Способ моделирования постнекротического цирроза печени

 

Изобретение относится к экспериметальной медицине и может найти применение в научно-исследовательских лабораториях при создании модели цирроза печени. Цель изобретения - повышение воспроизводимости при сокращении сроков моделирования Животному натощак с интервалами в 6-7 дней двукратно внутрибоюшинно вводят гелйотрин Доза гелиотрина 6-3 мг/100 г массы тела крысы и 50-30 мг/кг массы тела собаки На 14-15 дни после первичной затравки животному под эфирным наркозом производят лапэротомию Затем в воротную вену печени в течение 1 мин вводят сосудосклерозирующии препарат - тромбовар Дозы 1-2 мг на 100 г массы тела крысы в 1,5-2 5 мл физиологического раствора, 10-20 мг/кг массы тела собаки в 15-25 мл физиологического раствора Забой животных и биопсию печени осуществляют через 6, 8, 12 15 недель со дня первого введения гелиотрина Сроки модепирования сокращаются с 6-12 до 1,5- 3 мес, а воспроизводимость повышается с 15-45 до 59 2-61,9% сл С

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (st)s G 09 В 23/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

2 (21) 4764168/14 (22) 27,11.89 (46) 23.12,91. Бюл, ¹ 47 (71) Ташкентский государственный медицинский институт (72) М.M,Àëèåâ, X.ß.Êàðèìîâ, Э.M.Áàéáåêoва, С.Т.Исмаилов (53) 615.475(088.8) (56) Минкус Т.Г. Экспериментальный цирроз печени. 1974, с.113-121. (54) СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПОСТНЕКРОТИЧЕСКОГО ЦИРРОЗА ПЕЧЕНИ (57) Изобретение относится к экспериметальной медицине и может найти применение в научно-исследовательских лабораториях при создании модели цирроза печени. Цель изобретения — повышение воспроизводимости при сокращении сроИзобретение относится к экспериментальной медицине и может найти применение в научно-исследовательских лабораториях при создании модели цирроза печени, Целью изобретения является повышение воспроизводимости при сокращении сроков моделирования, Способ осуществляется следующим образом.

Животному натощак с интервалом в 6 — 7 дней двукратно внутрибрюшинно вводится гелиотрин в дозе соответственно 5 и 3 мг на

100 г массы тела крысы и 50 — 30 мг/кг массы тела собаки, На 14-15-е дни после первичной затравки животному в условиях острого опыта (наркоз, лапоротомия) в воротную вену печени в течение 1 мин вводится тромбовар в дозе 1-2 мг на 100 г массы тела крысы в 1,5 — 2,5 мл физиологического раствора, и

10 — 20 мг/кг массь, тела собаки в 15 — 25 мл

; ЬУ 1 7ОО577 А1 ков моделирования. Животному натощак с интервалами в 6 — 7 дней двукратно внутрибрюшинно вводят гелиотрин, Доза гелистрина б — 3 мг/100 г массы тела крысы и

50 — 30 мг/кг массы тела собаки. На 14-15 дни после первичной затравки животному под эфирным наркозом производят лапаротомию. Затем в воротную вену печени в течение 1 мин вводят сосудосклероэирующий препарат — тромбовар. Дозы: 1 — 2 мг на

100 r массы тела крысы.в 1,5 — 2,5 мл физиологического раствора, 10-20 мгl кг массы тела собаки в 15 — 25 мл физиологического раствора. Забой животных и биопсию печени осуществляют через 6, 8, 12, 15 недель со дня первого введения гелиотрина. Сроки моделирования сокращаются с б — 12 до 1,53 мес, а воспроизводимость повышается с

15-45 до 59,2 — 61,9%. физиологического раствора. Животные содержатся на стандартном лабораторном вскармливании. Забой животных и биопсию печени осуществляют в сроки 6, 8, 12, 15 ,недель со дня первого введения гелиотрина, Пример 1. Собака "Белка", самка, беспородная, массой 9 кг, 25.VII.89 r. — внутрибрюшинно введено 450 мг гелиотрина, Через 3 ч после введения наблюдалась рвота. К концу первых суток открылся понос, продолжавшийся 2 сут. Животное вялое. безучастное, от пищи отказывается, пьет воду.

