Средство для определения метаболитов в биологической жидкости

 

Изобретение относится к биохимии . Цель изобретения - повьшение точности определения. На полоску из поливинилхлорида накладывают полоску из фильтровальной бумаги, гидрофобированной силиконовым маслом. Затем накладывают полоску из поликарбонатного слоя, на котором находится слой, состоящий из высушенной водной, содержащей реагенты поливинилпропионовой дисперсии. На эти слои накладывают нейлоновую сетку и с помощью плавящегося клеящего вещества из полиамида наклеивают выступающие за пределы слоев зоны сетчатого слоя на носитель. 2 з.п.ф-лы, I табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН

А3 (51) 4 G Ol N 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К flATEHTV

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИЙ (2I) 3435638/28-14 (22) 07,05.82 (3I) P 3118381.6 (32) 09.05.81 (33) 0Е (46) 23.04.88. Бюл. Ó 15 (71) Берингер Маннхайм ПкбХ (ОЕ) (72) Анэельм Роте, Адольф Карл Зелле и Бернвард Сойка (ОЕ) (53) 612.015(088.8) (56) Заявка ФРГ N 2854342, кл. G OI N 31/22, 1978. (54) СРЕДСТВО ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ METASOЛИТОВ В БИО110ГИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ (57) Изобретение относится к биохн„,80„„1391506 мии. Цель изобретения — повышение точности определения. На полоску из поливинилхлорида накладывают полоску из фильтровальной бумаги, гидрофобированной силиконовым маслом. Затем накладывают полоску из поликарбонатного слоя, на котором находится слой, состоящий иэ высушенной водной, со-, держащей реагенты поливинилпропионовой дисперсии. На эти слои накладывают нейлоновую сетку и с помощью плавящегося клеящего вещества иэ полиамида наклеивают выступающие эа пределы слоев зоны сетчатого слоя на носитель. 2 з.п.ф-лы, I табл.

139!506

Изобретение относится к медицине, а именно к испытательным средствам, предназначенным для установки компонентов в жидкой пробе.

Цель изобретения — повышение точности определения.

Цель достигается за счет использования сетки, фиксированной на носителе и закрывающей индикаторный слой,19 при этом сетка выполнена из нитей толщиной 20-200 мкм, а величина открытой поверхности индикаторного слоя составляет 40-807 от его общей поверхности. !5

Пример 1, Изготовление испытательной пленки, чувствительной к глюкозе.

20 KU оксидазы глюкозы, 80

VU пероксидазы, 5 мл 1 М порошка 20 цитрата (рН 5), 0,13 r алгината Na, 13 г дисперсии поливинилпропината (507. — ная), 0,375 г тетраметилбензидина (3, 3, 5, 5 ), 0,1 г 1-фенилсемикарбацида, 1 г диоктилнатриума 25 сульфоянтарной кислоты, 5 мп метоксиэтанола, 10 г геля кремния, 12 мл воды обрабатывают до гомогенной массы и через зазор шириной 0,1 мм наносят на поликарбонатную пленку толщиной !

00 мк. Полученную таким образом пленку разрезают íà IIQSIocKH шириной

6 мм, каждую полоску обклеивают с помощью двусторснней клеящей ленты вблизи одной продольной кромки полоской шириной 6 см из поливинилхлоридной пленки толщиной около 0,5 мм.

Затеи разрезают поперек к обклеенной полосе на куски шириной 6 мм.

Если полученные таким образом ис- 40 пытательные полоски на короткое время погружаю-. в содержащую глюкозу мочу, то после реакции, длящейся 1 мин, получается зависящее от концентрации глюкозы ступенчатое, от зеленого до сине-зеленого, окрашивание. Несмотря на тщательное снятие испытательных полосок с края сосуда для проб испытательная площадка окрашивается неравномерно иэ-эа неравномерной толщины отстающей пленки жидкости, причем из-за предотвращения доступа воздуха к местам, в которых находится утолщенная пленка жидкости, реакция идет более слабо. После 5 мин, в течение которых жидкостная пленка полностью

55 высушивается, эти места иэ-за более

BblcoKoH концентрации, напротив, окрашиваются более интенсивно.

