-102 м), которая вегетативно размножается черенками, и у нее получают 25 семена после самоопыления. В качестве опытных растений — доноров используют растения многоэародышевой формы, а в качестве контрольных — растения из однозародьппевых семян того же ис- 30 ходного материала. В качестве изолированных частей используют пыльники, содержащие одноклеточную пыльцу. Цветочные бутоны стерилизуют диацидом, после чего из них вычленяют пыльники и по 5-6 шт. помещают в пробирки на питательную среду.
Питательная среда для культивирования пыльников перца (среда 3) содержит, мг/л: макро- и микросоли по 4д
Мурасиге и Скугу (концентрация всех солей относительно прописи авторов уменьшена вдвое); тиамин 0,5; пиридоксин 0,5; никотиновая кислота 5,0; мезоиноэит 100; сахароза 20000; агар 7000, Результаты размножения растений с использованием в качестве доноров особей перца (Capsicum annuum L.) из однозародьппевых и многоэародьппевых семян приведены в табл. 2;
Анализ культур пыльников осуществляют 3 мес. Подсчитывают среднее число растений, полученных на один куль- тивируемый пЫльник.
Из табл. 2 следует, что растения из пыльцы получены только при использовании пыльников многозародьппевой формы, независимо от варианта фитогормонов. Поэтому с целью повьппения и стабилиэации выхода растений в качестве донорных необходимо испольэовать только растения из многоэародышевых семян и их потомства.
Формула изобретения
Способ размножения растений, включающий отбор растений-доноров, извлечение пыльников и последующее культивирование их in vitro до получения взрослых растений, о т л и ч а ю— шийся тем, что, с целью повьппения выхода растений, упрощения способа, в качестве растений-доноров используют растения, выращенные иэ многозародьппевых семян или из семян сортов, у которых встречаемость многоэвродьппевых семян более 0,1 .
1335205
СО еГ1 л
СО
Се) л ь
Ю
Ю л о о о л о о о л о ь
О е л
С") СЧ л ь
1 !
М о
О 01
СЧ
« л о ь о л о л Г л о л
° е ь л о
° е
С") Се1
О ) л
С 4
СО
СЧ
° е
СЧ с 4
1 л о о о л о а л
° е о
О\
° à
СЧ
Ch л
СЧ л л
D л о л о
К)
СЧ о л о
Ю
Щ л
I о
D о о
Се1 л ь
1 л
° е о
5 о 1
01 йМ о g
О 04
Й. Гт
СЧ о л о
I о о л о о о
Се) л
Ю
Ю
Ю л ь
Ю о л
I
3Г
D . л о о о о л о о б ь
С 4
Се
СЧ л о
Г1 О
СЧ Г1 л
Се1
СЧ
4О
Се)
Щ ь
СЧ о о ж
I Ре
Э } 10
g g о и
СЧ
СО
СЬ
С 1
° л
Е
Ре
Ф
И
° л
С0
01
С0 о
° л
С0
И
В
С4
Сч ж
° ее о
С0
С0
Х и
10 о
& с0
Ре
С0 и
С0 о
Е»
Р о и
Ц (ф ж
О
R
К О
<О О
И
V cd
10 ° 4 о Р
Х м
О
Р Й
° л х э е е
I (. 3, z o
М 1 С 1 Ц л
1 ее И
Р 01 01 ! й33!
° л.5 тл
СО V
СЧ Ц
Ф Л
V ел и
Ж СЧ
° л 0!
Я ° Ô
5Ю о
И елЕ
P,0I О и 2
° л
Й ck
un е0
0) 4О
Ж Се)
Л
-K
5м
cd ел
СО 00
С 1
С6 хи
СЧ
04 «! о
& М
cd cd
Р. 4
cd u
Cd СОЛ
О 4О
° ее се
4О cd Ц
О Р,а
- сб Х
cd u
М С4
° ее
И O IO
И СЧ д и ецио
Ц cd c0 10О
1О Иж
Й о х !.о
cd СО
° л Р, с 1 cd
cd
И
Z u О И
Д е ювао е0 С0 и
4йСО
Ch К
СЧ <6 и
С0
04 Ф
Q! Fc!
И и х о
1:4 СЧ
Е» СГ) ж
Р М
01 cd
cd
° л 1
СО
СЧ
Ц II
А1335205
Т а б л и ц а Z
Объект
Число пыльниВариант фитогормонов, мг/л
ыход растеий, Х ков
Capsicum annuum L
Местный:
Особи из однозародьппе: вых семян
Кинетин 0,2
АНУ 0,1
Кинетин 0,2
144
0,00
0,00
0,1
257
0,000
capsicum annuum Ь
Местный:
Особь из многозародьппевого семени и ее самоопыленное потомКинетин 0,2
2,4-Д 0,1
Кинетин 0,2
ИУК 0,1
2,4"Д 1,0
ИУК 0 5 ство
0,98
102
102
0,98
179
1,12
154
1,30
0,1
214
0,47
Составитель С.Куваева
Техред В.Кадар Корректор В.Бутяга
Редактор Н.Рогулич
Тираж 627 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Заказ 3991/4
Производственно-полиграфическое предприятие г. Ужгород ул. Проектная, 4
