Способ определения иммунодефицитного состояния при воспалительных заболеваниях

 

СООЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) А1 (5g 4 0 01 Н 33/53

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (21} 3922101/28-14 (22) 26.07.85 (46) 15.12.87. Бюл. ¹ 46 (71) Научно-исследовательский инстчтут урологии (72) Н.А.Лопаткин и И.И,Дзержинская (53) 616.07 (088.8) (56) WHO report of secnitific graup

Immunodeficincy, Clin Хпшшпо1 - and

Immunopatho 1979, 13,3, 297-359. (54)(57) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ИММУНОДЕФИЦИТНОГО СОСТОЯНИЯ ПРИ ВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ путем выявления фагоцитарной активности нейтрофилов, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, определяют фагоцитарную активность

Е-розеткообразующих нейтрофилов и при снижении зтого показателя более чем на 507. в сравнении с нормой определяют иммунодефицитное состояние.

1359745

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в клинической иммунологии для диагностики дефицита функции Е-розеткообразующих нейтрофилов (Е-РОН ) при определении иммунодефицитных состояний.

Целью изобретения является повышение точности определения иммунодефицитных состояний при воспалительных заболеваниях. эа счет исследования фагоцитарной активности Е-РОН.

Способ осуществляют следующим образом, У пациента берут кровь и выделяют субнопуляцию фагоцитирующих Е-POH за счет того„ что разделение клеток крови производят наслаиванием 3 мл цельной крови ча двухступенчатый градиент фиколл-уротраста с плотностью

1,077-1,083 г/мл и 1,095-1,005 г/мл с последующим центрифугированием при 0 С со скоростью 1000-1500 об./

/мин в течение 20-30 мин. Получают две чистые популяции клеток: лимфоцитарную и нейтрофильную. Соединяют

О,! мл нейтрофилов (3 10 в 1 мл) с 0,1 мл 1 млрд. взвеси золотистого стафилококка (штамп ?ер .п). Первую пробирку с этой смесью инкубируют ° о при 4 С 30 мин, вторую в течение

120 мин. Дополнительно перемешивая покачиванием каждые 10 мин, Делают мазки, сушат, фиксируют метанолом

3-5 мин, красят аэур-эоэином 3

5 мин.

Подсчет, Определяют содержание лейкоцитов в 1 мкл (L), а также подсчитывают процентное содержание нейтрофилов (1) среди всех лейкоцитов в мазке крови. Зная процентное содержание нейтрофилов, высчитывают их абсолютное содержание

L 1 е

В препарате просчитывают процент

Е-роэеткообразующих нейтрофилов (Е-РОН) (а), а зная относительное содержание Е-РОН вычисляют их абсолютное количество

N*a

В препаратах 2 и 3 просчитывают процент фагоцитируюших клеток (б и в,. Вычисляют абсолютное их количест1 во (Р, Р)

M - б И в

Р F a

100 100

Фагоцитарный индекс (ФИ) — среднее число фагоцитирующих бактерий на 1 нейтрофил.

Абсолютный фагоцитарный показатель (АФП) = ФИ х Р, Индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ) б.30 мин ФИ 30 мин )!

О в.120 мин ФИ 120 мин

6850 61

И = -- — -- — — = 4178 5 в 1 мкл

4178,5 ° 35,5

M= = 14834 в 1 мкл;

1483,4" 48

Р— — -- -- †-- — 712 в 1 мкл.

Ъ

1483,4 27

400 5в 1

t мкл.

Фагоцитарныи индекс (ФИ). Количество фагоцитированных бактерий нейт-

50 рофилами: через 30 мин — 207; через

120 мин — 105, ФИ (через 30 мин) = 48 = 4,3;

27

ФИ (через 120 мин) = †- = 3,8.

АФП (череэ 30 мин) = 4,3r712 =

= 3061,6 в 1 мкл; АФП (через

120 мин) = 3,8 400,5 = 1521,9 в

1 мкл;

Смесь А: фиколл 11,2 г; уротраст

60 Х 20 мл; дистиллированная вода

15 100 мл. Плотность раствора 1 0951 005 г/мл.