Равномерное окрашивание может быть достигнуто тогда, когда испытательную полоску погружают в испытуемый раствор на 30-60 с, а затем после извлечения тщательно сушат путем о6тирания мягкой ватой и считывают реакцию через одну минуту.

Пример 2. Изготовление гидрофобного слоя.

Фильтрующая бумага пропитывается раствором, содержащим 50 мл силиконовой смолы ИК 15a (Wacker) 5 мл отвердителя (10X алюмоацетилацетоната в толуоле), 1 л бутилэфируксусной кислоты, и высушивается при 130 .

Полученная таким образом гидрофобная бумага режется аналогично примеру 1 на полоски шириной 6 мм и наклеивается на поливинилхлоридную пленку. Другой липкой лентой индикаторная пленка согласно примеру 1 закрепляется на гидрофобной бумаге и снова режется поперек к этим лентам на полосы шириной 6 мм.

Если полученные таким образом полосы погрузить в содержащую глюкозу мочу, то можно наблюдать, что мостик мочи, находящийся рядом с контролирующим участком, быстро отсасывается через гидрофобную бумагу и удаляется, в то время как возможная неравномерная пленка жидкости на испытательной пленке, как в примере

1, отстает и медленно высыхает. Реакции с различными концентрациями глюкозы и неравномерное окрашивание полностью соответствуют наблюдениям согласно примеру 1.

Пример 3. Изготовление средства для контроля глюкозы.

На полоску из поливинилхлорида толщиной 0,5 мм и шириной 6 см (первый носитель) накладывают согласно примеру l, отступив от продольной кромки на 3 мм, полоску шириной 6 мм и толщиной 0,5 мм, выполненную иэ фильтрующей бумаги, гидрофобированной силиконовым маслом согласно примеру 2 (второй всасывающий слой) и на нее накладывают также шириной 6 мм полоску из поликарбонатного слоя толщиной 100 мк (не пропускающий третий жидкость слой), на котором находится слой, состоящий иэ высушенной водной, содержащей реагенты поливинилпропионовой дисперсии толщиной 0,1 мм согласно примеру I (индикаторный слой).

На эти слои накладывают нейлоновую

l 391506 сетку шириной 12 мм (с толщиной нитей

60 мк и площадью отверстий 457.) (пятый сетчатый слой) и с помощью плавящегося клеящего вещества иэ полиамида, температура плавления которого

50 С, .наклеивают выступающие за пределы слоев зоны сетчатого слоя на носитель 1 прокатыванием нагретого до

90 С стального валка, имеющего диаметр 20 см. После этого полоску делят поперек на отдельные куски шириной

6 мм.

Если полученные таким образом полоски опустить на 1 с в мочу и стрях-15 нуть их легко о край сосуда с пробой, то можно установить, что находящиеся рядом с контролирующим участком мостики жидкости быстро отсасываются, и поверхность устройства, которая была вначале блестящей из-за пленки жидкости, находящейся между ячейками сетки, через 2-5 с становится матовой, так как излишки жидкости отсасываются с контролирующей поверхности через 25 гидрофобную бумагу. В отличие от испытаний по примерам 1 и 2 вся поверхность пленки окрашена (в зависимости от концентрации глюкозы) более или менее сильно, однако равномерно.

Пример 4. Изготовление предлагаемого средства.

Согласно примеру 1 на полихлорвиниловую пленку с одной стороны наносится слой плавкого клеящего вещества, на который поочередно слоями укладываются полоса гидрофобной бумаги (согласно примеру 2), полоса пленки, используемой для проведения глюкоэных испытаний (согласно примеру 1) и сетка шириной 12 мм (с толщиной нитей 20 мкм и открытой поверхностью индикаторного слоя, составляющей 807).

С помощью нагретого валика, имеющего в месте расположения испытательной пленки выемку глубиной 2 мм, нейлоновая сетка прижимается с обеих сторон к испытательной пленке и закрепляется посредством плавкого клеящего слоя. После этого средство разрезается на полоски шириной 6 мм.

