Питательная среда для дифференциации менингококков от непатогенных нейссерий

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается дифференциации нейссерий. Цель изобретения - повышение точности дифференциации, В колбу с 1 л дистиллированной воды вносят следующие ингредиенты, г/л: пептон 9.0-11,0; агар 14,0-16,0; желчь 9,0-11,0; аминопептид 6,0- 8,0; глутаминовая кислота 1,0-1,6; цистин 0,01-0,015; тиаминбромидО,002-0,008; экстракт кормовых дрожжей 2,0-3,0; сахароза 8,0-12,0; хлористый калий 0,07-0,1; сернокислый магний 0,4-0,8; хлористый аммоний 1,0-1,3; трис-буфер 1,6-2,2; бромкрезоловый пурпуровый 0,01-0,03. Среду взбалтывают и кипятят в течение 1-2 мин, стерилизуют при 110°С 30 мин. После стерилизации вносят в охлажденную до 45- 50°С среду 10,2-71,4 г сыворотки крупного рогатого скота. Среда обеспечивает рост непатогенных нейссерий и задерживает рост менингококков. При росте непатогенных нейссерий наблюдается типичный рост, при ферментации сахарозы цвет среды меняется с зеленовато-серого на желтый, при отсутствии ферментации сахарозы окраска среды не изменяется. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (51)5 С 12 а 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4648601/13 (22) 07.02.89 (46) 30.06.91, Бюл. N 24

{71) Казанский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии и

Научно-производственное объединение

"Питательные среды" (72) Г.И. Рузаль, Г.Ф. Гаджиева и M.Á. Алиева (53) 576.8.093.31 (088.8) (56) Приказ М 98 от 29.01.81. О расширении функций Всесоюзного центра менингококковой инфекции. Приложение 2, с. 27. (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ДИФФЕ-::.

РЕНЦИАЦИИ МЕНИНГОКОККОВ ОТ НЕПАТОГЕННЫХ НЕЙССЕРИЙ (57) Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается дифференциации нейссерий. Цель изобретения — повышение точности дифференциации. В колбу с 1 л дистиллированной воды вносят следующие ингредиенты, г/л. пептон 9,0 — 11,0; агар

Изобретение относится к медицинской микробиологии и касается дифференциации нейссерий.

Цель изобретения — повышение точности дифференциации.

Среду готовят следующим образом, В колбу с 1 л дистиллированной воды вносят следующие ингредиенты, г; пептон 9,0 — 11,,0; агар 14,0 — 16,0; желчь 9,0 — 11,0; аминопептид 6,0 — 8,0; глутаминовая кислота 1,0 — 1,6; цистин 0,01 — 0,015; тиаминбромид 0,002 — 0,008; экстракт кормовых дрожжей (ЭКД) 2,0-3,0; сахароза 8,0 — 12,0; хлористый калий 0,07 — 0,1; сернокислый

„„5Ц „„1659485 А1

14,0 — 16,0; желчь 9,0 — 11,0; аминопептид 6,0—

8,0; глутаминовая. кислота 1,0 — 1,6; цистин

0,01-0,015; тиаминбромид 0,002-0,008; экстракт кормовых дрожжей 2,0-3,0; сахароза

8,0-12,0; хлористый калий 0,07-0,1; серно кислый магний 0,4 — 0,8; хлористый аммоний

1,0 — 1,3; трис-буфер 1,6 — 2,2; бромкрезоловый пурпуровый 0,01-0,03. Среду взбалтывают и кипятят в течение 1 — 2 мин, стерилизуют при 110 С 30 мин, После стерилизации вносят в охлажденную до 4550 С среду 10,2-71,4 г сыворотки крупного рогатого скота. Среда обеспечивает рост не. патогенных нейссерий и задерживает рост менингококков. При росте непатогенных нейссерий наблюдается типичный рост, при ферментации сахарозы цвет среды меняется с зеленовато-серого на желтый, при отсутствии ферментации сахарозы окраска среды не изменяется. 2 табл. магний 0,4 — 0,8; хлористый аммоний 1,0—

О

1,3; трис-буфер 1.6 — 2,2; бромкрезоловый пурпуровый 0,01 — 0,03. Среду взбалтывают, Оо доводят до кипения и кипятят в течение 1 — (Л

2 мин, стерилизуют при 110 С 30 мин. После стерилизации вносят в охлажденную до

45 — 50 С среду 10,2 — 71,4 г сыворотки круп- д ного рогатого скота. Среду взбалтывают для полного перемешивания и разливают в стерильные чашки Петри или пробирки.

Пример 1. Для приготовления среды с минимальным содержанием ингредиентов в колбу в 1 л дистиллированной воды вносят следующие ингредиенты, г/л: хлористый ка1659485 лий 0,07; хлористый аммоний 1,0; тиаминбромид 0,002; цистин 0,01; глутаминовая кислота 1,0; трис-буфер 1,6; сернокислый магний 0,4; сахароза 8,0; желчь 9,0; аминопептид 6,0; пептон 9,0; бромкрезоловый пурпуровый 0,01; агар 14,0; экстракт кормовых дрожжей 2,0.

После стерилизации в охлажденную до

45 — 50 С среду вносят 10,2 г сыворотки крупного рогатого скота.

