Питательная среда для культивирования гриба аurеоваsidiuм pullulans штамм 8 - продуцента аубазидана

 

Изобретение относится к биотехнологии и касается питательных сред для выращивания грибов - продуцентов аубазидана, который может быть использован в фармакологии , пищевой промышленности, при добыче нефти в качестве стабилизатора суспензий, растворов, а также как пленкоИзобретение относится к биотехнологии и касается питательных сред для выращивания грибов - продуцентов полисахарида аубазидана, который может быть использован в фармакологии, пищевой промышленности, при добыче нефти в качестве стабилизатора суспензий, растворов, а также как пленкообразующее средство. Цель изобретения - повышение качества среды, обеспечение увеличения выхода образующее средство. Цель изобретения - повышение качества среды, обеспечение увеличения выхода аубазидана и снижение себестоимости среды за счет использования непищевого и недефицитного сырья. Изобретение заключается в том, что в питательной среде для культивирования гриба Aureobasidium pullulans штамм 8 - продуцента аубазидана в качестве источника азота используют кукурузный экстракт, а в качестве источника углерода - гидролизованный кукурузный крахмал при следующем соотношении компонентов, мас.%: кукурузный экстракт 0,6-0.7; калий фосфорнокислый однозамещенный 0.1 -0,14; хлористый калий 0,05-0,07; магний сернокислый 0,05-0,07; калий фосфорнокислый двузамещенный 0,1-0,14; сернокислое железо 0,001-0,0014; гидролизованный крахмал (в пересчете на РВ) 4,0-5,0; вода остальное. После 86 ч культивирования количество нативного аубазидана составляет 18,7 г/л, относительная вязкость разбавленной в 10 раз ферментационной массы 3,6 усл.ед. 5 табл. аубазидана, и снижение себестоимости среды за счет использования непищевого и недефицитного сырья. Техническое решение заключается в том, что в питательной среде для культивирования гриба Aureobasidium pullulans штамм 8 - продуцента аубазидана, содержащей источник углерода, азота и минеральные соли, в качестве источника азота используют кукурузный экстракт, а в качестО ел ч -N 00 N

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР с 5 5

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4641651/13 (22) 25.01.89 (46) 30.06.91. Бюл. № 24 (71) Ладыжинское производственное биофармацевтическое объединение "Энзим" и Ленинградский химико-фармацевтический институт (72) Е.Ф. Григорьев, Н.П, Елинов, В.А, Болоховская, М.Ф. Петренко, С.Б. Кравченко, Л.Н. Шинкаренко и А.П. Коваленко (53) 663.15 (088.8) (56} Патент Англии ¹ 1443918, кл. С 12 P 19/10, 1976.

Авторское свидетельство СССР

N 1339129, кл. С 12 Р 19/04, 1986. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДАДЛЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ГРИБА AUREOBASIDIUM PULLUIANS

ШТАММ 8 — ПРОДУЦЕ НТА АУБАЗИДАНА (57) Изобретение относится к биотехнологии и касается питательных сред для выращивания грибов — продуцентов аубазидана, который может быть использован в фармакологии, пищевой промышленности. при добыче нефти в качестве стабилизатора суспензий, растворов, а также как пленкоИзобретение относится к биотехнологии и касается питательных сред для выращивания грибов — продуцентов полисахарида аубазидана, который может быть использован в фармакологии, пищевой промышленности, при добыче нефти в качестве стабилизатора суспензий, растворов, а также как пленкообразующее средство.

Цель изобретения — повышение качества среды, обеспечение увеличения выхода

„„Я „„1659484 А1 (si)s С 12 P 19/04, С 12 N 1/14//

/lt l образующее средство. Цель изобретения— повышение качества среды, обеспечение увеличения выхода аубазидана и снижение себестоимости среды за счет использования непищевого и недефицитного сырья.

Изобретение заключается в том, что в питательной среде для культивирования гриба

AureobasidIum puIluIans штамм 8 — продуцента аубазидана в качестве источника азота используют кукурузный экстракт, а в качестве источника углерода — гидролизованный кукурузный крахмал при следующем соотношении компонентов, мас.7,:, кукурузный экстракт 0,6 — 0,7; калий фосфорнокислый однозамещенный 0.1-0,14; хлористый калий 0,05 — 0,07: магний сернокислый

0,05-0,07: калий фосфорнокислый двузамещенный 0,1-0,14; сернокислое железо

0,001 — 0,0014; гидролизованный крахмал (в пересчете на PB) 4,0 — 5,0; вода остальное, После 86 ч культивирования количество нативного аубазидана составляет 18,7 г/л, относительная вязкость разбавленной в 10 раз ферментационной массы 3,6 усл.ед.

