Способ определения устойчивости винограда к серой гнили

 

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции растений. Цель изобретения - ускорение процесса и повышение точности определения. Для определения устойчивости винограда к серой гнили ягоды отделяют от гребней с плодоножкой, дезинфицируют путем погружения в 65%-ный водный раствор этилового спирта на 4 мин, затем высушивают на воздухе и инфицируют нанесением на каждую ягоду по 0,03 мл споровой суспензии. Зараженные ягоды помещают в термостат на 65 ч при температуре 20°С, обычном освещении и влажности воздуха не ниже 90%. После инкубации ягоды измельчают, центрифугируют и в супернатанте определяют количественное содержание лейкоантоцианов. Формы, содержащие 28 и более мг/л данного вещества, относят к устойчивым, от 18 до 28 к среднеустойчивым, 18 и менее к восприимчивым. 1 з.п. ф-лы.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСНИХ

РЕСПУБЛИК

2 1 А1 (19) (11) (51) 4 А 01 Н 1/04

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCHOMV СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTHPbfTHRM

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4404136/30-13 (22) 23. 02.88 (46) 07. 12. 89. Бюп. N 45 (71) Всесоюзный научно-исследовательский институт винограда и продуктов

его переработки "Магарач" (72) П.Я.Голодрига и С.А.й(ербаков (53) 631.52(088.8) (56) Волынкин В.А. Лабораторный метод определения устойчивости винограда к серой гнили. — В кн.: Методические рекомендации по современным методам анализа и эксперимента ° ВНИИ ВиВ "Магарач", Ялта, 1980, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УСТОЙ 61ВОСТИ

ВИНОГРАДА К СЕРОЙ ГНИЛИ (57) Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции растений. Цель изобретеИзобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано в селекции растений.

Цель изобретения — ускорение процесса и повьппение точности определения.

Пример 1 ° Для определения иммунологических свойств винограда используют индикаторные сорта с различным выражением признака — устойчивые, среднеустойчивые и восприимчивые.

По индикаторным сортам строят тарировочную таблицу (шкалу), по которой определяют устойчивость других форм винограда..

2 ния — ускорение процесса и повьппение точности определения. Для определения устойчивости винограда к серой гнили ягоды отделяют от гребней с плодоножкой, дезинфицируют путем погружения в 65Х-ный водный раствор этилового спирта на 4 мин, затем высушивают на воздухе и инфицируют нанесением на каждую ягоду по 0,03 мл споровой суспенэии. Зараженные ягоды помещают о в термостат на б5 ч при 20 С, обычном освещении и влажности воздуха не ниже 90Х. После инкубации ягоды измельчают, центрифугируют и в супернатанте определяют количественное содержание лейкоантоцианов. Формы, содержащие 28 и более мг/л данного вещества, относят к устойчивым, от 18 до 28 к среднеустойчивым, 18 и менее к восприимчивым. 1 з.п. ф-лы.

В качестве индикаторных сортов с ярко выраженной устойчивостью к серой гнили можно испольэовать сорба Каберне Совиньон с черной ягодой и Мцвивани кахури с белой ягодой в период технической зрелости.

Готовят суспензию гриба следующим образом.

Возбудитель болезни высевают в чашки Петри на стерилизованное сусло-агар, содержащее 27 агар-агара, и выращивают 10 дн в термостате при

20 С, обычном освещении и влажности о воздуха не ниже 907., что обеспечивает предварительное приспособление паразита к хозяину. Через 10 дн гриб обра1526613

С ос гави r ель Л. Марч енотова

Редактор О.Головач Техред М.Ходанич Коррекrop М.Васильева

Заказ 7423/2 Тираж 621

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина,101 зует обильный мицелий со спорами, которые собираю и помещаюг в свежеотжагый сок исследуемого растения, образуя споровую суспенэию с таким рас5 четом, чтобы в 0,03 мп ее содержалось от 500 до 700 спор гриба.

Ягоды исследуемых сортов огделяют

or гребней с плодоножкой без нарушения пруинового налета и дезинфицируют путем помещения в 65Х-ный водный раствор этилового спирта на 4 мин, Затем ягоды высушивают на воздухе и инфицируют путем нанесения на каждую ягоду по 0,03 мл споровой суспензии.

Зараженные ягоды помещают в термостат на 65 ч при 20 С, обычном освещении и влажности воздуха не ниже 90Х.

После 65-часовой инкубации ягодыизмельчают с помощью ручного пресса, 20 центрифугируют 15 мин при 3 тыс об/мин и в супернатанте определяют количественное содержание лейкоантоцианов (ЛА). Для этого по 1 мл полученного супернатанта вносят последовательно 25 в две пробирки с 4 мл лейкоантоцианового реакгива (смесь Н-бутилового спирта ч.д.а., концентрированной соляной кислоты ч.д.а. в соотношении

3:1 и в качестве катализатора сернокислое железо из расчета 150 мг/л).

Одна пробирка без кипячения служит контролем, вторую закрывают пробкой и помещают в кипящую водяную баню на 30 мин. Затем охлаждают проточной водой из крана и проводят фотометрирование обоих растворов при длине волны 540 нм против лейкоантоцианового

Ф реактива в кювете с толщиной слоя

1 см. Опыт проводят не менее, чем в 40 двух повторностях. Содержание ЛА рассчитывают по формуле (а-в) 104 мг/л, где а — оптическая плотность раствора после кипячения; в — оптическая плотность раствора без кипячения; 104 — 45 коэффициент пересчета, учитывающий молекулярную экстинцию цианидина. Для сорта Каберне Совиньон содержание ЛА составляет 28,5 мг/л, для Мцвивани кахури 91,4 мг/л °

Пример 2. В качестве индикаторных сортов с ярко выраженной восприимчивостью к патогену используют сорта Пино с черной ягодой и Кумшацкий белый. Исследования проводяг аналогично примеру 1. Для сорта Пино содержание ЛА составляет 18 мг/л, для с сорта Кумшацкий 17,3 мг/л °

Пример 3. В качестве индикаторных сортов со средней степенью устойчивости используют сорта Эзерио с белой и Оджалеши с черной ягодой.

Для сорта Эзерио содержание ЛА сосгавляет 21,7 мг/л, для Оджалеши

22,4 мг/л.

Сорта содержащие ЛА 28 мг/л и более относятся к устойчивым, 18 мг/л и менее — к восприимчивым. Среднеустойчивые занимают промежуточное положение — 18-28 мг /л .

Способ позволяет более чем в два раза сократить время на определение устойчивости винограда к серой гнили и значительно повысить точность оценки.

Формула изобретения

1.Способ определения устойчивости винограда к серой гнили, включающий отделение ягод, дезинфицирование, заражение споровой суспензией, термостатирование и определение показателя, по по которому оцениваегся устойчивость к болезни, отличающийся тем, что, с целью ускорения процесса и повышения точносги определения, после термостатирования ягоды гомогенизируют, отделяют бесклеточный экстракт, в полученный гомогенат добавляют лейкоантоциановый реактив, смесь помещают в термостат и фотометрируют, а в качестве показателя, по которому оценивается устойчивость, используют содержание лейкоантоцианов.

2. Способ по п. 1, о т л и ч а юшийся тем, что при оценки винограда к устойчивым относят формы с содержанием лейкоантоцианов 28 и более, к среднеустойчивым — от 18 до

28, к восприимчивым — 18 и менее мг/л.