Способ определения жизнеспособности неполовозрелых форм цестод

 

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к определению жизнеспособности яиц и личинок гельминтов, а также может использоваться в медицине. Цель изобретения - увеличение продолжительности активного состояния неполовозрелых форм цистод. Указанные формы цестод обрабатывают водным раствором едкого калия или соляной кислоты с последующей обработкой активизирующим раствором. Инкубацию цестод проводят при температуре окружающей среды от 47 до 178°С в течение 5 - 180 с, а затем на них воздействуют инфракрасным излучением электрической лампы в 200 Вт с температурой воздуха 32 - 38°С. Данный способ позволяет продлить активное состояние зародышей до 4,6 - 5,0 мин, увеличить частоту их сокращений в 1,2 - 1,6 раза, обеспечить 100%-ный выход активизированных онкосфер и протосколексов цестод. 2 табл.

союз соВетских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ.

РЕСПУБЛИК (51)э А 61 В 10/00

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ГОЕО ДД ! Ij

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ (О

О 4

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) 1337057 (21) 4635369/15 (22) 10.01,89 (46) 30.07.91,Бюл. М 28 (71) Северо-Кавказский зональный научнОисследовательский ветеринарный институт (72) А.К.Журавец (53) 619:595.121 (088.8) (56) Авторское свидетельство СССР

М 1093324, кл. А 61 В 10/00, 1984.

Авторское свидетельство СССР

ЬЬ 1337057, кл. А 61 В 10/00, 1987 (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ НЕПОЛОВОЗРЕЛЫХ ФОРМ

ЦЕСТОД (57) Изобретение относится к ветеринарии, в частности к определению жизнеспособности яиц и личинок гельминтов, а также моИзобретение относится к ветеринарии, в частности к определениюжизнеспособности яиц и личинок гельминтов, а также может быть использовано в медицине и является дополнительным к основному авт. св. М 1337057.

Цель изобретения — увеличение продолжительности активного состояния неполовозрелых форм цестод.

Пример 1. Для активизации яиц цестод применяют 2 ф>-ный водный раствор соляной кислоты или 0,2ф;ный водный раствор едкого калия и активизирующий раствор, имеющий следующий состав пищеварительных ферментов на дистиллированной воде, г,$: панкреатин медицинский 1,2, сода пищевая 1,3, желчь овечья 20. Растворы рекомендуется использовать не ранее, чем через

2 ч после приготовления, Активность его сохраняется 10 ч при комнатной температу,.ЯХ„, 1666071 А2 жет использоваться в медицине. Цель изобретения — увеличение продолжительности активного состояния неполовозрелых форм цестод. Указанные формы цестод обрабатывают водным раствором едкого калия или соляной кислоты с последующей обработкой активизирующим раствором. Инкубацию цестод проводят при температуре окружающей среды от47до 178 С втечение

5- 180 с, а затем на них воздействуют инфракрасным излучением электрической лампы в 200 Вт с температурой воздуха

32-38 С. Данный способ позволяет продлить активное состояние зародышей до

4,6 — 5,0 мин, увеличить частоту их сокращений в 1,2 — 1,6 раза, обеспечить 100;(, выход активизированных онкосфер и протосколексов цестод. 2 табл. ре и 36 ч при хранении в холодильнике при температуре воздуха 5 — 7 С.

Зрелые членики цестод M. гпмЮсорз с помощью препаровальных игл освобождают от яиц, к яйцам добавляют воду и получаю суспензию яиц цестод, хранящуюся в холодильнике в физрастворе при температуре воздуха 5-7 С.

На предметное стекло с лункой помещают с одной каплей воды 100-150 яиц M.

multiceps, затем вливают 1 каплю 2ф,-ного водного раствора соляной кислоты и ставят в термостат при температуре воздуха 62 С.

Через 2 мин пробу достают и добавляют в нее 6 капель активизирующего раствора и снова помещают в термостат при той же температуре на 2,5 мин. Затем пробу достают, ставят на предметный столик микроскопа и освещают электрической

1666071 лампой 200 Вт, установленной на расстоянии от 5 до 35 см от пробы сроком на 3- 5 мин и смотрят под микроскопом (объектив х 8, окуляр х 15) н .содержание освободившихся от оболочек яйца онкосфер и на их подвижность, В качестве контроля берут пробу с яйцами M, multlceps и подвергают воздействию

27-ным водным раствором соляной кислоты и ставят в термостат при температуре воздуха 62О C продолжительностью на 2 мин. Затем в пробу вливают активиэирую1 щий раствор и инкубируют в термостате при той же температуре воздуха с экспозицией

2,5 мин, после чего исследуют под микроскопом при температуре воздуха 26О С, Результаты отображены в табл.1, из которой видно, что в опытных пробах яиц под воздействием электрической лампы с увеличением температуры воздуха до 34-38 С соответственно увеличились продолжительность активного состояния и число их движений в 1 мин в 1,2-1,6 раза; при

40,5 С показатели интенсивности жизнедеятельности были близки к контрольной пробе и при 46 C интесивность движения ниже, чем в контроле.

