Способ деполимеризации гепарина, сульфомукополисахарида или деоксирибонуклеината натрия

 

СОЮЗ ССВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51) 5 С 08 В 37/10

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К IlATEHTY

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4203197/04 (22) 03.08.87 (31) 304799 (32) 05.08.86 (33) AR (46) 30.03.91. Бвл. 9 12 (71) АХОРКА С.А. (AR) (72) Виктор Батиста Диас, Рикардо Хьюго Доманико (AR) и Фернандо Фусси (rr) (53) 54 7. 995. 17. 07 (088 .8) (56) Заявка ЕР Е» 021067 AI, кл. С 08 В 37/10, 1984. (54) . СПОСОБ ДЕПОЛИМЕРИЗАЦИИ ГЕПАРИНА, СУЛЬФОИУКОПОЛИСАХАРИДА ИЛИ ДЕОКСИРИБОНУКЛЕИНАТА НАТРИЯ (57) Изобретение относится к химии

Изобретение относится к химии полисахаридов, конкретно к способу деполимеризации гепарина, сульфомукополисахарида или деоксирибонуклеината натрия, которые обладают противотромбозным эАФектом.

Целью изобретения является упрощение процесса и обеспечение возможности управления степенью деструкции при сохранении целевым продуктом строения исходного, Согласно предлагаемому способу в качестве деполимеризующего агента используют перекись водорода в присутствии каталитических количеств сульфата железа (II) и процесс проводят при рН 4-6,3, температуре 50-80 С при соотношении исходный продукт (мас. ): ЗОХ-ная пере„„SU„„1639432 А 3

2 полисахаридов, в частности к деполимериэации гепарина, сульАомукополисахарида или деоксирибонуклеината натрия, которые обладают противотромбоэным эдхЬектом. Цель изобретения — упрощение процесса, возможность управления степеньв деструкции при сохранении целевым продуктом строения исходного. Деполимеризацию ведут обработкой перекисью водорода в присутствии каталитических количеств сульФата

Fe(2+) при рН 4-6, 3, температуре 5080 С и в водной среде. Процесс ведут при соотношении исходный продукт (мас . ): ЗОХ-ная и ер екис ь водорода (объемн.), равном 5: 1, с прекращением процесса в нужное время обработкой этанолом при рН 7. 4 табл . кись водорода (объемн. ), равном 5: 1, с прекращением процесса в нужное время обработкой этанолом при pEI 7.

Пример 1. 20 r (1,666 ммоль) гепарина натрия (Американской Аармакопеи) растворяют в 100 мл воды (МВ=

=12000), 4 r катионыой смолы (Amberlite IR — 120, Н AopMa) добавляют

Ф к раствору при перемешивании. Как только рН раствора уменьшается до

4,0-4,5, смолу отфильтровывают и

Аильтрат собирают в колбу с круглым днищем. В процессе нагрева с обратным холодильником его подогревают при

80 С в водяной бане и затем к раствоо ру добавляют при перемеиивании 4,2 мп реагента, полученного путем смешения

4,0 мп 307,-ного Н О> и 0,2 мл раство1639432. 4

-20

Органические сульфаты (в пересчете на S), %

Определение: ра Fe(II) (раствор А=1,5 r FeS04 7Н 0 в 100 мл воды).

Раствор поддерживают при 80 С и фиксируют значения рН. В заранее определенные моменты времени из колбы отбирают по 20 мп пробы. В каждую пробу быстро вводят с одновременным перемеииванием несколько капель 0,1 M

Na0H для того, чтобы повысить рН до

7,0, 5 мл 0,5 M раствора NaC1, 25 мп этанола капельным методом, 3,3 мл

20%-ного раствора NaC1. Осадок собирают, промывают в этаноле, а затем в ацетоне. С вечера до утра его высу-15 шивают в вакуумной печи при 50-60 С и пробы подвергают контролю с помощью вискоэиметрии на определение молекулярного веса (MB) и концентрации (крепости).

Результаты представлены в табл.1.

Пример 2. 20 r гепарина натрия растворяют в 100 мп воды при естественном рН=5,6. Раствор нагревают о до 50 С с обратным холодильником в 25 водяной бане, затем к нему добавляют

4,6 мл реагента, полученного путем смешения 4,0 мп 30%-ного Н О и

0,6 мп раствора A (см. пример 1).

Реакционную смесь выдерживают при

50 С и фиксируют его значение рН.

В заданные периоды времени из колб отбирают по 20 мл пробы. Пробы затем подвергают обработке., аналогичной примеру 1.