Смесь В: фиколл 7,2 г; уротраст

607 20 мл; дистиллированная вода

100 мл, Плотность раствора I 077—

20 1,085 г/мл.

Аналоги: Урографин, верографин.

Пример 1. Расчет показателей фагоцитарной активности у практически здорового человека, В иммерсионной системе микроскопа в 6-7 разных полях в препарате

1 получено 35,5Х Е-РОН, в препарате

2 (инкубация 30 мин) — 48X фагоцитирующих нейтрофилов, в препарате

ЗО 3 (инкубация !20 мин) - 277. фагоцитирующих клеток. Содержание лейкоцитов в 1 мкл крови 6850 процентное содержание нейтрофилов в формуле крови 61, Подставив в формулы цифровые значения поЛучаем

1359745

48 4, 3!1

27 3,8

1,45.

Анализ мочи: удельный вес 1020; белок отсутствует; лейкоциты 12--15

5 в поле зрения, Секрет простаты: во всех полях зрения клетки переходного эпителия в состоянии выраженного атипизма„

В цитологическом отдел нии из

0 уретры секрета простаты ветре аются клетки переходного эгд те1в я в состоянии выраженного атипизма, Атипизм клеток в мазке из уретры скорее всего связан с деструктивны .и процесса5 ми эпителия уретры, тела простаты и семенных пузырьков, Больному проводились многократные курсы а;;.-ибактериальной терапии и можно предположить иммунодефицитное состояние.

0 Иммунологическпе исследования; лейкоциты 4650 в 1 мкл; сегментоядерные нейтрофилы 1906,5 в 1 мкл (4 %,; (!

С7 лимфоциты 2325 в 1 мкл (50г. ); моноциты 325,5 в 1 мкл (77); содержа35 ние Е-РОН 953,2 в 1 мкл (50!. ), Процент фагоцитирующих нсйтрофилов: через 30 мин — 20; через

120 мин — 12.

Абсолютное количестнс фагоцитирующих нейтрофилов: через 30 мип

190,6 в 1 мкл; через 120 мии

144,4 в 1 мкл.

ФИ через 30 мин †. 2,?: через

120 мин - 2,8, 76 4,61

3,1

ИЗФ—

1,5.

АФП через 30 через 120 мин—

Г 20

Т2

ИЗФ =

2 мин — 419 3 в 1 мкл

320,3 в 1 мкл.

2,2 1

Я

2 8 — 1,2, 50

П р.и м е р 2. Больной Н, 72 го- 5 да. Поступил с диагнозом Аденома предстательной железы, хронический простатит в фазе ремиссии. ХПН латентная стадия, На экскреторных урограммах функция почек сохранена, пас10 саж контрастного вещества не нарушен, на нисходящей цистограмме дефект наполнения, характерный для аденомы простаты, Ректально железа увеличена в 1,5 раза туго эластической консистенции.

Лабораторные данные без отклонений от нормы, Иммунологические исследования (17.07.84 г): L 4750 в 1 мкл;, сегментоядерные нейтрофилы 2802,5 в

1 мкл (54/); эозинофилы 237,5 в

1 мкл (57.); лимфоциты 1662,5 в

1 мкл (357); моноциты 285 в 1 мкл (67); Е-РОН 1317,1 в 1 мкл (47/).

Процент фагоцитирующих клеток через 30 мин 76; через 120 мин — 50.

Абсолютное число фагоцитирующих нейтрофилов: через 30 мин — 1000,9 в 1 мкл; через 120 мин — 658,5 в

1 мкл.

ФИ через 30 мин — 4,6; через

120 мин - 3,9; через 30 мин

4604,1 в 1 мкл; через 120 мин

2041,3 в 1 мкл.

Иммунологические показатели в пределах нормы. 01.08,84, произведе- 40 на аденомэктомия. В послеоперационном периоде осложнений не было. Рана зажила первичным натяжением. Больной в удовлетворительном состоянии выписан домой. 45

Пример 3, Больной К. 25 лет, Поступил 13.07,84 г. с диагнозом: хронический простатовезикулит, хронический уретрит неясной этиологии.

В течение последних двух месяцев появились явления уретрита, Болезненность в области промежности, появление отделимого из уретры после ночного сна.