Улучшение состояния отмечено на 4-е сутки.

Потеря в массе 1,5 кг.

02.VI II,89 — масса собаки 7.5 кг, повторное введение (внутрибрюшинно) гелиотрина в дозе 225 мг животное перенесло легче.

Также наблюдался понос, продолжавшийся

1 сут. С конца третьих суток собака ест и пьет лучше, более активна.

1700577

09.VIII.89 — масса 7 кг. Под эфирным наркозом с управляемой вентиляцией легких (PO-2) произведена срединная лапаротомия. Печень увеличена, темно-бурового цвета, селезенка не увеличена, Канюлирована брыжжечная вена, давление 80 мм вод.ст., сделана мезентерикопортография, на которой хорошо проконтрастированы внутрипеченочные ветви воротной вены, признаков блокады нет. Катетер продвинут до воротной вены в 15 мл теплового физиологического раствора во внутрипеченочное русло введено 70 мг тромбовара. После введения.тромбовара давление в воротной вене повысилось до 120 мм вод.ст., катетер удален. Произведена краевая биопсия печени (0,5 0,5 см). Внутрибрюшинно введено

100 тыс, ед. пенициллина, брюшная стенка послойно ушита наглухо, йод. Лапаротомию животное перенесло без осложнений, в течение 2 дней наблюдался жидкий стул, потеря в массе 1 кг. Кормление стандартное лабораторное, 26,И И.89 — (33 дня). Под эфирно-кислородным наркозом с управляемой вентиляцией легких (PO-2) произведена срединная лапаротомия с иссечением старого рубца.

Печень увеличена, плотная, края закруглены, по нижней поверхности определяются небольшие узелки (0,5х9,5 см). Печень спаяна с желудком тонкой кишкой. Селезенка увеличена до малого таза, средней плотности. Канюлирована ветвь верхней мезентериальной вены, давление 90 мм вод.ст. На мезентерикопортограмме характерная картина внутрипеченочной блокады портального кровообращения с умеренным коллатеральным.сбросом портальной крови в гастро-эзофагиальную зону. Произведена краевая биопсия печени (0,5% 0,5 см), денервация общей печеночной артерии с перевязкой левой желудочной артерии, резекция 1/2 селезенки, Гемостаз, послой-. но швы на рану, йод.

Морфология печени. Глиссонова капсула резко утолщена, разросшаяся, местами отечная и разрыхлена. Портальные тракты резко расширены, междольковые артерии и вены с зияющим просветом, кровенаполнены, эндотелий набухший, слущен в просвет, Балочная структура полностью отсутствует. Гепатоциты в состоянии .полной дистрофии с пикнотическими ядрами, Синусоиды спавшиеся, Выявляются очаги жировой дистрофии, Местами отмечается формирование ложных долек.

Вывод: хронический активный гепатит с переходом в цирроз.

Пример 2. Крыса белая, беспородная, самец, масса тела 185 г. 14,VII,89 — внутри55 ции, Встречаются желчные тромбы в капиллярах, Вывод: гепатодистрофия с множественным некрозом печеночных клеток. Диструкция паранхимы, Анулярное разрастание

50 брюшинно введено 9,5 мг гелиотрина. В течение суток животное остается вялым, оборонительная реакция отсутствует, плохо ест. Активность восстанавливается с вторых суток, но сохраняется малоподвижность, часто пьет воду, бледнеет радужная оболочка глаз. На 5-е сутки животное активно ест, не отличается от контрольных, Потеря в массе

10 г.

21.VII.89 — внутрибрюшинное введение в арой дозы гелиотрина б мг. Животное стало вялым, шерсть тусклая, оборонительная реакция на выражена. Активно ест на третьи сутки.

