Штамм каллусной культуры аrisтоlоснiа маnsнuriеnsis - продуцент аристолохиевых кислот

Авторы патента:

C12N5 - Недифференцированные клетки человека, животных или растений, например клеточные линии; ткани; культивирование или сохранение их; питательные среды для них (размножение растений из тканевых культур A01H 4/00)

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской промышленности. Целью изобретения является новый штамм культуры многолетней лианы (кирказона маньчжурского)ARISTOLOCHIA MANSHURIENSIS ВСКК-ВР N 33 (ЛАБОРАТОРНЫЙ НОМЕР A<SB POS="POST">1</SB>), ОБЛАДАЮЩИЙ СПОСОБНОСТЬЮ К РОСТУ, РАЗМНОЖЕНИЮ И ОДНОВРЕМЕННОМУ СИНТЕЗУ АРИСТОЛОХИЕВЫХ КИСЛОТ. ПОСЛЕ 49 СУТ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ НА АГАРИЗОВАННОЙ СРЕДЕ ВЫХОД СУХОЙ МАССЫ КАЛЛУСОВ С ОДНОЙ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ КОЛБЫ СОСТАВЛЯЕТ 540-750 МГ. СОДЕРЖАНИЕ АРИСТОЛОХИЕВЫХ КИСЛОТ В КУЛЬТУРЕ 0,24-0,60%, ИЗ НИХ АРИСТОЛОХИЕВЫЕ КИСЛОТЫ 1 И 4 СОСТАВЛЯЮТ 0,21-0,54%, А АРИСТОЛОХИЕВЫЕ КИСЛОТЫ Д И ЕЕ Β=D-ГЛЮКОЗИД -0,03-0,15% ОТ СУХОЙ МАССЫ КАЛЛУСОВ. 1 ТАБЛ.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (1I) (51) 5 С 12 N 5/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К А BTOPCKOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

1 (21) 4425856/31 вЂ” 1 3 (22) 12.05.88 (46) 23.03.90. Бюл. h - 11 (71) Биолого-почвенный институт

Дальневосточного отделения AH СССР (72) В.П.Булгаков и Ю.Н.Журавлев (53) 663.15(088.8) (56) Тахтаджян А.Н. Флористические области земли. вЂ” Л., 1978, 247 с.

Phytorhemistry, 1982, ч. 21, У 7, р. 1759-1762. (54) IUTAMM КАЛЛУСНОИ КУЛЬТУРЫ ARISTOLOCHIA MANSHURIENSIS вЂ” ПРОДУЦЕНТ

АРИСТОЛОХИЕBbK КИСПОТ (57) Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской промышленности. Целью

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в медицинской промьппленности.

Целью изобретения является новый штамм каллусной культуры многолетней лианы (кирказона маньчжурского)

Aristo1ochia manshuriensis Kom, обладаннций способностью к росту, размножению и одновременному синтезу аристолохиевых кислот.

Штамм Aristolochia manshuriensis

А получен селекцией каллJcHOH тка1 ни кирказона маньчжурского. Хранится в специализированной коллекции культивируемых клеток высших растеэ ний ВСКК-BP Института физиологии растений имени К.А.Тимирязева под

М 33 и характеризуется следующими признаками.

2 изобретения является новый штамм культуры многолетней лианы (киркаэона маньчжурского) Aristolochia manshuriensis ВСКК-ВР 11 33 (лабораторный номер А1), обладающий способностью к росту, размножению и одновременному .синтезу аристолохиевых кислот. После

49 сут культивирования на агариэованной среде выход сухой массы каллусов с одной культуральной колбы составляет 540-750 мг. Содержание аристолохиевых кислот в культуре

0,24-0,60Х, иэ них аристолохиевые кислоты 1 и 4 составляют 0 21-0 54Х а аристолохиевые кислоты Д и ее PD-глюкозид 0,03-0,15Х от сухой массы каллусов. 1 табл.

1 1орфологические и цитологические признаки. Растущая каллусная культура представляет собой ткань плотной консистенции желто-коричневого цвета. Имеет слабый запах эфирных масел, горьковатый вкус. На разрезе ткань бело-желтого цвета, упругая, часто содержит зоны желтой окраски.