5 табл. аубазидана, и снижение себестоимости среды эа счет использования непищевого и не- д дефицитного сырья.

Техническое решение заключается а том, что в питательной среде для культивирования гриба Aureobasidium pullulans штамм 8 — продуцента аубазидана, содержащей источник углерода, азота и минеральные соли, в качестве источника азота используют кукурузный экстракт. а в качест1659484 ве источника углерода — осахаренный крахмал при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Кукурузный экстракт 0,6 — 0,7

KHzPO4 0,1 — 0,14 5

MgS04 х 7Н20 0,05 — 0,07

Kz HPO< 0,1 — 0,14

KCI 0,05 — 0,07

FeSO4 х 7НгО 0,001 — 0,0014

Гидролизованный 10 крахмал с декстрозным эквивалентом 70—

75% (в пересчете на РВ) 4,0 — 5,0

Вода Остальное 15

Изучали влияние разных источников азота на выход аубазидана при культивировании гриба А, pullulans штамм 8, В табл. 1 показано влияние источников азота на выход аубазидана при культивиро- 20 вании А. pullulans штамм 8, Как видно из данных табл.1 наибольший выход аубазидана наблюдается при исполь-- зовании кукурузного экстракта, В табл.2 представлены данные по 25 влиянию концентрации кукурузного экстракта в среде на биосинтез аубазидана грибом А, puilulans штамм 8.

Из данных табл,2 видно, что оптималь- 30 ная концентрация кукурузного экстракта

О,б — 0,7%.

В табл. 3 представлены данные по влиянию на биосинтез аубазидана разных источников углерода в питательной среде, 35

Результаты табл.3 показывают, что наибольший выход аубаэидана наблюдается в среде, содержащей кукурузный крахмал, В табл.4 показано влияние степени гидролиза и источника крахмала на биосинтез 40 аубазидана и его структуру.

Из данных табл,4 видно, что при использовании кукурузного крахмала с декстрозным эквивалентом, равным 75, удается получить максимальное количество полиса- 45 харида со структурой, близкой полисахариду, полученному на контрольной среде, При использовании картофельного крахмала выход целевого продукта ниже, Кроме того, структура полисахарида (соотношение 1,4- 50 и 1,3-связей) существенно отличается от контрольного варианта.

Увеличение степени гидролиэа крахмала до 95% нецелесообразно, так как при этом не наблюдается существенного увели- 55 чения выхода целевого продукта .

В табл.5 представлены данные по зависимости синтеза аубазидана использованным штаммом от количества внесенного гидролизованного кукурузного крахмала.

Из данных табл.5 видно, что оптимальная концентрация гидролизованного кукурузного крахмала для синтеза аубазидана штаммом 8 А. pullulans составляет 4 — 5%, Пример 1, Питательную среду готовят в ферментере емкостью 1,0 м, коэффициент заполнения 0,75. 75 кг кукурузного крахмала суспендируют в 150 л водопроводной воды. Гидролиз а-амилазой проводят при рН 6,0 — 6,2, из расчета 3,6 ед. на 1 г крахмала в течение 30 мин при 80 С, Среду охлаждают до 45-500С, понижают рН с помощью 10%-ного раствора HzSOd до 4,5 — 4,8, после чего задают глюкоамилазу из расчета 15 ед, на 1 г крахмала, Гидролиз глюкоамилазой осуществляют в течение

2,5 ч при укаэанных параметрах. По окончании гидролиза раствор крахмала передают через УНС (температура 135-138 С, выдержка 5 — 6 мин) в ферментер. Туда же через

УНС закачивают стерильный раствор солей и кукурузного экстракта (режим стерилизации 143-145 С, время выдержки 8-10 мин).

Количество загружаемых компонентов: кукурузный экстракт 5,25 кг (0,7 мас.%);

KzHPO4 0,9 кг (0,12 мас.%); КН2Р04 0,09 кг;

MgS04 7HzO 0,45 кг (0,06 мас.%); KCI

0,45 кг (0,06 мас.%); FeS04 7Hz0 0,09 кг (0,0012 мас.%).