Среды, засеянные нейссериями, инкубируют при 37 С в термостате, Учет результатов проводят через 1824 ч. Менингококки на этой среде не растут. При росте непатогенных нейссерий наблюдается типичный рост, при ферментации сахароэы цвет среды меняется с зеленовато-серого на желтый, При росте В, catarrhalis окраска среды не изменяется, Пример 2. Готовят среду по примеру

1, но ингредиенты берут в следующем количестве, г/л: хлористый калий 0,09; хлористый аммоний 1,25; тиаминбромид 0,005; цистин 0,012; глутаминовая кислота 1,3; трис-буфер 1,9, сернокислый магний 0,6; сахароза 10,0; желчь 10,0; аминопептид 7,0; пептон 10,0, бромкрезоловый пурпуровый

0 02; агар 15,0; экстракт кормовых дрожжей

2,5, После стерилизации и охлаждения в среду вносят 51 r сыворотки крупного рогатого скота, Пример 3. Готовят среду по примеру

1, но ингредиенты берут в следующем количестве, г/л: хлористый калий 0,1; хлористый аммоний 1,3; тиаминбромид 0,008; цистин

0,015; глутаминовая кислота 1,6; трис-буфер

2,2; сернокислый магний 0,8; сахароза 12.0; желчь 11,0; аминопептид 8,0; пептон 11,0; бромкрезоловый пурпуровый 0,03; агар

16,0; экстракт кормовых дрожжей 3,0.

После стерилизации и охлаждения в среду вносят 71,4 г сыворотки крупного рогатого скота.

Среду можно готовить в сухом виде, Пример 4. В шаровую мельницу помещают шары и компоненты среды, взятые в следующем количестве, г: хлористый калий 1,512; хлористый аммоний 21,0; тиаминбромид 0,084; цистин 0,202; глутаминовая кислота 21,84; трис-буфер 31,92; сернокислый магний 10,08; сахароза 168,0; желчь 168,0; аминопептид 117,6; пептон

168,0; бромкрезоловый пурпуровый 0.336; агар-агар 252.0; экстракт кормовых дрожжей 42,0, перемешивают в течение 60 мин.

Навеску среды 59,68 r рстворяют в 1 л дистиллированной воды, доводят до кипения и кипятят 1-2 мин. Среду автоклавируют при 110 С в течение 30 мин.

Формула изобретения

Питательная среда для дифференциации менингококков от непатогенных нейссерий, содержащая источник азота, пептон, 35 агар, желчь, сыворотку крупного рогатого скота, соль соляной кислоты и воду, о т л ич а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения точности дифференциации, она дополнительно содержит тиаминбромид, трис-бу40 фер, сернокислый магний, сахарозу, бромкрезоловый пурпуровый, экстракт кормовых дрожжей, воду, в качестве источника азота — хлористый аммоний, цистин, глутаминовую кислоту и аминопептид, в качестве

45 соли соляной кислоты — хлористый калий при следующем соотношении компонентов, г/л, Хлористый калий 0,07 — 0,1

Хлористый аммоний 1,0 — 1,3

50 Тиаминбромид 0,002 — 0,008

Цистин 0,01 — 0,015

Глутаминовая кислота 1,0 — 1.6

Т рис-буфер 1,6 — 2,2

Сернокислый магний 0,4 — 0,8

55 Сахароза 8,0 — 12,0

Желчь 9,0 — 11,0

Аминопептид 6,0 — 8,0

Пептон 9,0 — 11,0

Бромкреэоловый пурпуровый

0,01 — 0,03

В охлажденную до 45 — 50 С среду вносят 51 rс:ыворотки крупного рогатого скота и разливают в стерильные чашки Петри или пробирки.

5 В табл,1 приведены результаты испытания трех вариантов питательной среды, В табл,2 показаны сравнительные данные известной и предлагаемой сред, которые свидетельствуют, что предлагаемая

10 среда превосходит известную по диференцирующим свойствам, Таким образом. разработана питательная среда для дифференциации нейссерий, отличающаяся от известной тем, что среда

15 сухая, состоит из отечественных ингредиентов, В отличие от известной среды повышены селективные свойства. Разработанная среда не задерживает рост непатогенных нейссерий, присутствие в ней сахарозы и

20 индикатора позволяет уже при первичном посеве исследуемого материала ориентировочно определять также вид непатогенных нейссерий, что ускоряет ход дальнейшего исследования возбудителя.

25 Внедрение разработанной среды позволяет улучшить этнологическую расшифровку менингококковой инфекции, бронхиальной астмы, заболеваний верхних дыхательных путей.

1659485

Агар 14,0 — 16,0

Экстракт кормовых дрожжей 2,0 — 3,0

Сыворотка крупного рогатого скота

Вода

10,2 — 71,4

1л

Таблица 1

Варианты среды

Бактериальные культуры

10

Тип концентрации компонентов

Сплошной рост

min

79

Сплошной рост орс

Сплошной рост

max

Таблица 2 е разложили сахарозу музейные штаммы.

Редактор M. Петрова

Заказ 1821 Тираж 372 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.. 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород. ул.Гагарина, 101

Менингококки

Непатогенные нейссерии

Менингококки

Непатогенные нейссерии

Менингококки

Непатогенные нейссе ии

Среднее число выросших колоний на испытуемой с е е и и посевных азах, мик,кл

Составитель А. Завадская .

Техред М.Моргентал Корректор Т.Малец