Популяция состоит из клеток меристемного типа овальной формы. Длина клеток 18-48 мкм, ширина 9-24 мкм.

Клетки содержат хорошо раэличимун цитоплазму, при окраске ацетокармином видны ядра размером 6-8 мкм, содержащие интенсивно окрашенные ядрышки и хромоцентры. максимум митотической активости наблюдается на 17-й день культивирования. Количество клеток, X: имеющих 28 хромосом (дипло1551736

440

0,025

0,25

0,82

37,3 идный,набор) 32-40; 24 хромосомы 2226; менее 24-х хромосом 24-28; более

28 хромосом 8-14.

Физиологические признаки. Цикл выращивания характеризуется S-образной кривой с лаг-фазой (до 7 сут), фазой экспоненциального роста (7-21 сут), линейной фазой (21-42 сут), фазой замедления роста (42-49 сут) и стационарной фазой (49-56 сут).

Ростовой индекс культуры при выращивании на агаровой питательной среде за 49 сут роста составляет 19,920,7 для каллусов начальной массой

60 мг, содержание сухого вещества

10 вЂ” 12Х.

Фитохимическая характеристика.

Штамм является продуцентом аристолохиевых кислот вЂ” веществ, обладающих 20 противоопухолевым действием. Суммарное содержание аристолохиевых кислот в культуре составляет 0,24-0,607 от сухой массы. При этом содержание аристолохиевых кислот 1 и 4 составля- 25 ет 75-90Х от общего количества кислот, а содержание аристолохиевой . кислоты Д и ее р-D-гликоэида 25-107..

Пример. В колбы Эрленмейера на 300 мл разливают по 75 мл агариэо- 3р ванной питательной среды при рН 5,6 следующего состава, мг/л:

Нитрат калия 2500

Сульфат аммония 170

Дигидрофосфат калия 170

Хлорид кальция, 2-х води.

Сульфат магния, 7-и води. 370

Борная кислота 6,2

Сульфат марганца, 4-х води, 23,3

Сульфат меди, 5-и води.

Хлорид кобальта, 2-х води.

Сульфат цинка, 7-и води. 8,6

11олибдат натрия, 2-х води, Иодид калия

Сульфат железа, 7-и води. 27,8

Динатриевая соль

ЭДТА, 2-х води.

0,2

Гидрохлорид тиамина

Гидрохлорид пиридоксина

Никотиновая кислота

0 5

0,5

5,0

Гидрохлорид цистеина мезо-Иноэит

Гидролиэат каэеина

6-Бензиламинопурин

Индолилуксусная

6000

Ф и р м у л а и з о б р е т е н и я!

Штамм каллусной культуры Aristolochia manshuriensis ВСКК-ВГ 11 - 33 продуцент аристолохиевых кислот. кислота

Сахароза

Агар

Дистиллированная вода До I л

Колбы со средой стерилизуют при

117 С в течение 20 мин, затем в асепо тических условиях в каждую колбу помещают по три инокулята, которые изолируют из исходного каллуса в виде кубиков со сторонами 4 мм. Начальный вес каждого инокулята 60 мг.

Колбы с культурами инкубируют в темноте при 25+1 С.и относительной влажности воздуха 70+10K в течение

49 сут. Выросшую биомассу высушивают и характеризуют по росту и содержанию аристолохиевых кислот.

После 49 сут культивирования выход сухой массы каллусов с одной культуральной колбы составляет 540750 мг. Содержание аристолохиевых кислот в культуре 0,24-0,60K, иэ них аристолохиевые кислоты I и 4 составляют 0,21-0,547, а аристолохиевые кислоты Д и ее P-D-глюкозид 0,030,15ь от сухой массы каллусов.

Характеристика полученных партий каллусных культур представлены в таблице.

11олученный штамм Aristolochia

manshuriensis ВСКК-HP М 33 пбэволяет при выращивании на одной питательной среде получить одновременно с хорошим ростом высокое содержание аристолохиевых кислот. Содержание аристолохиевых кислот в клетках штамма превышает их содержание в интактном растении в I 3 раза.