Полученную стерильную смесь углеводов (степень гидролиза крахмала 75%), солей и кукурузного экстракта разбавляют стерильной водопроводной содой до 750 л, вводят стерильную эмульсию пеногасителя (пропино Б-400) в количестве 750 мл (0.1 об.%), доводят значение рН стерильным 10%-ным раствором NaOH до 6,8 — 7,0.

B качестве посевного материала используют 48-часовую культуру А. pullulans штамм

8, выращенную на среде аналогичного состава (содержание осахаренного крахмала

3%). Количество посевного материала 10 л (1:3% к объему ферментационной среды).

Титр 1,8 109 кл/мл.

Выращивают при 24+1 С, режим аэрирования 0,4 об/об среды в 1 мин.

В течение. первых двух суток культивирования происходит понижение рН до 4,5—

4,7, титр клеток продуцента 2,2-10 . Начиная с 36 часа роста наблюдают повышение вязкости культуральной жидкости, к 86 часу роста утилизация углеводов составляет 58,4, количество синтезируемого полисахарида (вместе с клетками продуцента) — 18,7 г/л, относительная вязкость разбавленной в 10 раз ферментационной массы 3,6 усл. ед, (измерение осуществляют на вискоэиметре

Octbalda при 20 С и d = 0.73, 1659484

Пример 2 (известная среда). Питательную среду Чапека-Докса готовят по примеру 1. Вместо кукурузного крахмала используют сахарный песок (37,5 кг). Стерилизацию углеводов, солей проводят по при- 5 меру 1, режим культивирования аналогичен описанному. Титр клеток продуцента после

48 ч культивирования 1 5 ° 10 кл/мл. После

96 ч культивирования утилизация углеводов составляет 58,07, количество синтезируе- 10 мого полисахарида (с клетками) — 12,1 г/л, относительная вязкость 2,5 усл.ед.

Таким образом, при выращивании гриба А.pullulans штамм 8 на предлагаемой питательной среде увеличивается выход це- 15 левого продукта и снижается его себестоимость. точник азота, KHzPO<, MgSO4 7Hz0, KCI, FeS047HzO и воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения качества среды, обеспечения увеличения выхода аубазидана и снижения ее себестоимости за счет использования непищевого и недефицитного сырья, она дополнительно содержит

IQHP04, в качестве источника углерода— гидролизованный крахмал с декстрозным эквивалентом 70 — 75,а в качестве источника азота — кукурузный экстракт при следующем соотношении компонентов, мас.,,ь:

Кукурузный экстракт 0,6 — 0,7

КН2Р04 0,1 — 0,14

КС! 0,05 — 0,07

МЯ$04 7Н20 0,05 — 0,07

КгНР04 0,1 — 0,14

FeSO4 7Hã0 0,001-0,0014

Гидролизованный крахмал с декстрозным эквивалентом 70-75 (в пересчете на PB) 4,0-5,0

Вода Остальное

Питательная среда для культивирования гриба Aureobasidium pullulans штамм

8 — продуцента аубазидана, содержащая углеводы в качестве источника углерода, исТаблица 1

Выхо а баэи ана, г/л

Источник азота

Вязкость куль туральной жидкости, усл.ед.

Концентрация азота, (по сухой массе) без клеток с клетками

Дрожжевой автолизат

Дрожжевой экстракт

Ферментолизат БВК

Гидролиэат казеина

Кукурузный экстракт

Пептон

Среда ЧапекаДокса (контоль

Таблица 2

Формула изобретения

0,3

0,6

0,3

0,6 ,0,3

0,6

0,3

0,6

0,3

0,6

0,3

0,6

0,36

11,6

12,3

11,8

12,7

7,5

7,8

10.8

11,4

12,4

14,8

12,0

13.2

10,5

5,7

6,4

5.8

6,4

2,8

3,0

5,2

5,6

6,9

8,1

6,0

6,5

5,2

2,5

3,0

2,8

3,1

1,1

1,2

1,8

2,0

3,3

4,5

2,6

2.8

2,4

1659484

Таблица 3

Таблица 4

Таблица 5

Составитель Л, Минеева

Техред M,Ìîðãåíòàë Корректор И. Муска

Редактор M. Петрова

Производственно-издательский комбинат "Патент". г, Ужгород, ул. Гагарина, 101

Заказ 1821 Тираж 371 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5