27.И!.89 — масса крысы 170 г, животное агрессивное, Под эфирным наркозом произведена срединная лапаротомия, Печень увеличена, плотновата, края закруглены, селезенка не увеличена. Пунктирована воротная вена (давление 145 мм вод,cT.) B 2 мл теплового физраствора введено 3,2 мг тромбовара. После введения давление в воротной вене повысилось до 200 мм вод.ст., гемостаз, брюшная стенка ушита наглухо, йод. Послеоперационное течение гладкое, животнье активно ест с 3-го дня, агрессивно. Операционные швы чистые, заживление первичное. Кормление стандартное лабораторное, 12,Х.89 — (12-я неделя наблюдения). Под эфирным рауш-наркозом произведена лапаротомия. В брюшной полости выпот до

4 — 5 мл, Печень темно-бурого цвета, плотная, бугристая, спаяна с диафрагмой, желудком, петлями кишки. Селезенка увеличена (3,1 г против 0,75 г контроля), плотная, окутана сальником. Мезентериальные сосуды набухшие, извиты. Воротная вена канюлирована, давление 195 мм вод ст

Биопсия печени.

Патоморфология печени, Общая структура печени изменена за счет образования ложных долек различной величины, Между дольками кольцевидное разрастание соединительно-тканных клеток в различных стадиях зрелости. Некоторые дольки окружены обширными кровоизлияниями. Печеночные клетки с эозинофильным уплотнением протоплазмы, границы их не определяются. Ядра полиморфны, встречаются огромные гиперхромные ядра в виде клякс, Большое количество клеток в состоянии некроза с распавшимся ядром на глыбки хроматина.

Единичные крупные с нечеткими контурами ядра гепатоцитов в состоянии вакуолиза1700577

20

30

40

50 соединительной ткани и образование ложных долей (сформированный микромодулярный цирроз печени).

Пример 3. Собака "Рыжик", самец, беспородная, массой 12 кг, 25.Ч! I,89 — внутрибрюшинно введено

600 мг гелиотрина, В течение 2 ч отмечалась рвота. К концу дня — понос с примесью крови. Собака вялая, забилась в угол, от пищи отказывается, воду пьет, Состояние улучшилось на третьи сутки. Потеря в массе 1,5 кг.

2.I/II I.89 — внутрибрюш инно введена вторая доза гелиотрина (330 мг), Животное проявляет некоторую агрессивность, но малоподвижно, рвоты нет. К концу дня отмечен двукратно жидкий стул без примеси крови. Активность восстановилась на 3-и сутки, ест хорошо, 10.И!1,89 г. — масса 10 кг, Под эфирнокислородным наркозом с уравляемой вентиляцией легких (PO-2) произведена срединная лапаротомия. Печень увеличена, плотновата, края острые, селезенка не увеличена. Канюлирована ветвь верхней брыжеечной вены, давление 75 мм вод.ст., введено 10 мл верогрэфина. На мезентерикопортограмме хорошо контрастированы разветвления воротной вены, видна капиллярная фаза заполнения, признаков блокады вортального кровообращения нет.

Катетер продвинут до воротной вены, в 20 мл теплого физраствора во внутрипеченочное русло воротной вены введено 100 мг тромбовара. После введения тромбовара давление в воротной вене составило 155 мм вод.ст, Внутрибрюшинно введено 100 тыс. ед. пенициллина, брюшная стенка послойно ушита наглухо, йод. После операции наблюдался жидкий стул в течение дня. Рана зажила первичным натяжением, собака быстро активизировалась. Уже с третьего дня хорошо ест, не агрессивна. Питание стандартное, лабораторное.

17.Х,89 — (11-я неделя наблюдения). Под эфирно-кислородным наркозом послойно вскрыта брюшная полость по средней линии с иссечением старого рубца. Печень увеличена, плотная, мелкобугристая, спаяна с левой почкой, тонкой кишкой и желудком. Вены желудка расширены, извиты, брыжеечные лимфоузлы резко увеличены.