1551736

Содержание аристолохиевых кислот, 7 от сухой массы ткани

Партия сырья

Аристоло- Общая хиевая сумма кислоты Д и ее глюАристолохиевые кислоты

1 и 4 козид

Составитель Л.Минеева

Редактор Н.Рогулич Техред М.Дидык Корректор С.Черни

Тираж 483

Подписное

Закаэ 309

ВНИИПИ осударственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-иэдательский комбинат "Патент", r.ужгород, ул. Гагарина, 101

Масса сухой ткани, мг на один культураль ных сосуд

570

0 54

0,45

0,31

0,21

0,32

0,31

0,44

0,06

0,15

0,10

0,04

0,03

0,08

0,04

0,06

0,60

0,55

0 35

0,24

0,40

0,35

0,50

Штамм каллусной культуры аrisтоlоснiа маnsнuriеnsis - продуцент аристолохиевых кислот

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к клеточной и генетической инженерии растений

Способ получения растений-регенерантов ноrdеuм vulgare, устойчивых к токсическому действию ai @ в кислой среде // 1546483

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в сельском хозяйстве, при селекционно-генетических исследованиях

Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus, используемый для получения моноклональных антител к белку е оболочки вирусов комплекса клещевого энцефалита // 1545614

Способ получения гибридных культур грибов // 1544799

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к слиянию протопластов, и может быть использовано в медицине и сельском хозяйстве

Стимулятор эмбриогенеза в культуре растительной ткани // 1544798

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к методам культивирования растительной ткани и может быть использовано для нужд клеточной и генетической инженерии

Штамм культивируемых перевиваемых клеток кожно-мышечной ткани эмбриона кролика, используемый для выделения и накопления вирусов // 1544797

Изобретение относится к ветеринарной вирусологии и представляет собой новый штамм перевиваемых клеток кожно-мышечной ткани эмбриона кролика, используемый для культивирования вирусов

Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus, используемый для получения моноклональных антител к термостабильному о-антигену холерного вибриона серовара огава // 1541254

Изобретение относится к гибридомной технологии и может быть использовано для серологической идентификации возбудителя холеры серовара Огава

Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus мusсulus, используемый для получения моноклональных антител к поверхностному антигену возбудителя туляремии голарктической расы // 1541253

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для серологической идентификации возбудителя туляремии голарктической расы

Способ получения растений-регенерантов риса // 1541252

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к культивированию растительных тканей, и может использоваться в селекции растений

Штамм гибридных культивируемых клеток животного mus musculus, используемый для получения моноклональных антител к поверхностному гликопротеину вирусов комплекса клещевого энцефалита // 1540269

Способ выращивания биомассы женьшеня // 2101934

Штамм перевиваемых клеток человека сем-к, устойчивый к вич- инфекции // 2102477

Способ выращивания растений in vitro // 2102870

Изобретение относится к области сельского хозяйства и биотехнологии, в частности к способам микроклонального размножения растений и безвирусному семеноводству

Питательная среда для культивирования клеток эукариотов и способ получения основы питательной среды - протеолитического гидролизата // 2103360

Изобретение относится к медицинской и ветеринарной биотехнологии и касается усовершенствованного способа получения протеолитического гидролизата отходов переработки рыбы, а также питательной среды на его основе, предназначенной для выращивания клеток эукариотов - продуцентов биологически активных веществ, используемых для производства диагностических и профилактических биологических и медицинских препаратов

Конъюгат на основе анти-jgm-антитела (варианты) и способ снижения секреции jgm антитела лимфоцитами (варианты) // 2105062

Изобретение относится к области иммунологии, в частности к получению и использованию моноклональных антител

Способ получения сухих стерильных питательных сред для культур клеток // 2107724

Изобретение относится к биотехнологии и касается способа получения сухих стерильных питательных сред для культивирования разнообразных культур клеток, широко используемых в различных областях биологии, медицины, клеточной биотехнологии

Способ селекции популяции клеток in vivo // 2111249

Изобретение относится к области биотехнологии, а точнее к способам изменения степени стабильности кариотипа клеток

Способ селекции популяции клеток in vivo // 2111249

Способ получения ростовых протеинов из сывороток крови различных видов животных // 2112799

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при работе с клеточными культурами и в вирусологии