Способ выявления гиперлипидемии

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления повышенного содержания липидов в крови. Цель - повышение чувствительности способа. Пробу крови разводят буферным раствором, отделяют форменные элементы, добавляют флуоресцентный краситель и измеряют интенсивность его флуоресценции, а суммарное содержание холестерина и триглицеридов (в мг%) рассчитывают по формуле. Способ позволяет проводить анализ в 0,5-1 мкл плазмы. 1 ил.

СОЮЗ СОБЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

<5!! 4 G 01 N 33/52

О

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А BTGPCH0MV СВИДЕТЕЛЬСТВУ где К

На мость

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4244677/28-14 (22) 03.04,87 (46) 30.04. 89.Бюл. У 16 (7!) Научно-исследовательский институт физико-химической медицины (72) F...Н .Лапшин, А.Н.Рухтин, Г.F,.Äoáðåöîâ, Б.М.Красовицкий и В.Т.Скрипкина (53) 612.015 (О88.8) (56) Clin. Chem., 1986, 11 - 32, 1! 1, р. 63-66.

Изобретение относится к медицине, а именно к способам выявления повы, шенного содержания липидов в крови.

Цель изобретения — повьппение чув-т ствительности.

Способ осуществляют следующим образом.

Пробу крови разводят буферным раствором в 50-500 раз, отделяют форменные элементы, к полученному раствору плазмы добавляют флуоресцентный краситель ((!(K) 4-диметиламино-4— ( дифторметилсульфонилбензилиденацетофенон до концентрации !000-1100/

/Р мкМ (где à — величина разведения крови), измеряют интенсивность его флуоресценцпи и рассчитывают суммарное содержание холестерина (XC) и триглицеридов ТГ) по формуле

А (С + 75)

К 75 > нормы, В

ÄÄSUÄÄ 1476384 А1 (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ГИПЕРЛИПИДЕМИИ (57) Изобретение относится к медицине и может быть использовано для выявления поврав((енного содержания липидрв в крови. Цель изобретения - повьп((ение чувствительности способа.

Пробу крови разводят буферным раствором, отделяют форменные элементы, добавляют флуоресцентный краситель и измеряют интенсивность его флуоресценции, а суммарное содержание холестерина и триглицеридов (мг.X) рассчитывают по формуле. Способ позволяет проводить анализ в 0 5-1 мкл плазмы. 1 ил. суммарное содержание холестерина и триглицеридов, мгЖ; — интенсивность флуоресценции 4-диметиламино-4 - дифтор- 4Ъ ( ме тилсульфонилбензилиден- с, ацетофенона в исследуемом ©ф образце; СΠ— интенсивность флуоресцении р

4-диметиламино-4(-дифтор- р метилсульфонилбензилиденацетофенона в такой же концентрации, как в исследуемом образце, в стандартной плазме с известным содержанием холестерина и триглицеридов, разведенной в 2 F раэ;

С - суммарное содержание холе-стерина и триглицеридов в стандартной плазме, мгЖ. чертеже представлена завнсимежду интенсивностью флуоресцен1476384

А(С+75) К=-- — — — -75

45

560

10.5

500

55 ции ФК и суммарным содержанием холестерина и триглицеридов (по оси абсцисс .— интенсивность флуоресценции, мкМ; по оси ординат — суммарное содержание холестерина и триглицеридов

5 в плазме крови, MrX).

Пример I. 20 мкл крови разводят в 100 раз (F=100) физиологическим раствором, содержащим 1О мМ 10 трис-НС1 и 2 мМ ЭДТА, рН 7,4, центрифугируют полученную суспензию при

300g в течение 10 мин, к 1 мл супер натанта добавляют 10 мкл 1 мМ эталонного раствора ФК. Интенсивность флуоресценции при длине волны возбуждения 440 нм и длине волны наблюдения 550 нм измеряют на флуоресцентном спектрофотометре в 1-сантиметровой кювете. По приведенной формуле 20 рассчитывают суммарное содержание ТГ и ХС (2), равное 550 мгХ (время ана. лиза 1 мин). Величина :Е-, измеренная с помощью прототипа, составляет

546 мгХ (объем плазмы крови 50 мкл, 25 время анализа 15 мин). Верхняя граница нормы (N) суммарного содержания . указанных липидов составляет 470 мгЕ.

Таким образом, X ) N,N > 470 MrX и в исследуемой пробе выявлено повьппен- 30 ное содержание ТГ и ХС.

Пример 2. Пробу крови разводят в 50, 100, 200 и 500 раз. К полученным после отделения форменных элементов растворам плазмы добавляют 35

ФК до концентрации (К) 20, 10, 5 и 2 мкМ соответственно. По предлагаемому способу оценивают суммарное содержание ХС и ТГ.

В таблице показано суммарное содержание ТГ и ХС в плазме крови, мг%, определенное по предлагаемому cnoLo— бу в зависимости от разведения крови.!

Разведение Концентрация Содержание крови,F красителя, ТГ и ХС,Z, К=1000/F,ìêÌ мг7.

Таким образом, во всех приведенных случаях X> N, где N = 470 MrX (пример 1), и повьпченное содержание

ХС и ТГ выявляется вне зависимости от величины разведения крови.

Предлагаемое изобретение позволяет повысить чувствительность способа в 10-20 раз за счет воэможности про-: ведения регистрации в 0,5-1 мкл плазмы крови. Формула изобретения

Способ выявления гиперлипидемии путем отделения плазмы крови, добавления к ней красителя с последующим измерением интенсивности флуоресценции в исследуемом и контрольном образцах, определением суммарного содержания холестерина и;триглицеридов и сравнением полученного показателя с нормой, о т л и ч а ю щ и й— с я тем, что, с целью повышения чувствительности способа, в качестве красителя используют 4-диметиламино- (4 -дифторметилсульфонилбензилиденацетофенон в насыщающей концентрации, а суммарное содержание рассчитывают по формуле где К - суммарное содержание холестерина и триглицеридов, MFX

A. - интенсивность флуоресценции 4-диметиламино-4 -ди-.

1 фторметилсульфонилбенэилиденацетофенона в исследуемом образце;

С вЂ” суммарное содержание холестерина и триглицеридов в контрольном образце, плазмы мг7а у

 — интенсивность флуоресценцки 4-диметиламино-4 -диF фторметилсульфонилбенэилиденацетофенона в контрольном образце плазмы в такой же концентрации,как в исследуемом образце, а гиперлипидемию выявляют при увеличении полученного показателя вьппе нормы.

1476384 ,4 ,и

l0 тамг%

Составитель В.Митюшин

Редактор M.Ïåòðoâà Техред Л.Олийнык Корректор С.Черни

Заказ. 2150/45 Тираж 790 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и.открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-33, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул. Гагарина, 1О1