Произведена краевая биопсия правой доли печени с захватом небольшого узелка. Канюлирована ветвь верхней мезентериэльной вены, давление 105 мм вод.ст., введено

10 мл верографина, сделан снимок. На мезентерикопортогрэмме плохо контрастированы внутрипеченочные ветви правых долей печени, но и слева видны расширенные "обрубки" ветвей воротной вены. Отдельные коллатерали в желудочно-пищеводное сплетение, Патоморфология биоптата печени, Структура печени изменена благодаря разрастанию соединительно-тканных тяжей, перетягивающих паренхиму и образующих ложные дольки различной величины, Имеются дольки с двумя центральными венами или с одной смещенной к периферии, Гепатоциты дискомплексированы, не складываются в балки и трабекулы..Цитоплазма их с очагами грубой зернистой дистрофии, а в единичных гепатоцитах резко вакуолизирована, Ядра резко полиморфны, имеется большое количество крупных гиперхромных ядер с отчетливым ядрышком, Попадаются фигуры делейия ядер и небольшие очаги с

0 безъядерными некробиотическими и некротизированными клетками. Кровенаполнение сосудов слабое.

Вывод: сформулированный микромодулярный цирроз печени. Кольцевидное разрастание соединительной ткани с образованием ложных долек. Белковая дистрофия печеночных клетрк - полиморфизм ядер, некробиоз и некроз клеток.

Воспроизводимость способа моделирования цирроза печени изучена на 100 белых беспородных крысах самцах массой 160200 г и 28 беспородных собаках (11 самок, 17 самцов) массой 9 — 17 кг. При оценке эффективности способа не учтены 3 крысы и 1 собака, погибшие от передозирования наркотического вещества, Из 97 крыс. получивших двукратно гелиотрин (суммарная доза 8 мг на 100 г м.т.) и однократно тромбовар (2 мг/100 r массы тела), погибли 19 животных (19,6%). Из 27 собак, затравленных двукратно гелиотрином (суммарнэя доза 80 мг/кг массы тела) и однократно получивших тромбовар (10 мг/кг массы тела), погибли 7 животных (25,9 ). Забой животных или операционную биопсию печени производили в сроки 6, 8, 12, 15 недель со дня первичной затравки гелиотрином, Формирование цирроза печени начиналось уже с 6-й недели заболевания, когда в 27,7-50 случаев из числа обследованных животных начальные признаки цирротической трансформации, а к исходу 12-й недели во всех сериях опытов наблюдалась морфологическая картина сформирован ного микромодулярного цирроза печени. Общая воспроизводимость способа с учетом животных, погибших в период затравки, состэвилэ 61,9% у крыс и

59,2 у собак, Из числа животных, доведенных до окончания экспериг ен гов, 95 — 100% случаев получен сфор крошенный цирроз печени, 1700577

Формула изобретения

Составитель А. Лычкова

Техред М,Моргентал Корректор Т. Малец

Редактор Н. Рогулич

Заказ 4469 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Ранняя искусственная блокада внутрипеченочного (синусоидального) русла портального кровообращения с помощью сосудосклерозирующего препарата тромбовара на стадии развития острого гепатита, вызванного гепатотоксичным агентом (гелиотрином), ведет к значительному сокращению сроков моделирования цирроза печени (1,5-3 против 6-12 мес по известно,му способу), увеличению его воспроизводи; мости (59,2-61,9 против 15-45 в аналоге) и соблюдению основных этапов развития изучаемого процесса; острый гепатит, его хронизация и цирротическая трансформация.

Способ моделирования постнекротического цирроза печени, включающий введе5 ние гелиотрина экспериментальному животному,отл ича ющийс я тем,что,с целью повышения воспроизводимости при сокращении сроков моделирования, гелиотрин вводят двукратно внутрибрюшинно с

10 интервалом 6 — 7 дней в субтоксических дозах, а затем через 14 — 15 дней во внутрипеченочное русло воротной вены вводят тромбовар в дозе 10-20 мг/кг массы животного.