Способ диагностики инфаркта миокарда

 

Изобретение относится к медицине, а именно к области диагностики инфаркта миокарда. Цель изобретения заключается в повышении специфичности диагностики инфаркта миокарда. Сущность изобретения состоит в том, что с помощью иммуноферментного анализа с использованием моноклональных антител против митохондриальной креатинфосфокиназы, определяют ее содержание в сыворотке крови и при величине концентрации фермента свыше 100 нг/мл диагностируют инфаркт миокарда, что позволяет повысить специфичность диагностики инфаркта миокарда, за счет исключения заболеваний, не связанных с сердечно-сосудистой патологией.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (Sl}5 G 0l N 33 53S

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н А ВТОРСНОМЪ С8ИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ,И ОТНЯТИЯМ

ПРИ fHHT СССР (21) 4341793/28-14 (22) 21.10.87 (46) 30.07.90. Ююл. 3 28 (71) Казахский, научно-исследовательский институт кардиологии (72) Т.С. Балмуханов, С.Г. Шуратова и И.Н.Трахт . (53) 612.015(088.8) (56) Лабораторные методы исследования в клинике. М.: Медицина, 1987. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИНФАРКТА

MH0KAPДА (57) Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике инфаркта

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике инфаркта миокарда.

Целью изобретения является повышение специфичности диагностики инфаркта миокарда.

Способ осуществляют следующим образом.

Полученные с помощью гибридомной технологии моноклональные антитела против митохондриальной креатинфосфо киназы (КФКмит) сорбируют на полистироловом планшете и инкубируют с сывороткой крови. пациентов. Содержание КФКмит:определяют по калибровочной кривой с помощью стандартных приемов иммуноферментного анализа (ИФА).

На основании количественного показателя содержания КФКмит в сыворотке крови ставят диагноз о наличии инфаркта миокарда (ИМ) .

„„SU„,,115 21 1, А1

2 миокарда. Цель изобретения заключается в повышении специфичности диагностики инфаркта миокарда. Сущность изобретения состоит в том, что с помощью иммуноферментного анализа с использованием моноклональных антител против мито хондриальной креатинфосфокиназы определяют ее содержание в сыворотке крови, и при величине концентрации фермента свыше 100 нг/мл диагностируют инфракт миокарда, что позволяет повысить специфичность диагностики инфаркта миокарда за счет исключения заболеваний, не связанньи с сердечнососудистой патологией.

Способ иллюстрируется примерами.

Пример .1. В 96-луночные план- Я .шеты из полистирола вносят по 0,3мкг моноклональных антител в 200 мл фосфатно-буферного физиологического раствора (ФБФР) в лунку и выдержи-. вают 18 ч при 4 С, затем раствор сли вают и планшет промывают 4 раза ФБФР, содержащим 0,057 Твин-20 .(ФБФРТ), заливают на 30 мин ФБФРТ, содержащим

0,17 человеческого сывороточного альбумина, после чего планшеты готовы

l к непосредственному тестированию.

Пробы сывороток крови или очищенный препарат КФКмит, используемый для,фЬ построения калибровочной кривой, вно- д сят по 200 мкл. в лунку и инкубируют

l ч при 37 С, после инкубации реакционную смесь сливают и 4 pasa промывают ФБФРТ, после чего в лунки вносят конъюгат (КФКмит, конъюгиро1582131 ванная методом периодатного окисления С пероксидазой хрена) и ннкубнруют 1 ч при 37 С> добавляют индикаторный раствор, в состав которого

5 входит перекись водорода и хромоген— ортофенплендиамин, и определяют интенсивность окраски при длине волны

492 нм. Количество КФКмит в тестиру, емой пробе обратно пропорционально 10 интенсивности окраски. Чувствитель-! ность метода составляет не менее

10 нг/мл.

Для построения калибровочной кривой в лунки вносят сыворотку, полу- 15 ченную от группы здоровых доноров.

: На этом фоне титруется КФКмит таким образом, чтобы охватить диапазон от

1000 до О нг/мл.

Для каждой калибровочной или не- 20 известной пробы рассчитывают В/Bp, где

;  — средняя интенсивность окраски в, пробах, содержащих калибровочные или

;, неизвестные образцы; Bp — средняя интенсивность окраски в пробах, содер-25, жащих 0 нг/мл КФКмит.

Для определения содержания КФКмит в тестируемых пробах строят граФик зависимости В/В от концентрации

30 о

КФКмит в координатах logit-log (ось ординат logit В/В„= ln (/ ), В/Во ь ось абсцисс — логарифмическая. Концентрацию КФКмит в неизвестных пробах определяют на основании значений logit

В/В, на калибровочном графике.

При определении содержания КФКмит в сыворотке крови здоровых доноров и 40 пациентов, перенесших ИМ.,быпи получены результаты, представленные в таблице.

В пробах № 1-5 сыворотки крови здоровых доноров logit = 2,768 + 0,239, 45 в пробах ¹- 6-11 сыворотки крови пациентов, перенесших ИМ эа 24-48 ч до определения, logit = 1,270+0,160, концентрация КФК равняется 7 и 130 нг/мл соответственно, если брать среднее значение, определенное по калибровочному графику. В качестве граничных значений содержания КФКмит у здоровых доноров и пациентов, перенесших ИМ, установлены показатели до 50 н свьппе

100 нг/мл соответственно. При значейиях, близких к граничным, необходимо повторение опыта и привлечение результатов других методов диагностики.

Номер пробы

log i.t

Рх

3,20

2,47

2,77

2,67

2,73

I,33

1,31

1,33

1,27

0,934

I,45

0,025

0,022

0,014

0,007

0,061

0,028

0,034

0,028

0,027

0,035

0,008

2

4

6

8

0,442

0,424

0,433

0,430

0,432

0,364

0,362

0,364

О;359

О, Й5

0,374

П р и м е ч а н и е °  — средняя по четырем параллельным измерениям оптическая плотность, ух — статистиче— ская ошибка средней в/в, logit = 1n

Формула изобретения

Способ диагностики инфаркта миокарда, включающий определение содержания, креатинфосфокиназы в сыворотке крови человека, отличающийся тем, что, с целью повьппения специфичности диагностики, в сыворотке крови определяют содержание митохондриальной креатинфосфокиназы с помощью

П р и и е р 2. Способ определения содержания КФКмит в сыворотке крови осуществляют аналогично примеру I ..

Тестируют сыворотку пациентов с ножевым ранением, желудочным кровотечением, нарушением сердечного ритма, артериальной гипертонией, бронхиальной астмой и при инфаркте миокарда через 72 ч после развития некроза. Во

1 всех случаях содержание КФКмит не от личалось от ее содержания в сыворот ках крови контрольной группы, состав,ленной из здоровых доноров.

Таким образом, повышение специфичности способа диагностики инфаркта миокарда достигается за счет количественного определения именно КФКмит в сыворотке крови человека, тогда как

1 изменения активности других форм креатинфосфокиназы, регистрируемые при диагностике инфаркта миокарда известным способом, могут быть обусловлены, заболев аниями, не свя э анными с сердечно-сосудистой патологией.

5 l 582131

d иммуноферментного анализа с примене- и при концентрации фермента свыше нием моноклональных антител против 100 нг/мл диагностируют, инфаркт миомитохондриальной креатинфосфокиназы карда, Составитель А. Скурат

Редактор А . Маковская Техред Jl.0лийнык Корректор,В.Гирняк

Заказ 2086 Тирах 511 Подписное

РнИИПИ Государственного комитета по изобретениям н открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101