Способ определения билирубина в капиллярной крови

 

Изобретение относится к области биологии и медицины, в частности к способам исследования биохимического состава крови. Цель изобретения - повышение точности способа. Способ состоит в том, что капиллярную кровь разводят изотоническим раствором хлористого натрия в 10 раз и определяют концентрацию билирубина по калибровочной кривой путем прямой фотометрии. Дополнительно определяют относительный объем плазмы и рассчитывают коэффициент по формуле К=0,9/V пл+0,1, где V пл - относительный объем плазмы. Значение концентрации билирубина, определенное по калибровочной кривой, умножают на величину коэффициента. Изобретение повышает точность определения билирубина. 1 табл.

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИН (51)5 0 01 Н 33/72

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГННТ СССР (21) 4358890/30-14 (22) 04,01. 88 (46) 30,09.90, Бюл, 11 36 (71) Белорусский научно-исследовательский институт охраны материнства и детсва (72) А,К. Устинович, В,Ю. Домбровский, В.П. Панферов и В,А,Мазур (3) 6!2,015(088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

Ф 976381, кл. G 01 N 33/48, 1983. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИЛИРУБИНА

В КАПИЛЛ ВЕРНОИ КРОВИ (57) Изобретение .относится к области биологии и медицины, в частности к способам исследования биохимического

Изобретение относится к биологии и медицине, в частности к способам исследования биохимического состава крови, Цель изобретения — повышение точности способа.

Способ осуществляют следующим образом, С помощью калибровочной кривой, построенной по стандартным образцам с различным "îäåðæàíèåì билирубина, разведенным в 10 раз физиологическим раствором хлорида натрия, в исследуемом образце капиллярной крови, разведенном в 10 раэ физиологическим раствором хлорида натрия, определяют содержание билирубина (С,), параллельно определяют коэффициент К в исследуемой крови и с его учетом высчиты2 . состава крови. Цель изобретения - повышение точности способа. Способ состоит в том, что капиллярную кровь разводят изотоническим раствором хлористого натрия в 10 раэ и определяют концентрацию билирубина по калибровочной кривой путем прямой фотометрии.

Дополнительно определяют относительный объем плазмы и рассчитывают коэффициент по формуле K0,9/Ч +0,1, где V — относительный объем плазмы.

Пл

Значение концентрации билирубина, определенное по калибровочной кривой, умножают на величину коэффициента.

Изобретение повышает точность определения билирубина. 1 табл. вают истинное сод ржание билирубина в сыворотке исследуемой крови (С) по формуле: Ж

С=С„ К. Cb

Коэффициент К определяют следующим ф образом. Ql

Пусть взят объем капиллярной крови, равный Х, относительный объем плазмы в котором равен U„. Для разведения пл крови в 10 раз необходимо взять объем физиологического раствора хлорида натрия, равняй 9Х. Поскольку при раз- а ведении капиллярной крови раствором хлорида натрия эритроциты не смешиваются с растворителем и выпадают в осадок, истинный объем жидкой части разведенной крови, т.е. фактически разведенной плазмы, составит 9+7„

Таким образом при десятикратном раз1596255 4" ведении объема Х капиллярной крови

9+7 я ее раззедетая в — раз, При разVe. ведении стандартных растворов бидирубина, используемых для построения калибровочной кривой, физиологическим раствором хлорида натрия в 10 раз истинное разведение объема, равного

X+9X

Х, составит =10. Поскольку разведения плазмы капиллярной крови и стандартных растворов билирубина неоднозначны,,при расчете содержания билирубина в плазме исследуемого об" разца крови (С 1 следует значение концентрации билирубина, полученное по калибровочной кривой (С,1, умцожить на величину соотношения между разведением плазмы исследуемой крови и разведением стандарта, т.е. на велил + Щ

9+V о 9 Ч л

VA, 10 Ча ° 10 Чд !О

= - - +0,1, т.е.

0 9

Vïï

К= - — +0,1, а С=С .(†+0,1).

09 09

Чдл 1 U!!h !

"1икропипетку объемом 0,1 мл промывают гепарином и после прокола копьем кожи пальца пациента набирают в нее до метки 0,1 мп капиллярную кровь, которую сразу же выливают в пробирку с 0,9 мл 0,9% раствора хлорида натрия. Содержимое пробирки тщательно перемешивают, центрифугируют при 3000 об/мин 20 мин и супернатант аккуратно сливают в другую чистую пробирку. Параллельно в тонкий капилляр набирают кровь для определения .величины К. Определяют оптическую плотность супернатанта иа спектрофото метре в кювете с рабочим расстоянием

1 см при двух длинах волн: 450 нм (Е4, ) и 575 нм (Е g>g) Вычитывают разйость оптических плотностей Е 4,!Е > и по калибровочному графику определяют содержание билирубина в пробе (С. ). Высчитывают содержание били рубина в плазме исследуемой крови по формуле

С=C ° К, f где С - содержание билирубина в плазме исследуемой крови;

С вЂ” содержание билирубина в супер ! натанте;

Ю

К вЂ” коэффициент, Для построения калибровочного графика используют готовые наборы

"Билирубин-зталон" фирмы "Лахема" (ЧССР). Из каждого стандартного раствора билирубина, приготовленного согласно инструкции, берут по 0,1 мл, добавляют в пробирку с 0,9 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия, тщательно перемешивают и фотометрируют на спектрофотометре точно так же, как и опытные пробы. По результатам исследования строят калибровоч. ный график, на оси абсцисс которого

: откладывают концентрации стандартных растворов билирубина в мкмоль/л, на оси ординат — разности оптических плотностей Е,! -Е <>< для каждого стандартного раствора билирубина; по соответствующим точкам пересечений вычеркивают калибровочную кривую..