Пример 5. Изготовление предлагаемого средства.

Согласно примеру 1 на полихлорвиниловую пленку с одной стороны наносится слой плавкого клеящего вещества, на ко орый поочередно слоями укладываются полоса гидрофобной бумаги (согласно примеру 2), полоса пленки, используемой для проведения глюкоэных испытаний (согласно примеру 1), и виниловая сетка шириной

12 мм (с толщиной нитей 200 мкм и открытой поверхностью индикаторного слоя, составляющей 407.). С помощью нагретого валика, имеющего в месте расположения испытательной пленки выемку глубиной 2 мм, нейлоновая сетка прижимается с обеих сторон к испытательной пленке и закрепляется посредством плавкого клеящего слоя.

После этого средство разрезается на полоски шириной 6 мм.

Средства, изготовленные по примерам 4 и 5 приобретают при их погружении в глюкоэосодержащую мочу равномерную окраску, соответствующую окраске средств, полученных по примеру 3.

Пример 6. Исследование продуктов на реакцию с водными растворами глюкозы.

1. Стандартные испытательные полосы для глюкозы изготовленные по из7 вестному способу. Эти полосы состоят иэ пластмассовых полос шириной 5 мм, длиной 8 см, на нижний конец которых наклеена испытательная эона 5х5 мм.

Она состоит из двойной липкой ленты для фиксации гидрофобной бумаги, второй двойной липкой ленты для связывания и реактивной бумаги.

2. Испытательная для глюкозы полоса, в которой реактивная пленка (6 х 6 мм) согласно примеру 1 с помощью двойной липкой ленты приклеена на пластмассовую полосу.

3. Испытательная,для глюкозы полоса, которая изготовлена согласно примеру 3.

Испытательные полосы (до 10) погружают в водные растворы глюкозы указанных концентраций и путем обрывания кромки на краю пробирки освобождаются от избыточного субстрата °

Через 1 мин измеряется обесцвечивание с помощью ремиссионного фотометра в виде 7. ремиссии при 500 нм. Хотя в качестве области измерения измеряется круговой сектор испытательного участка диаметром примерно 4 мм, показано, что наблюдаемые визуально пятна в полосах I и 2 приводят к сильному разбросу значений измерений, т.е. низкой точности. Предлагаемая полоса равномерно окрашена и дает

1391506 незначительный разброс измеренных значений .

Пример 7. Для изготовления пленки для определения холестерина в сыворотке приготавливают дисперсию со следующим составом:

Целлюлоза, г 5

Поливинилпропионатдисперсия (50X в

10 воде), r 3

Двуокись титанапорошок, r 2

Метилгидроксипропилцеллюлоза, r

Холестеринэстераза, U

Холестериноксидаза, U

Пероксидаза

Галловая кислота, г

Раствор 0,2 г 3,3,5,5 тетраметилбензидина и 0,17 r диоктилнатрийсульфосукцината в

0,74 мг ацетона, мг 1

Фосфорнокислый калий, г 0,049

Фосфорнокислый натрий, г 0,167 (динатрийгидрогенфосфатдигидрат)

Дистиллированная вода, мл 19,5

Смесь наносят на пленку поликарбоната, образуя на ней слой толщиной

300 р, который затем высушивают теплым воздухом и согласно примерам 1 3 перерабатывают в испытательные полосы. Полученный таким образом реактивный слой (испытательная полоска) дает с содержащими холестерин сыворотками (в зависимости от концентрации холестерина) хорошее по ступеням окрашивание в голубой цвет.

Пример 8. Пленка для определения нитрита в моче быпа получена следующим способом.

0,042 15

0,0032

В раствор (а) вводили при помешивании 10 г целлюлозы, отфильтровывали и высушивали теплым воздухом.