Анализ крови (05.07,84г.): лейкоциты 6,5 10 ; эозинофилы 4Х; палочкоядерные нейтрофилы 137; сегментоядерные нейтрофилы 49; лимфоциты 20%; моноциты 5%.

Жалобы на боли в области промежности, появление мутного отделения из уретры после ночного сна, ослабление эрекций, раннюю эякуляцию, гоно рею, явления уретрита, В посевах обнаружен гонококк, Прошел полный курс лечения гонореи с применением гоновакцины, Отмечено клиническое и лабораторное выздоровление.

По иммунологическим показателям у больного относительная степень иммунодефицита количества Е-"ГО-1 звена нейтрофилов, однако имеется глубокий дефицит относительного и абсолютного числа фагоцитирующих Е-PÎH, ФИ и АФП, т,е„ показатели более на

507 ниже контрольных величин. Больно" . му назначена антибактериальная тера

1359745 пия в сочетании со стимулирующей (перагинал 1000 МПД вЂ” 1300 — 2000—

3000, ежедневное повышение дозы).

Иммунологические исследования: лейкоциты 6550 в l мкл; сегментоядерные

5 нейтрофилы 3864,5 в 1 мкл (59%); эозинофилы 77,2 в 1 мкл (27.); палочкоядерные нейтрофилы 77,2 в 1 мкл (2%); лимфоциты 2096 в 1 мкл (32%); моноциты 193,2 в 1 мкл (5%); Е-РОН

1185,4 в 1 мкл (487).

Процент фагоцитирующих нейтрофилов: через 30 мин — 46; через

120 мин — 26. 15

Абсолютное количество фагоцитирующих Е-PОH через 30 минут — 580,8 в

1 мкл; через 120 мин — 330,8 в

1 мкл, ФИ через 30 мин — 4,6; через

120 мин — 3,6.

АФП через 30 мин - 2671,7 в

1 мкл; через 120 мин — 1190 8 в

1 мкл.

46 4,61

26 3,6)

ИЗФ

1,4.

По иммунологическим показателям количество Е-РОН а также показатеь Д ли, характеризующие функцию Е-РОН, звена после проведенного курса стимулирующей терапии, повысились до контрольных величин. 10.07,84 г.Состояние больного удовлетворительное.

Явления баланопастита и уретрита 35 стихают, 17 ° 07.84 г, Больной в удовлетворительном состоянии выписан домой.

Таким образом, у больного хронический воспалительный процесс, по поводу которого неоднократно получал курсы антибактериальной терапии, однако эффект в лечении был относительный. В результате проведенных иммунологических исследований выяв- 45 лен относительный дефицит количества Е-розеткообразующих нейтрофилов, а также глубокий (более 507) дефицит функции Е-РОН звена, Это потребовало назначения стимулирующей терапии.

После проведенного курса стимулирующей терапии в сочетании с антибактериальной нормализовались клинические, лабораторные и иммунологические данные, Больной в удовлетворительном состоянии выписан домой.

Пример 4, БольнаяМ., 32года. Поступила в клинику в связи с обострением хронического пиелонефрита, Температура тела 38 С, озноб, болезненность в области правой поч-, ки. Симптом Пастернацкого положительный, Уменьшение суточного диуреза до

300 мл. На экскреторных урограммах функция правой почки сохранена, пассаж не нарушен.

Анализ крови: лейкоциты 25 х х 10 ь в 1 мкл; эозинофилы 2%; палочкоядерные нейтрофилы 107.; сегментоядерные нейтрофилы 54%; лимфоциты

29%; моноциты 7%.

Анализ мочи: удельный вес 1020; белок 0,099%; лейкоциты сгустками до 100 в поле зрения микроскопа; эритроциты 10-15 незначительные. В посеве мочи роста микрофлоры не обнаружено. Заключение: У больной обострение хронического пиелонефрита.

Иммунологические исследования: лейкоциты 7000 в 1 мкл; сегментоядерные нейтрофилы 3220 в 1 мкл (44%); эозинофилы 140 в 1 мкл (27.); лимфоциты 3290 в 1 мкл (47%); моноциты 490 в 1 мкл (77); содержание

Е-РОН 1127 в 1 мкл (357.).

