Способ получения иммобилизованного пектофоетидина п10х

 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности способам получения иммобилизованных ферментов, и может быть использовано в пищевой промышленности. Целью изобретения является повышение амилолитической активности целевого продукта. Способ заключается в адсорбционной иммобилизации пектофоетидина П10Х (растворенного в 0,1 М фосфатном буфере с рН 5,0±0,1) на макросетчатом, слабокислотном катионите КБС (сшитый сополимер метилметакрилата и дивинилсульфида). Способ позволяет увеличить амилолитическую активность целевого продукта в 20-25 раз.

.СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

Щ)5 C 12 N 11/00

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

rlPH ГКНТ СССР (21) 4301200/31-13 (22) 25.08.87 (46) 30.08,90,Бюл. N - 32 (71) Кемеровский технологический институт пищевой проюппленности (72) С.И,Хорунжина, А.К.Светлов и С.В.Амосова (53) 577.15 (088,8) (56) Введение в прикладную энзимологию /Под ред. И,В.Березина и К.Иартинека. M.: ИГУ, 1982, с. 63-67, Авторское свидетельство СССР

ll - 702707, кл. С 12 N 11/00, 1979, (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИИМОБИЛИЗОВАННОГО ПЕКТОФОЕТИДИНА П10Х

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к способам получения иммобилизованных ферментов, и может быть использовано в пищевой промышленности, в частности для повышения выхода сока ягод и фруктов.

Цель изобретения — повышение амилолитической активности целевого продукта.

Способ заключается в адсорбционной иммобилизации пектофоетидина

П10Х на макросетчатом, слабокислотном катионите КБС, полученном на основе сшитых сополимеров метилметакри. лата и дивинилсульфида. Адсорбцию пектофоетидина проводят из O,l М фосфатного буфера при рН 5,0 0 1 при концентрации фермента 5-10 мг белка в 1 мп.

В качестве функциональных групп катионит КБС содержит карбоксильные

ÄÄSUÄÄ 1588756 . А1

2 (57) Изобретение относится к биотехнологии, в частности способам получения иммобилиэованнь|х ферментов, и, может быть использовано в пищевой промышленности. Целью изобретения является повышение амилолитической активности целевого продукта. Способ заключается в адсорбционной иммобилизации пектофоетидина П10Х (растворенного в 0,1 M фосфатном буфере с рН 5,0+0,1) на макросетчатом,слабокислотном катионите КБС (сшитый соло"лимер метилметакрилата и дивинилсульфида). Способ позволяет увеличить аьилолитическую активность целевого продукта в 20-25 раз, группы и сульфидную серу. Катионит получают щелочным гидролиэом сополимеров метилметакрилата и ДВС.

При адсорбции фермента на предложенном катионите происходит одновременная очистка от балластных веществ.

Количество иммобилиэованного фермента в расчете на 1 г носителя составляет 750-800,5 мг (54-58 единиц активности) вместо 19,8-23,9 мг (2—

2,5 единиц активности), Пример l. В колбу вместимостью 100 мп вносят 0,1 г катионита

КБС (в пересчете на сухой продукт) и заливают 50 мл водного О,1 М rbocфатного буферного раствора (рН

5+0,1) фермента пектофоетилина

П10Х с концентрацией 5 мг/мл.Сорбцию проводят 24 ч при 20 С в статических о условиях при периодическом перемешивании. Затем гранулы катионита от1588756

Фо р мул а и з о бр е т е ни я

Составитель В.Муронец

Техред Л,Олийнык Корректор Л.Патай

Редактор Н.Киштулинец

Заказ 2516

Тираж 479

Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и .открытиям при ГКНТ СССР

113035, москва, Ж 35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,101 деляют от раствора, промывают водой и анализируют, Сорбционная емкость катионита КБС по пектодюетидину

П10Х 753 мг/г, а по прототипу

24,5 мг/г, Амилолитическая активность

5 иммобилизованного фермента по предлагаемому способу 70,2 ., по прототипу

81 .

Пример 2. Сорбцию проводят по методике примера 1 при 23 С и о концентрации ферментного препарата

7 мг/мл. Сорбционная емкость катионита КБС по пектофоетидину П10Х

750 мг/г, а по прототипу 27,4 мг/г.

Амилолитическая активность иммобилизованного фермента 69%, по прототипу

81%.

Пример 3. В стеклянную колонку высотой 25 мп и диаметром 5 мл загружают 10 г катионита КБС и пропус кают раствор фермента пектофоетидина

П10Х концентрацией 10 мг/Мп.Скорость пропускания раствора фермента 3 1

«+0,1 л/ч. Температура раствора фермен-25 та 25ОС, рН 5+0,1. Раствор пропускают до полного насыщения катионита. Сорбционная емкость катионита КБС по пектофоетидину П10Х 800,5 мг/г, а по прототипу 30,2 мг/г. Амилолитическая активность иммобилизованного фермента по предлагаемому способу 69,8 ., по прототипу 79 ..

Карбоксильный. катионит КБС имеет высокодоступную для фермента макро.сетчатую структуру. Присутствие в структуре катионита сульфидной серы снижает рКа карбоксильных групп до

4-4,5, вместо 8-8 5 для прототипа и существующих традиционных карбоксил. содержащих полимерных сорбентов, 40 что позволяет проводить процесс сорбции при рН 5 Ф О, 1, т. е, в области максимальной. активности фермента пектофоетидина П10Х, что обуславлива- 45 ет высокую сорбционную емкость пред-. лагаемого сорбента по пектойоетидину П10Х, в 30-40 раз превышающую ем= кость сорбента по прототипу.

По сравнению с известным способом фермент с катионита не элюируется известными элюентами (вода, растворы

НС1, NaOH, NaC1, буферные растворы, органические растворители), сохраняет высокую амилолитическую активность (69-71 ) и может быть использован многократно в циклах расщепления углеводов. Вследствие макросетчатой структуры. полимерного каркаса катионита иммобилизованньre молекулы пектофоетидина IIiOX хорошо доступны для крупных органических молекул, белковых веществ и биологических объек

I тов. Иммобилизированный фермент может храниться в дистиллированной воде в течение не менее 5 лет без изменения показателей качества.

Таким образом, использование пред.лагаемого способа позволяет увеличить амилолитическую активность целевого продукта в 20-25 раз (от 2 — 2,5 до

54-57 единиц активности на 1 г носителя) по сравнению с известным способом.

Способ получения иммобилизованного пектофоетидина П10Х, включающий ад"сорбцию фермента, растворенного в

0,1 M фосфатном буфере, на синтетическом катионите и промывание целевого продукта водными растворами для отделения несвязавшегося белка, о т— л и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения амилолитической активности целевого продукта, в качестве синтетического катионита используют макросетчатый, слабокислотный катионит КБС, на основе сшитых сополимероВ метипметакрилата и дивинилсульфида, а пектофоетидин растворяют в буфере с рН 5,0+0,1,