Способ определения бикарбоновых кислот

 

Союз Ссве сних

Социзлистичесних

Респтблин

t !

Кл. 42l, Зсс

89с, 1

Зависимое от авт. свидетельства ¹

Заявлено 17.Õ1.1964 (№ 929425/28-13) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 22.1.1966. Бюллетень ¹ 3

Дата опубликования описания 4.II 1.1966

Л,П1(С 01п

С 13 1К 664.12:543,545(088.8) Комитет по делам изобретений и отирытий при Совете Мииистров

СССР

Авторы изобоетения

И. М. Литвак и Л, В. Загайкевич

Заявитель

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БИКАРБОНОВЬ!Х КИСЛОТ

И ИХ АМИДОВ В ПРОДУКТАХ СВЕКЛОСАХАРНОГО

П РО И 3 ВОДСТВА

Общеизвестны способы количественного определения бикарбоновых кислот и их амидов в продуктах свеклосахарного производства.

Согласно одному из известных способов для определения следующих бикарбоновых кислот и их амидов — аспарагина, глютамина, аспарагиновой, глютаминовой и пирролндонкарбоновой кислот — из отобранной для анализа пробы вначале удаляют соли и сахара, а затем проводят хроматографию с последующими электрофорезом при напряжении

280 в и силе тока 10 ла и фотоэлектроколориметрней. Этот способ длительный, для его проведения требуется сложное оборудование.

Кроме того, вместе с солями и сахарами удаляется часть определяемых веществ, что уменьшает точность анализа.

Предлагаемый способ проще известных, так как он предусматривает определение бикарбоновых солей и их амидов одновременно из одной отобранной для анализа пробы без предварительного удаления солей и сахаров.

Это достигается тем, что электрофорез испытуемого образца проводят при пониженном напряжении и силе тока, после чего электрофореграмму разделяют по стартовой линии и определяют бикарбоновые кислоты и амиды из соответствующей половины бумаги известными приемами. Электрофорез следует вести прн напряжении 180 †2 в и силе тока

0,8 ла.

В качестве навески можно использовать те же фильтраты, что и для определения сахарозы в продуктах свеклосахарного производства.

Предлагаемhlé способ 3;lключается в следующем.

Берут 140 — 160 л кл фнльтрата, полученно10 го при определении сахарозы в жидких продуктах, илн 40 — 60 л кл фпльтрата, полученного прн определении сахарозы в густых продуктах свеклосахарного производства, и наносят микропипеткой при подогрев е теплым

15 воздухом на хроматографнческую бумагу.

Пробу наносят в виде полосы длиной 15 пм и шириной 5 лт.и на поперечную стартовую линию, находящуюся на середине "èñòà. Расстояние между пробами на стартовой линии

2О 15 льи. Затем хроматографическую бумагу с нанесенными несколькими, например семью —восемью, пробами помещают в прибор для электрофореза на 2,5 час при напряжении

180 — 200 в и силе тока 0,8 яа на каждый сан25 тнметр поперечного р",:з-реза бумажной полосы. Через 2,5 час бумагу вынимают из прибора для электрофореза и сушат при 60 С.

Полученную электрофореграмму разрезают на две части по стартовой линии. Половину

Зо бумаги, расположенную ближе к положи178566

Составитель М. Андреева

Текрсд Т. П. Курилко

Редактор Л. А. текина

Корректоры: Г. E. Опарина и Т. Н, Костикова

Заказ 415, Тпвакк 1650 Формат бум. 60)(90/в Объем 0,21 пзд. л. Подписное

ЦНИИПИ Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Центр, пр. Серова, д. 4.

Типография, пр. Сапунова, д. 2 тельному полюсу, опрыскивают раствором шгнгпдрина и проявля.от при 60 С в течение

20 лин. На этой половине бумаги четко проявляготся пятна, соответствующие аспарагиновой и гл1отампповой кислотам.

По nêð".øeri.iû;i пятнам с помощью известного способа фотоэлектроколориметрировапия определяют аспарагиновую и глютаминовую кислоты в нанесенных пробах, а затем и в исходной павеске.

Из второй половины электрофореграммы, расположенной блинке к отрицательному полюсу п пе опрысканной раствором нингидрпна, определяют аспарагип и глютамип. Для этого пз половины электрофореграммы вырезают участки бумаги шириной 15 лл и длиной 30 лл. Количество полосочек бумагll равно числу нанесенных проб. Ширина полосочек 15 гпл уcTBHQBëårr r в связи с тсм, что верхней границей их яьляется стартовая линия, а ни княя находится в 15 Atл от нее.

Из полосочек элюируют 8 н. соляной кислотой аспарагпн и глютамин непосредственно в коническую пробирку. На элюирование, которое длится 4 — 5 лик, требуется 4 лл соляной кнслоты. Конические пробирки закрывают пришлифованными крышками, соединенными с воздушными холодильниками стеклянными трубками длиной 60 — 70 сл и диаметром

0,6 сл. Пробирки помещают пучком на 3 час в кипящую водяную баню или в сушильный шкаф, в верхней части которого имеется отверстие д,чя воздушных холодильников. В течение 3 час при температуре 100 С происходит полный гидролиз аспарагина и глютамина в соответствующие кислоты.

Отсоединив пробирки от холодильников, производят выпаривание до тех пор, пока в ннх не останется приблизительно две капли раствора. Этот остаток наносят в виде одной пробы па хроматографическую бумагу при подогреве теплым воздухом для вторичного электрофореза, который проводят при таких же условиях, как и первый.

После вторичного электрофореза аспарагин и глютамин определяют так же, как аспарагиновую и глютаминовую кислоты. По полу::ейным новым величинам узнают путем пересчета о содержа11ии каждого амида В исходной навеске.

Ппрролндош:.:1рбоновую кислоту определягот по разности между количеством общей глютаминовой кислоты и количеством гидролпзованного глютамина вместе с количеством собствен;о глютаминовой кислоты, опреде.ленной после первого электрофореза. Гидроггга фильтрата для определения общего количества глютаминовой кислоты проводят в то время, когда происходит первый электрофорез и гидролиз амидов. Фильтрат для гидролпза берут в таком же количестве, как и для первого электрофореза. Гидролиз проводят в конических пробирках в присутствии 4 лл

8 и. соляной кислоты при тех же условиях, что и гидролиз амидов.

Остаток после выпаривания гидролизован20 ного фильтрата наносят в виде одной пробы прн подсушивании теплым воздухом на хроматографическую бумагу рядом с пробой гп..гролизованных амидов для вторичного электрофореза. После вторичного электрофо25 реза определяют количество общей глютаминовой кислоты и путем пересчета — количество пирролидонкарбоновой кислоты в исследуемом продукте. Точность способа +5%.

30 Предмет изооретения ! . Способ определения бикарбоновых кислот и их амидов в продуктах свеклосахарного производства при помощи хроматографии электрофорезом и электрофотоколоримет35 рироьанием, от,гичающийся тем, что, с целью упрощения способа путем определения их из одной отобранной пробы без предварительного удаления солей и сахаров, электрофорез проводят при пониженном напряжении и силе

40 гока с последующим разделением электрофореграммы по стартовой линии и определе;шем бнкарооновых кислот и амидов извест ымп приемами.

2. Способ по п. 1, oràè÷àroùèéIñÿ тем, что

45 электрофорез проводят при следующих параметрах тока: напряжение 180 — 200 в и сила тока 0,8 ла.