Процент фагоцитирующих нейтрофилов." через 30 мин - 30; через !

20 мин — 27.

Аб солютное число фагоцитирующих

Е-РОН: через 30 мин — 338,1 в 1 мкл; через 120 мин — 304,3 в 1 мкл, ФИ через 30 мин — 1,4; через

120 мин — 2,6.

АФП через 30 мин — 473,3 в 1 мкл; через 120 мин — 791,1 в 1 мкл.

30 141

27 2,6

ИЗФ

0,8.

Таким образом, несмотря на то, что у больной количественное содер-. жание E-POH в пределах нормы, тем не менее выявлен глубокий дефицит функции данного звена относительного и абсолютного количества фагоцитирующих Е-РОН, ФИ, АФП, а также фагоцитоз имеет незавершенный характер, Больной показана стимуляция E-POH звена продигизаном на фоне антибактериальной терапии в связи с вялотекущим воспалительным процессом в почке.

Иммунологические исследования: содержание Е-РОН 1188 в 1 мкл (36%).

Процент фагоцитирующих нейтрофилов: через 30 мин — 38; через 120 мин -21.

59745

38 4,8 l

1 48

4,5 1

3,5 3

1,4.

Таким образом, перед поступлением в клинику у больной в течение

Составитель Н. Хрусталева

Техред Л.Сердюкова

Корректор С. Черни

Редактор T. Ïàðôåíîâà

Заказ 6151/48 Тираж 776

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д.4/5

Подписное

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул,Проектная, 4

7 13

Абсолютное количество фагоцитирующих Е-POH через 30 мин

451,4 в 1 мкл; через 120 мин

249,5 в 1 мкл.

ФИ через 30 мин - 4,8; через

120 мин — 5,5.

АФП через 30 мин — 2166,7 в

1 мкл; через 120 мин — 1372,2 в

1 мкл.

8.06.84 г. у больной нормализовался диурез, увеличился до 1000 мл, уменьшилась интенсивность болей.Однако в связи с тем, что дефицит фагоцитирующих Е-РОН и АФП сохраняется, рекомендован повторный курс стимулирующей терапии. Проведен курс продигнозана.

Иммунологические показатели: содержание Е-РОН 1823,3 в 1 мкл (377.).

Процент фагоцитирующих нейтрофилов через 30 мин — 48; через 120 мин

29.

Абсолютное количество фагоцитирующих нейтрофилов через 30 мин—

875,1 в 1 мкл; через !?0 мин

528,7 в 1 мкл.

ФИ через 30 мин — 4,5; через !

20 мин — 3,5, АФП через 30 мин — 3937,9 в мкл; через 120 мин — 1850,4 в мкл. трех месяцев отмечался субфиорилио тет (до 38 С), периодические приступы болей в правой . поясничной облас5 ти снижение суточного диуреза до

300 мл. При поступлении анализ мочи: лейкоциты до 100 в поле зрения; анализ крови: лейкоциты 25,000, палочкоядерные нейтрофилы 10К; сегменто10 ядерные нейтрофилы 54Х; лимфоциты

297.; моноциты 71 °

Мочевина крови 5,2 мм/л, креатинин 0,12 мм/л. На обзорных рентгенограммах теней конкриментов в проекции почки и мочевыводящих путей нет.

На серии урограмм функция почки своевременная.

Ренография: секреторная и эвакуатарная-функция правой почки умеренно

20 снижена, дефицит очищения ЗОБ.

Иммунологические исследования выявили у больной вялотекущий воспалительный процесс, обусловленный дефи= цитом функции Е-РОН звена, В резуль25 тате первого курса стимулирующей терапии продигиозаном в сочетании с антибактериальной терапией у больной улучшились клинические и лабораторные данные, однако, по иммунологи30 ческим показателям сохранился деф 1цит фагоцитирующих Е-РОН.и АФП, что потребовапо повторно-о курса стимулирующей терапии продигиозаном„ В результате второго курса стиму= лирующей терапии в сочетании с антк35 бактериальной терапией у больной нормализовались клинические, лабораторные и иммунологические показате-. ли. Больная в удовлетворительном сос4О тоянии выписана домой.