Способ распознавания генотипов самоопыленных линий кукурузы
Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к селекции и семеноводству. Целью изобретения является повышение точности способа. Распознавание генотипов самоопыленных линий кукурузы проводится изозлектрофокусированием запасных белков, извлеченных спиртовым раствором мочевины из эндосперма, определением изозлектрических точек белковых компонентов, группированием их по субфракциям и составлением белковых фор- .мул, 1 табл.
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУБЛИН
„„SU„„142307
15Р 4 А 01 Н 1/06
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ н двт0РснамЪ СеиДатвъствм гООудАРС"ЩЕННЫЙ НОМИТЕТ СССР
ГЮ ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И OTHPblTH4 (21) 4216436/30-13 (22) 06.02.87 (46) 15.09.88. Бюл. Ф 34 (71) Казахский научно-исследовательский институт земледелия им.В.P.Âèëü" ямса (72) И.И.Савич и 10.В. Перуанский (53) 543.548(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР
Я 1194333, кл. А 01 Н 1/06, 1985.
I (54) СПОСОБ РАСПОЗНАВАНИЯ ГЕНОТИПОВ
СОИООПЫЛЕННЫХ ЛИНИЙ КУКУРУЗЫ (57) Изобретение относится к области сельского хозяйства, а именно к селекции и семеноводству. Целью изобретения является повыаение точности . способа. Распознавание генотипов самоопыленных линий кукурузы проводится изоэлектрофокусированием запасных белков, извлеченных спиртовым раствором мочевины Hs эндосперма, определением изоэлектрических точек белковых компонентов, группированием их по субфракциям и составлением белковых фор.мул. 1 табл.
1423070
Изобретение относится к сельскому хозяйству, а именно к селекции и се меноводству, и может быть использовано научными учреждениями при создании и паспортизации самоопыленных линий кукурузы, Целью изобретения является повышение точности способа.
Способ заключается в том, что ин- дивидуальная зкстракция белков из эносперма индивидуальных зерен прово-" ится на 2-3 зернах спиртовым раствором мочевины, изоэлектрофокусирование елков осуществляется в полиакрилмидном геле, содержащем 6 моль мочеины и 2% амфолитов-носителей рН 4-9, то позволяет разделить белки на 3 убфракции: М., P, g с последующим опеделением изоэлектрических точек ком- 0 онентов по белкам-маркерам и составением стабильных характеристик форул для каждой самоопыленной линии.
Способ осуществляется следующим
1 бразом. 25
Испольэовали различные самоопыленre линии кукурузы: Грушевская 380„
Г-192, ВИР 133 ТС, НО-14, НО-16, НО-139.
Белок из трех индивидуальных эндо- 30 пермов зерна кукурузы выделяют по едующей методике: растерный эндопери заливают 10-кратным количеством ,0%-ного этанола с 2 моль мочевины
Й выдерживают 30 мин при комнатной ч емпературе, а затем 60 мин при 60 С.
Раствор белка (объем 0,025 мл) наЦосят на 5%-ный полиакриламидный плас-. .тинчатый гель, содержащий 6 моль мочев4ны и 2% амфолитов-носителей рН 4-9, @ . размером 100х200х0,5 ьж. Католитом служит 0,5 М раствор едкого калия, анолитом — 0,5 М раствор фосфорной кислоты. Яа параллельную дорожку наносят смесь белков-маркеров с иэвест45 и ими изоэлектрическими точками (амил1оглюкозидаза 3,5; ферритин 4,4; бычий сывороточный альбумнн 4,7; л@ктоглобулин 5,34;..кональбумин 5 9; миоглобин лошади 7,3; миоглобин к rTs
8,3; рыбонуклеаза 9,45; цитохром
10,65).
Режим изоэлектрофокусирования:
1$ мин — 400 В; 15 мин — 800 В; 2 ч1$00 В. После окончания изоэлектрофо-. кусирования гель фиксируют .,2,57-ным
55 раствором трихлоруксусной кислоты с
3% сульфосалициловой кислоты, промывают 12,5%-ным раствором трихлоруксусной кислоты и окрашивают 0,0017-ным раствором кумасси R-250, приготовленном на 12,5%-ной трихлоруксусной кислоте. Отмывку избыточного краси" теля производят 107.-ным раствором этанола в 57.-ной уксусной кислоте.
Для определения изоэлектрических точек разделенных белковых компонентов строят калибровочную кривую: ось по горизонтали размечают в мм, а на вертикальную ось наносят значения изозлектрических точек. Измеряют рас-, стояние (мм). от катодного края геля до каждого из маркерных белков и по этим значениям строят кривую. Для определения изоэлектрической точки белкового компонента измеряют расстояние до него от катодного края геля и по калибровочному графику находят еГо изоэлектрическую точку.