Пример 2. Для инкубации протосколексов цестод применяют тот же активизирующий раствор пищеварительных ферментов.

На предметное стекло с лункой вливают с 1 — 2 каплями суспензии протосколексы Е.

grenulosus (40 — 60) экземпляров при комнатнойй температуре воздуха, зародышевые капсулы с протосколексами разрывают с помощью препаровальных игл. Добавляют

5-6 капель активизирующего раствора и помещают на предметное стекло в термостате при 62 С на 1 мин, Затем пробу вынимают из термостата, помещают на предметный столик микроскопа МБС (объектив х 2 и х 4, окуляр х 8), подвергают инфракрасному воздействию электрической лампой 200 Вт на расстояние от пробы протосколексовот5до 25см в продолжении

3 — 4 мин и одновременно ведут подсчет подвижных и вывернутых зародышей.

В качестве контроля берут предметное стекло с лункой с 1 — 2 каплями протосколексов Е, granulosus (40-60 экземпляров) из свежевзятых эхинококковых цист и помеща5 ют в термостат при 62 С на 1 мин, после чего пробу вынимают и смотрят под микроскопом при температуре воздуха 26 С. Определяют количество активизированных протосколексов, в том числе подвижных и

10 вывернутых, Результаты отображения в табл,2, из которой следует, что в опытных пробах протосколексов под воздействием электрической лампой на разных расстояниях от объ15 екта сувеличением температуры воздуха до 32 — 35,5 С соответственно увеличились продолжительность активного состояния зародышей и частота их сокращений в 1,3— l,4; при температуре воздуха 38 С

20 продолжительность их активного состояния близка к контрольной пробе.

Таким образом, иэ табл.1 и 2 следует, что при инфракрасном воздействии электрической лампой 200 Вт на онкосферы и

25 протосколексы цестод в конечной стадии их активизации с температурой воздуха 32—

38 С продолжительность активного состояния и частота сокращений зародышей увеличились в 1,2-1,6 раза, При этом содер30 жание активизированных онкосфер и протосколексов цестод было 1007;-ным.

Данный способ можно использовать для определения максимального срока выживаемости яиц и протосколексов цестод во

35 внешней среде с большей достоверностью в связи с увеличением интенсивности жизнедеятельности активизированных цестод, а также для культивирования их ларвальных и ленточных стадии.

40 Формула изобретения

Способ определения жизнеспособности неполовозрелых форм цестод по авт, св. М 1337057, о т л и ч а к> шийся тем, что, с целью увеличения продолжительно45 сти активного состояния неполовозрелых форм цестод, после инкубации на них воздействуют инфракрасным излучением с температурой воздуха 32 — 38 С.

1666071

Табл,ица 1

Количество активизированных онкосе, Температура воздуха, ОС

Интенсивность активизации онкосфер

Проба

Освобо- Подвиждилось ных оболочек яйца

Число движений онкосфер в мин.

Продолжител ьность движения онкосфер, мин

Табл ица 2

Интенсивность активизации протоско- Количество активилексов зированных tlpoосколексов, Температура воздуха, ОС

Проба

Подвижны.«

В том числе вывернутых

Число движений протосколексов в мин.

Продолжительность движения п ротосколексов. мин

Опытные пробы

3 Зь0,7

4,1 +0,3

4,5 +0,6

3,6 0,5

32

35,5

100

100

43 й5,3

55+6,5

60ь8,5

42Я7

Конт ольная и оба

100

40,0

3,2 +0,5

Составитель Е.Дмитриченко

Редактор М,Недолуженко Техред M.Mîðãåíòàë Корректор Т.Палий

Заказ 2475 Тираж 444 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-З5, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Расстояние от электрической лампы

200 Вт до яиц цестод, см

18

14

РасстояНМе от электрической лампы

200 Вт до протосколексов, см

32,0

34

36

38

40,5

46

Опытные пробы

3,24 1,1

4,0 +0,8

4.5 +0,5

4,8+0,9

3,4Ы,5

1,6 +0,1

З,0 +0,6

10,0,1

16,0+1,9

18+0,8

20 1,5

15 -1,1

10 1,2

13,0 1,1

100

100