Штамм бактерий rноdовастеr sрнаеrоidеs-продуцент убихинона q @

 

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к штаммам для биосинтеза убихинона . Целью изобретения является, получение нового штамма - продуцента убихинона, обладающего повьппенной биосинтетической активностью. Штамм 2R № 122 получают после обработки клеток Rhodobacter sphaeroidas 2R нитрозогуанидином с последующей селекцией клонов с пониженной скоростью роста в условиях азотфиксадии. Нутантный штамм обеспечивает выход целевого продукта в количестве 6,9 мг на 1 г сухих клеток, что вдвое превышает продуктивность исходного штамма. i (Л

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛ ИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИН (51) 4 С 12 N 15/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ /

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР

ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТКРЫТИИ (21) 4155836/31-13 (22) 04. 12. 86 (46) 30. 06. 88. Бюл. Ф 24 (71) Институт почвоведения и фотосинтеза АН СС Р и МГУ им. М.В.Ломоносова (72) О.Ф.Корсунский, И.Н.Гоготов, В.Д.Фролова, Т .Н.Митронова и С.В.Шестаков (53) 576.8. 078(088 ° 8) (56) Сахно О.Н., Ивановский Р.Н., Кондратьев E.Í. Микробиология. 1981, т. 50, в ч., с. 607 612.

Патент США Ф 3066080, кл. 195/96, 1962.

„„SU„„1406163 А 1 (54) ШТАММ БАКТЕРИЙ RHODOBACTER

SPHAегоIDES — ПРОДУЦЕНТ УБИХИНОНА Я (57) Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к штаммам для биосинтеза убихинона Яд . Целью изобретения является, получение нового штамма — продуцента убихинона, обладающего повышенной биосинтетической активностью. Штамм

2R Ф 122 получают после обработки клеток Rhodobacter sphaегоides 2R нитрозогуанидином с последующей селекцией клонов с пониженной скоростью роста в условиях азотфиксации. Мутантный штамм обеспечивает выход цеh левого продукта в количестве 6,9 мг на 1 г сухих клеток, что вдвое превышает продуктивность исходного штамма.

1406163

Изобретение относится к микробиологической промышленности, в частности к штаммам, используемым для биосинтеза убихинона Q „,.

Цель изобретения — получение нового штамма, обладающего повышенной биосинтетической активностью.

Для получения такого штамма исходный дикий штамм Rhodobacter sphaегоi- 0

des 2R обрабатывают нитрозогуанидином с последующей селекцией клонов с пониженной скоростью роста в условиях азотфиксации.

Штамм Rhodobacter sphaегоides 2R

Ф 122 депонирован во Всесоюзной коллекции микроорганизмов под номером

1593Д и характеризуется следующими культурально-морфологическими и физиолого-биохимическими признаками.

На агаризованной (1,2 Difco-агар) безазотистой среде через 5 сут культивирования образует мелкие светлорозовые сухие колонии правильной округлой формы диаметром 0,7-1,0 мм, на среде со связанным азотом — колонии сухие красной окраски диаметром

2-3 мм.

Клетки представляют собой короткие палочки, не отличающиеся от клеток 30 дикого типа.

Относится к группе грамотрицательных бактерий.

Факультативный анаэроб.

Способен к азотфиксации, 35

Имеет активную нитрогеназу при инкубировании на среде, содержащей (Ин ) 80

Отношение к источникам углеродà: gp используют малат Na, лактат Na, глюкозу.

Отношение к источникам азота: хорошо усваивает (ИН„) SO ; аминокисло- 5 ты: глутамин, алании, пролин, глутамат.

Оптимальные условия роста: температура 30-32 С, освещенность 15002000 лк, рН .7,0.

На.среде Ormedor при росте на свету при 32 С через 72 ч инкубирования концентрация клеток составляет 2-4 х х 10 клеток на 1 мл.

Для выращивания штамма Rhodobacter

sphaегоides 2R N,122 используется

55 среда Orme rod следующего состава, г /л:

%SO, 7Н,О 0,200

СаС1 2Н О О, 075

FeSO4 7Н О О, 011

ЕДТА 0,020

Микроэлементы 1 мд

К,НГО, 0,900

КН2РО4 0,600 (ЫН,), SO, 1,250

d1-малат Na 4-6

Витамины 1 мл

Состав микроэлементов, г/л:

НдВОЭ 2,860

ZnSO4 7Н О . 0,240

Cu(NOg) ЗН О 0,040

MnSO4 4Н О 2,100

Na MoO4 2Й О

0,750

Состав витаминов, мкг/л:

Биотин 10О

Никотиновая кислота 100

Тиамин 100 !

Пример 1. Для получения штамма трехсуточную культуру бактерий

Rhodobacter sphaегоides 2R (2 10 кл/

/мл) отмывают от культуральной жидкости и ресуспендируют в 0,01 М Кфосфатном буфере, рН 6,8. Затем к суспензии добавляют нитрозогуанидин до конечной концентрации 100 мкг/мл и выдерживают при комнатной температуре в темноте в течение 60 мин. Отмытые от мутагена клетки высевают в жидкую среду с 0,125 сульфата аммония и инкубируют на свету в течение

3 сут. Для истощения внутриклеточного фонда источников азота клетки отмывают и выдерживают 1 сут в безазотистой среде. С целью обогащения популя" ции мутантами суспензию клеток инкубируют 20 ч с пенициллином (2 мг/

/мл), затем высевают на агаризованную среду с 0,01 (МН4) SÎ 4 и подращивают в условиях азотфиксации — в атмосфере N< при освещенности 15002000 лк. Через 8-10 сут выделяют мелкие колонии диаметром 0,1-0 5 мм и проверяют эти клоны на способность к росту в среде без источников связанного азота и на средах с 0,125% (ИН4) 804 с 10 мМ глутамата натрия, 10 мМ глутамина, аланина, пролина.

Пример 2. Для получения биомассы, содержащей убихинон Q, в качестве посевного материала используют

4-суточную культуру, выращенную на агаризованной среде. Клетки выращивао ют на жидкой среде при 30-32 С и освещении 1500 лк до стационарной стадии роста.

1406163

Формула изобретения

Составитель О.Жакетов

Техред А.Кравчук Корректор И.Эрдейи

Редактор Н. Киштулинец

Тираж 520 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 3157/23

Производственно-полиграфическое предприятие, г..ужгород, ул. Проектная, 4

По сравнению с исходным выход целевого продукта, обеспечиваемый штаммом 2R Ф 122, составляет 6,9 мг на

1 г сухих клеток против 2 4 мг/г соУ

5 ответственно.

Штамм бактерий Rhodobacter sphaегоides BKN В-159ЭЛ продуцент убихи- па«