Изоэлектрофокусировочные спектры (ИЭФ-спектры) белков самоопыленных линий кукурузы состоят из 3 четко вьг раженных групп (субфракций) компонентов:oC, P, g ..а "Субфракция представлена 11-16 компонентами слабой интенсивности, Р -субфракция состоит из 11 — 15 мощных по интенсивности компонентов, на долю которых приходится
80-90% всех белков, -субфракция, наиболее бедная по числу компонен" тов (0-4) слабой интенсивности. е6 и р-субфракции компонентов по характеру локализации их подразделяются на три части: о(, рН 4,00-4,80; < рН 4,816,09; х рН 6,10-6,76; f3 рН 6,777,20; (3 рН 7,21-7,59; /5 рН 7,568,13.
g -Субфракция включает компоненты с изоэлектрическими точками в пределах 8,14-9,00, На основании ИЭФ-спектров составляются белковые формулы самоопыленных линий кукурузы, которые приведены в таблице.
Белковая формула специфично характеризует каждую самоопыленную линию, на ее основе паспортные цифровые данные линии можно хранить в памяти ЭВИ и использовать по мере надобности селекционерами и семеноводами в своей работе.
Использование предложенного способа распознавания гепотипов самоопьгленных линий кукурузы позволяет на минимальном числе зерен (2-3 вместо
10) определять ИЭФ-спектры зеиновых и сопутствующих им запасных белков эндосперма, лишенных вариабельных
СуВфракСамоопыленные линии
ВИР-133 ТС НО-!4
Гр» ым »О (>>Г- >2
НО-Ib НО-13Ó.3
4,30; 4,40;
4,60; 4,70;
4>75
4,30; 4,40;
4>601 4,70;
4,751 4,80
4,40; 4,55;
4,751 4,80
4,30> 4,40;
4,60;
4,5$;
4,40; 4,55;
4,80
4,40;
4,80
5,00; 5,251
5,35; 5,50;
5,70
4,95; 5,00;
5,25; 5 ° 35;
5,50; 5,70
4,95; 5,25;
5,35; 5,50;
5,70
4,95;
5,25;
5,50;
5,93
5,ОО;
5,35;
5,70;
4,95; 5,25;
5>3$ ° 5 ° 50»
5,93
4,95; 5,25;
5,35; 5,93
6,101 6,20;
6,35; 6,45
6,10; 6,35;
6 ° 45
6,10; 6,20;
b,50; 6,65
Ь,!Э; Б»35;
6,1Э; 6,35; . 6»50» 6>Ь5
6 ° 13> 6 ° 35э
6,50; 6,65
6,77; 6,80;
7,03» 7>101
7 ° 15
6,77; 6,80;
7.00; 7,ОЗ;
7,10» 7,!5
6,77; 6,80;
7,03; 7,10;
7,15
6,80; 7,00;
7,031 7,10>
7 1$
6,80;
7,ПО;
7,10;
6,77р 6,801
7,00; 7,03;
7>10; 7,15
6,77;
6,90;
7,03;
7,15
7,331 7,40;
7,50; 7,55
7,33; 7,40;
7,50; 7,55
7 ° 33; 7,40;
7,50; 7,55
7,ЭЗ; 7,40;
7,50, 7, 401
7>55
7,33; 7,40;
7,50
7,33;
7 ° оо> 7р75 ° 7 ° 85;
8,05; 8,13
7,75; 7,80;
8,05
7,75; 7,80;
7;85
7,751 7,80;
7,85; 8»05
7,75; 7,85;
8,05
7,65; 7,75; гю В 05
8,30; 8,55;
8,65; 8,90
8,30; 8,55;
8,65 8,90
8,30; 8,55;
8 ° 65; 8,90
8»30
Составитель В>Демкин
Редактор Т.Лаэоренко Техред N.Дидык Корректор B Романенко. Тираж 661 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Заказ 4455/4
Производственно-полиграфическое предприятие, r. Ужгород, ул. Проектная, 4
>4 компонентов от зерна к зерну, и тем ния точности способа, разделение белсамым стабилиэировачь паспортизацию кон ведут иэозлектрофокусировайнем в самоопыленных линий кукурузы. полиакриламидном геле в диапазоне pFl
Ф о р м у л а и э о б р е т е н и я 4-9 с последующим определением изо5 электрических точек компонентов, с
Способ распознавания генотипов са- использованием маркерных белков с измоопыленных линий кукурузы включаю- вестными изоэлектрическими точками, щий извлечение спиртовой мочевиной зе- группированием компонентов в соответина и сопутствующих ему запасных бел- 10 ствии с их локализацией и интенсивноков эндосперма зерна, о т л и ч а ю- стью и составлением специфических шийся тем, что, с целью повыше- белковых формул.
