Способ регенерации растений в культуре ткани
Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в биотехнологии для отбора новообразований со стеблевым типом развития , ДЛЯ определения срока готовности эксплантата к регенерации, а также выяснения вопросов фиг иологобиохимического регулирования процессов органогенеза. Целью изобретения является ускорение и упрощение процесса . Культивируют недифференцированную ткань и определяют наличие в ней специфического для стеблевого типа развития фермента. Наличие амилазы определяют визуально по изменению окраски крахмала. Для дальнейшего культивирования отбирают ткань, содержащую фермент - амилазу. В случае отсутствия активности фермента наблюдается корнеобразование или рост недифференцированной ткани. 2 табл. с (Л
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (!91 (11) 9 А1 (50 4 А 01 Н 3/00
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР
flO ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ ° ИОС@д А, юсщаеОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ, Г И 71 1 .--, т .
H ABTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3986060/30-15 (22) 05. 12.85 (46) 15.03.88. Бюл. М 10 (71) Всесоюзный селекционпо-генетический институт (72) М.Л.Иахновская, С.Ф.Лукьянюк и С.А.Игнатова (53) 631.589.2 (088.8) (56) Krank — Rasol Mari iana, Jelaska
Sibila, Serman Drasko. Isopегоxidases
early indicators of somatic differentiation in pumpkin tissue. — Acta
bot. croat., 1982, 4 1, р. 33-39 . (54) СПОСОБ РЕГЕНЕРАЦИИ PACTEHH× В
КУЛЬТУРЕ ТКАНИ (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в биотехнологии для отбора новообразований со стеблевым типом развития, для определения срока готовности зксплантата к регенерации, а также выяснения вопросов физиологобиохимического регулирования процессов органогенеза. Целью изобретения является ускорение и упрощение процесса. Культивируют недифференцированную ткань и определяют наличие в ней специфического для стеблевого типа развития фермента. Наличие амилаэы определяют визуально по изменению окраски крахмала. Лля дальнейшего культивирования отбирают ткань, содержащую фермент — амилазу. В случае отсутствия активности фермента наблюдается корнеобразование или рост недифференцированной ткани. 2 табл.
1 I380689 2
Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в биотехнологии для отбора новообразований со стеблевым типом развития, для определения срока готовности эксплантата к регенерации, а также выяснения вопросов физиолого-биохимического регулирования процессов органогенеза. 10
Цель изобретения — ускорение и упрощение процесса.
П р и и е р. Для пересадки на среду для регенерации используют новообразования, полученные при культивиро- 15 ванин на первичных средах пыльников тритикале, зародышей пшеницы, ячменя и завязей люцерны. Каждое высаживаемое на среду для регенерации новообразование подвергают определению ак- 20 тивности амилаэы по следующей методике.
Ввиду того, что абсолютная величина для отбора не играет роли, а важно лишь ее наличие, обнаружение ами- 25 лаэной активности осуществляют визуально по изменению темно-синей окраски за время инкубации в. одном повторении. Для этого от каждого отдельного новообразования стерильно беэ 30 взвешивания отделяют часть (достаточно 10-20 мг) и помещают в пробирку с
1 мл 0,17.-ного раствора крахмала (растворимого). Контрольная пробирка содержит только раствор кра>-.мала.
Все пробирки вместе с контрольной инкубируют на термостатированной воо дяной бане при 45 С в течение 20 мин.
После инкубации во все пробирки добавляют пипеткой по одной капле 27- 40 ного раствора йода. Наблюдаемое визуальное изменение темно-синей окраски крахмала в контрольной пробирке до бледно-голубой или чаще грязно-белой в опытных свидетельствует о наличии высокой активности амилаэы в соответствующих новообразованиях. Новообразования, в частях которых обнаружена активность амилазы, впоследствии на среде для регенерации дают растения.
В случае отсутствия активности наблюдают корнеобразование (ризогенеэ) или рост недифференцированной ткани.
Результаты опытов представлены в табл. 1 и 2. Данные показали, что по наличию амилазной активности можно отбирать для пересадки на среду регенерации новообразования, дающие впоследствии стеблевые почки, развивающиеся в растениях.
Проведенные исследования показали, что предлагаемый способ регенерации растений позволяет удешевить и ускорить процесс за счет выбраковки новообразований, не дающих растения, а также за счет определения времени пересадки на среду для регенерации. формула и з о б р е т е н и я
Способ регенерации растений в культуре ткани, включающий первичное культивирование недифференцированной ткани, определение наличия в ней специфического для стеблевого типа развития фермента и отбор для дальнейшего культивирования ткани, содержащей этот фермент, о т л и ч а ю щ и и с я тем, что, с целью ускорения и упрощения процесса, в качестве опре" деляемого специфического фермента используют амилаэу, наличие которой определяют качественным анализом.
1380689
Та блица 1
Образование стеблевых почек в новообразованияхна среде для регенерации в зависимости от наличия амилазной активности пои пеоесалке
Новооб- Амилаэразова- ная акГенотип
Тип морфогенеэа, ние тивность
Есть Стеблевые почки
Нет
Риэогенеэ
То же
Есть
Стеблевая почка
То же
Разросшийся каллус
Люцерна, сорт
Смуглянка
Нет
Есть Стеблевые почки
То же
Нет
Разросшийся каллус
Пшеница, сорт
Обрий
Ризогенез
То же
Есть
Стеблевые почки
Нет
Ризогенез
То же
Ячмень, сорт
Одесский 100
Нет
Есть
Стеблевые почки
То же
Тритикалепшеничный гибрид 4-78
Разросшийся каллус
То же
1 (80689
Та блица 2
Выход растений в зависимости от наличия амилазной активности в новообразованиях при пересадке на среду для регенерации (из
30 новообразований) Процент новообПо.пучено растений от новообразований
Генотип
Высажено новообразований без ковки генер. растений активности
Тритикалепшеничный гибрид
4-78
10
33
12
60
100
16 14
16
100
Составитель С.Куваева
Редакт< р М.Петрова Техред М.дидык Корректор А. Зимокосов
Заказ 1129/4 Тираж 66 1 Подписное
ВИИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, 6-35, Раушская наб., д.4/5
Произво;гственно-полиграфическое предприятие, г.ужгород, ул.Проектная,4
Тритикалепшеничный гибрид
10/1-79 Трит.
1685/84
Тритикалепшеничный гибрид
14-79 Трит.
1685/84 с амн- без лазной амиактив- лазностью ной с амилазной активностью амилазной активности разований, не дающих рстений, 7. выбра—
Процент совпадений амилазной активноети с ре