Результаты сведены в табл. 2.

Пример 3. 20 r существующей в природе смеси сульфомукополисахарида следующего состава, %:

Кондроитинсульфат (КС) 20

Дерматансульфат (ДС) 50

Гепарансульфат (ГС) 30 (pH=4,0 при 80 С, 30 ррм Fe . II),,имеющей следующие характеристики:

Удельное оптическое 45 вращени е, град

Гексуроновые кислоты после гидролиэа (met Dische (карбазол), % 30

Ге кс оа мин посл е гидролиза (met Elson—

Morgan) ацетилацетон+

+п-диметиламинобензальдегид), % 30

Компоненты (электрофорез на ацетилцеллюлозе, 0,04 M ацетат бария, рН 5,0), %

Хондроитинсульфат 20

Дерматансульфат 50

Гепар анс ул ьфат 30 подвергают обработке, описанной в пример е 1 . Пробы отбирают и фиксируют их значения рН, оценивают истинную вязкость и электрофорез.

Результаты приведены в табл. 3.

Пример 4. 20 г деоксирибонуклеината натрия мпекопитающего растворяют в 100 мп воды при естественном рН=6,3. Растворяют, нагревают с обратным холодильником, после этого осуществляют процедуру, описанную в примере 1. В заданные периоды времени из колбы отбирают пробы. По каждой пробе фиксируют рН, остаточный

Н О и точку опалесценции (добавляя по капле этанол в количестве, необходимом для постоянной опалесценции раствора). Затем к осадку деполимернзованных нуклеинатов добавляют два объема этанола.

Результаты представлены в табл.4.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получать молекулы точно такого же строения, что и исходные, и отличающиеся только MB благодаря че,му появляется воэможность изучения изменений их биологических и фармакологических свойств в зависимости только от МВ; позволяет получать целевой продукт с довольно низким содержанием токсичных тяжелых металлов, такихкак медь, при использовании его отпадает необходимость обработки токсичными хелатными реагентами для удаления загрязнений. Так как реакцию можно легко прекратить в любой заданный момент времени, с помощью предлагаемого способа можно получать однородный хорошо идентифицируемый продукт.

Согласно предлагаемому способу можно получать олигомеры, отличающиеся от исходной молекулы только МВ, которые не обладают характерными для исходных продуктов побочными токсичными эффектами ° Кроме того, основные побочные эффекты, вызываемые исходными молекулами, такие как кровотечение, анафилактические реакции, торможение агрегации кровяных пластинок, могут быть исключены путем уменьшения МВ с помощью предлагаемого способа без

163

Таблица 1

Время, мин рН

Концентрация, 1/мг

Остаточный

Н п,, 4,6

4,3

4;О

3,6

3,5

3,0

12000 135

6000 82

4000 48 (2500 20 (2500 <20 (2500 «20

64

58

54

47

300

Таблица2

Время, мин рН

Концентрация, 1/мг статочный

202. 75,6

5 3

4,9

4,8

4,4

3,4

12000 135

10000 114

8000 109

7000 75

5000 56 (2500 <10

100

90

71

480

Табли ца 3

Время, рН

MHH

Истинная вязкость, дл/г

Электр сфор е э

КС ДС ГС

4,7

4,9

4,7

4,5

4,4

3,8

30/100

30/85

0,459

О, 365

iS0

300

30/75

15/35

15 5

0,225 изменения при этом терапевтических и фармакологических свойств.

Формула изобретения

Способ деполимеризации гепарина, сульфомукополисахарида или деоксирибонуклеината натрия обработкой деполимеризующим arентом, содержащим перекись водорода и соль двухвалентного металла, при повышенной температуре в водной среде, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью упроще9432 6 ния процесса и обеспечения воэможности управления степенью деструкции при сохранении целевым продуктом строения исходного,в качестве деполи5 меризующего агента используют перекись водорода в присутствии каталитических количеств сульфата железа (II) и процесс проводят при рН 4-6,3, температуре 50-80 С при соотнощении иc» ходный продукт (мас. ): ЗОХ-ная перекись водорода (объемн. ), равном 5: 1, . с прекращением процесса в нужное время обработкой этанолом при рН 7.

1639432

Точка опалесценции, об(об

Время, ч рН

Остаточный н о„

Составитель Н.Навышкова

Редактор Л.Веселовская Техред Д.Олийнык Корректор H.Ревская

Чаказ 935 Тираж 314 Подписное

ВН1 61ПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, 3-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101

1

3 .4

5,9

6 5

6,5

6,5

6,5

59

0,500

0,550

0,630

0,680

О, 680