Способ определения кардиотонической активности биологически активных соединений
Цель изобретения - упрощение и ускорение способа отбора биологически активных веществ, потенциально обладающих кардиотоническим действием, путем установления наличия комплексообразования их с катионами кальция методом электронной спектрофотометрии. По смещению полос поглощения исследуемого вещества рассчитывают константы устойчивости образующихся комплексов. При значении константы устойчивости более 100 г/моль делают вывод о кардиотонической активности исследуемого соединения. Исследования проводятся IN VITRO в водных растворах с использованием малых количеств веществ в течение 25 - 30 мин на спектрофотометре любой марки. 4 табл.
СОЮЗ СОВЕТСКИХ
СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ
РЕСПУБЛИК (я)з G 01 N 21/17
ГОСУДАРСТВЕН.АЛЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГКНТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4689022/14 (22) 27.03.89 (46) 07.08.91. Бюл. N. 29
P1) Киевский медицинский институт им. акад. А.А.Богомольца (72) И.С.чекман, Н.А.Горчакова, В,А.Самарский, Т.Г.Стерлева и А.И.Гриневич (53) 615.711 (088.8) (56) Экспериментальное (фармакологическое) изучение новых препаратов, предлагаемых для клинических испытаний в качестве кардиотонических средств. Методические рекомендации. — М., 1988. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАРДИОТОНИЧЕСкой АКТИВНОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ
Изобретение относится к медицине, к области молекулярной фармакологии, а именно к первичному отбору (скринингу) биологически активных веществ, потенциально обладающих кардиотойическим действием.
Целью изобретения является упрощение и ускорение способа, Способ осуществляют следующим образом.
Готовят исходные растворы физиологически активного вещества (ФА) молярной концентрации с(Х) - Н0 з моль/л. хлорида кальция c(CaCI2) - I ° IO моль/л и хлорида калия c(KCI) 1 моль/л.
Готовят растворы для записи электронных спектров поглощения в ультрафиолетовой области. Для этого в пять мерных колб емкостью 25 мл вводят следующие объемы реагентов (табл.1). 2 1668921 А1 (57) Цель изобретения — упрощение и ускорение способа отбора биологически активных веществ, потенциально обладающих кардиотоническим действием, путем установления наличия комйлексообразования их с катионами кальция методом электронной спектрофотометрии. По смещению полос поглощения исследуемого вещества рассчитывают константы устойчивости образующихся комплексов. При значении константы устойчивости более 100 гlмоль делают вывод о кардиотонической активности исследуемого соединения. Исследования проводятся In vitro в водных растворах с использованием малых количеств веществ в течение 25-30 мин на спектрофотометре любой марки. 4 табл.
Раствор хлоридэ калия обеспечивает постоянство ионной силы раствора, Раствор хлорида калия доводят до метки после добавления других реагентов. Колбы с раство- О рами оставляют стоять 5 мин. Записывают электронные спектры поглощения растворов в колбах 1-5. Сравнивают величины оптической плотности растворов в колбе 4 с колбами 1 и 2. а в колбе Sc колбами 1 и 3.. Ю
Отклонения величины оптической плотности реагентов QT аддитивной, а также наличие смещения полос поглощения компонентов свидетельствуют о протекании процессов комплексообраэования в системе.
Расчет констант устойчивости образующихся комплексов проводят по методу Накагуры с использованием уравнения
1бб8921
Таблица 1 где С1 - концентрация хлорида кальция в колбе 4;
С2 - концентрация хлорида кальция в колбе 5;
A> - величина оптической плотности раствора в колбе 1;
Ai - величина оптической плотности раствора в колбе 4;
Ag величина оптической плотности рас,твора s колбе 5.
Измерения величин оптической плотности растворов проводят на максимуме поло сы поглощения биологически активного ,, вещества.
Пример 1. Исследование комплексоОбразования .строфантина G с катионами
,кальция, Готовят растворы реагентов указанным образом. Записи электронных спектров поглощения в УФ-области проводят на спект,рофотометре "Спекорд-M-40" с использованием кварцевых кювет толщи ной слоя 1 см. Измерения величин оптической плотности растворов производят на ,полосе поглощения строфантина g npu
А„,--250 нм.
Полученные результаты представлены в табл.2.
Расчет величины константы устойчиво сти комплекса проводят по указанной формуле.
Пример 2. Исследование комплексообразования добутаминэ с катионами кальция.
Готовят растворы исследуемых реаген, тов укаэанным образом, Записи электрон,Hèx спектров поглощения в УФ-области проводят на спектрофотометре "СпекордМ-40" в кварцевых кюветах толщиной слоя
1 см. В качестве аналитической выбирают
noI"ocy поглощения добутамина с Max =
--292,7 нм (на максимуме этой полосы проводят измерения величин оптической плотности растворов).
Полученные результаты представлены в табл.3.
5 Расчет константы устойчивости комплекса добутамина с катионами кальция проводят по указанной формуле, Об образовании этого комплекса свидетельствует отклонение от аддитивности величин
10 оптической г1лотности растворов реагентов (табл,3).
Способ имеет следующие преимущества. Не требуются животные, их наркотиэирование и забой. Не требуется
15 конструирование специальных перфуэионных камер, так как используется спектрофотометр. Время эксперимента уменьшается с
2 ч до 30 мин, учитывая приготовление растворов и расчет констант устойчивости. Не
20 требуется подбора адекватных условий, так как реакция проводится при нормальных условиях (P=IO),3 кПа; Т=298 K). Необходимы малые количества. биологически активного соединения для исследования (до 100 мг).
25 Исследования проводятся в водных растворах.
Граничная величина константы устойчивости составляет 100 n/ìîðü (табл.4).
30 Формула изобретения
Способ определения кардиотонической активности биологически активных соединений,отличающийсятем,что,сцельюускорения и упрощения способа, исследуе35 мое биологически активное соединение добавляют к раствору хлорида кальция, спектрофотометрируют раствор до и после добавления соединения, по оптическим плотностям рассчитывают константу устой40 чивости образующегося комплекса и ее величина больше 100 л/моль свидетельствует о кардиотонической активности исследуемого соединения.
1668921
Таблица 2
Таблица 3
Таблица 4
Лекарственное вецество тойчивости с эффект
t+
Са К д- ° л/моль
620+15
567+11
340+11
140+10
10616
89+5
Отрицательный
78+5
Отрицательный
Отрицательный
41+4
R — органический радикал
Составитель В. Митюшин
Редактор О.Головач Техред М.Моргентал Корректор О. Кундрик
Заказ 2652 Тираж 388 Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва. Ж 35, Раушская наб., 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101
Строфантин С .
Дигоксин
Дофаиин
Теофиллин
Кофеин
ГМК-.3
R-ОСН СН(СН, ) О(СН ) -ЯКС о(с,) И, Папавернн
Константа ус- Наблкдаеиай инотропный
Положительный
Положительный
Положите льный
Положительный
Положительный