Раствор а:

3-Гидрокси — 1,2,3,4-тетрагидробензо-()-хинолин, r 0,392

Сульфаниламид, г 0, 344 50

L-винная кислота, г 5,00

Метанол р.А., мл 200

Из пропитанной таким образом целлюлозой была получена следующая масса для покрытия:

Пропитанная целлюлоза, r 10,00

Метилгидроксипропилцеллюлоза, г 0,09

Поливинилпропионатдисперсия (507 в воде), г 5

10Е-ный раствор диоктилнатрийсульфосукцината в ацетоне, мл 3

Дистиллированная вода, r 35

На пленку из сложного полиэфира наносили слой этой массы толщиной

400 y, а затем высушивали теплым воздухом и согласно примерам перерабатывали в испытательную пленку. Водонерастворимая пленка при взаимодействии с содержащими нитриты жидкостями, например с мочой или жесточными жидкостями, имела красное окрашивание.

Пример 9. Для определения гемоглобина в крови была изготовлена пленка из следующей смеси:

Целлюлоза, г 20

Поливинилпропионатдисперсия (50X в воде), г

Диоктилнатрийсульфосукцинат, г 0,3

0,5 моль РО -буфера, рН 7, мл 75

Смесь наносили на пленку сложного полиэфира слоем толщиной 200, а затем высушивали теплым воздухом и перерабатывали в испытательную полоску.

Если воздействовать в течение

1 мин одной каплей из ряда разведений крови с различным содержанием в ней гемоглобина, то без смывания капли ватой получают гамму окрашивания.

Названные в примерах материалы можно охарактеризовать следующим образом.

Несущей пленкой является поливинилхлоридная пленка толщиной 0,5 мм.

В качестве непроницаемого для жидкости слоя является поликарбонатная пленка толщиной 100 мк. Материалом всасывающего слоя в примере 2 является фильтрующая бумага, пропитанная силиконовой смолой. В качестве индикаторного слоя в примере 1 — поливинилпропионатная дисперсия. Покрываюптий слой сетки в примере 3 представляет собой нейлоновую сетку — полиKoнденсационный продукт из гександиамида и апипиновой кислоты. Двусторонней клейкой лентой может быть тезафикс, представляющий собой полиэфирные пленки, покрытые с двух сторон клеящим веществом. В качестве

1391506

Концентрация, мг глюкозы 100

Показатели

250 500 1000

26

Сравнение

22

43

28

49

14

28

13 (пятнистая) 27

26

48

31

12

38

12

Среднее значение/1 с. 46,3/4,2 29,4/5,0 12,6/2,0

Пленка наклеена на фольгу (пример 1) 33

20

20

34

18

14 (сильно пятнис тая) 34

34

45 клейкого вещества в примере 3 используют полиамидную смолу, которая размягчается при 45-50 С.

Формул а изобретения

l. Средство для определения метаболитов в биологической жидкости, состоящее иэ отдельных, закрепленных между собой слоев, расположенных в следующей последовательности: носитель, слой, замедленно впитывающий жидкую фазу, слой, непроницаемый для жидкой фазы, индикаторный слой, о тл и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью повыщения точности определения, индикаторный слой выполнен из полимера, над ним расположена сетка, фиксированная на носителе и охватывающая все слои средства, при этом сетка выполнена из нитей толщиной 20-200 мкм, а величина открытой поверхности индикаторного слоя равна 40-807 от его общей поверхности.

2. Средство по п. 1, о т л и ч аю щ е е с я тем, что слой, замедленно впитывающий жидкую фазу, выполнен иэ гидрофобной бумаги.

3. Средство по и. 1, о т л и ч аю щ е е с я тем, что сетка выполнена иэ полимера или целлюлозы.

13915О6

Продолжение таблицы

Концентрация, мг глюкозы 100

Показатели

250 500 1000

31

29

13

31 25

34 21 Il

Среднее значение/ 1 с 34,4/5,6 28,2/6,5 12,1/5,0

Пленка на фольге с сеткой (пример 3) IO

34

28

10

36

36

I O (равномерно) 27

10

27

10

26

38

27

28

Среднее значение/1 с 35,8/1,5 27,2/0,8 9,8/0,4

Составитель А. Агуреев

Редактор Г. Гербер Техред М.Дндык Корректор И.Муска

Заказ 1788/58 Тираж 847 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4