В таблице 1 приведены данные сравнительного анализа определения билирубина в капиллярной крови тремя способами . способом-прототипом, предлагаемым способом; путем определения содержания билирубина непосредственно в плазме капиллярной крови методом прямой фотометрии.

Как свидетельствуют приведенные в таблице данные,,результаты исследо— вания па предлагаемому способу значительно превышают результаты, полученные с помощью способа-прототипа, причем тем в большей степени, чем выше величина К. В то же время они достоверно не отличаются от результатов, полученных при исследовании непосредственно плазмы капиллярной крови.

Пример. Микропипеткамн объемом 0,1 мл, промытыми гепарином, вно-. сили по 0,1 мл три различных образца капиллярной крови и выливали в пробирки, содержащие 0,9 мл 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Содержимое пробирок тщательно перемешивали, пробирки центрифугировали 20 мин при

ЗООО об/мин и супернатанты из каждой пробирки переносили в чистые пробирки.

Параллельно определяли величину К каждого исследуемого образца капилляр0,9 ной крови К= - — +О, 1, Оптическую

Чпл плотность супернатанта исследуемых образцов капкллярной крови определяли на,спектрофотометре в кювете с рабочим расстоянием см при двух длинах волн: 450 нм (Е <,) и 575 нм (Е +> ), против 0,9%-ного раствора хлорида натрия. Высчитывали разность оптичес-.

15962 ких плотностей Е, -Е „, о калибровочному графику определяли содержание билирубина в пробе (С,). Для построения калибровочного графика использовали готовые наборы Билирубин11

5 эталон" фирмы нЛахема" (ЧССР), Для этого иэ каждого стандартного раствора билирубина, изготовленного согласно инструкции, брали по 0,1 мп, добав- lg ляли в пробирку с 0,9 мл 0,9Х-ного раствора хпорида натрия, тщательно перемешивапи и фотометрировали на спектрофотометре точно так же, как и опытные пробы. По результатам исследования строили калибровочный график, на оси абсцисс которого откладывали концентрации стандартных растворов билирубина в мкмоль/л, на оси ординат — разности оптических 20 плОтнОстей Е 4 0 Е -)5 ДЛЯ каждогО стандартного раствора билирубина, по соответствующим точкам пересечений вычерчивали калибровочную кривую.

Содержание билирубина в плазме 25 исследуемой капиллярной крови высчитывают по формуле

С=С, K где С вЂ” содержание билирубина в плазме исследуемой капиллярной 30 крови, мкмоль/л;

С вЂ” содержание билирубина в cyt пернатанте, мкмоль/л;

К вЂ” величина коэффициента, Получены следующие практические результаты.

Образец капиллярной крови 1, Е 4 0

С, (Е < 0-Е ) =О, 103-0,038=0,062 По 4О калибровочной кривой оптической плотности 0,062 соответствует 11,4 мкмоль/л

0,9 билирубииа. Коэфф циент К 60 +0.1=1,6. Следовательно содержание билиру-45

55-.

6 бина в плазме исследуемо капиллярной крови равно

C 11 ° 4 ° 1,6 118,24 мкмоль/л.

Образец капиллярной крови 2.

E4g0 0,255;,Es 0,045ý V n 0,48 калибровочной кривой оптической плотности 0,210 соответствует 38,6 мкмоль/л

0 9 билирубина, Коэффициент К= 0 48 +О,l=

2,0. Следовательно, содержание в плазме исследуемой капиллярной крови равно:

С=33,6 2,0 76,2 мкмоль/л.

Образец капиллярной крови 3.

Е450 =0,365; Е =01052; Чал0133

С (Е4 0-E g) =0,365"0,052=0,313. По калибровочной кривой стандартного раствора билирубина, по соответствую" щим точкам пересечений вычерчивали калибровочную кривую.

Содержание билирубина в плазме исследуемой капиллярной крови высчитывали по формуле С=162,8 мкмоль/л.

Формула изобретения

Способ Опредечения билирубина в капиллярной крови путем прямой фотометрии образца крови, разведенного иэотоническим раствором хпористого натрия, с послепующим определением концентрации билирубина по калибровочной кривой, о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью повышения точности в пробе крови дополнительно определяют относительный объем плазмы, рассчитывают коэффициент по формуле

К вЂ” +0,1, 0,9 ю где К вЂ” коэффициент;

V „„ - относительный объем плазмы, и значение концентрации билирубина, определенное по калибровочной кривой, умножают на величину коэффициента, 1596255

Способ е й@ и й@«ЬФ«йВМ»

Прототип

Уровень значимости (Р), . еВанвМ юю»

Предлагаемый Прямой метрии фотоплазмы

»ЮМНВюВ»

0,41 м»»аееЬаваюю

0,50

П р и м е ч а и и е. Статистическая обработка проведена по результатам исследования пяти параллельных проб каждого образдаь-.

Корректор,С. Шевкун

Подписное

ВЙЙИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35s Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарина, 101

10,8 0,63 17,3+0,94« 18,8+0,98 "«+

7,3+0,44 14р5+0,87 13,8+0,96» "

0,62, 12,7+0,67 31,2+0,96 » 29 > 7+! s 3 "

0,68 26,5+0,94+ 76 9+0,89 "» 78,1+1,04 "

Составитель Н..Гуляева

Редактор Н. Горват Текред М.Дидык ч

Заказ 2906 Тираж 511

Р„.„ „ 0,001

Р „+<0,001

Р,„а.,н. 0,

Р»»io 00!

Р„ «„ 0,001

4, ч" !.

Р.« (0 001

Р „®+<0,001

Р4м-м+ю® в

Р„в„(0,001

Р «» +0 00!

Р„„>О, !