Способ получения анатоксинвакцины против стафилококкоза птиц
Изобретение относится к микробиологии , в частности к получению анатоксин-вакцины для специфической профилактики стафилококкоза птиц, Цель изобретения - упрощение технологии и повышение активности целевого продукта. Способ заключается в выращивании стафилококков на питательной среде и инактивироаонии их с детоксикацией токсина в анатоксин с помощью формалина. Сущность изобретения заключается о том, что суспензию стафилококков , выделенных от больных стафилококкозом птиц, после выращивания на жидкой питательной среде с 5-7% хлористого натрия и глицерином в течение 7-10 дней до концентрации 5-7 млр.микробных клеток з 1 мл стерилизуют при 85-1 СО°С Б точение 1,0-1,5 ч с детоксикацией экзои эндотоксинов 0,6-0,8%-ным раствором формалина при экспозиции с течение 7-10 дней. Используют аэрозольно. I, л |ХЛ С
СО)ОЗ СОВ ГСКИХ соци.1пистич.:-ских
Р СПУЬ))<ЛК
А1 (5!)5 А 61 К 39/085
ГОСУДАРCTГ<Г) T<1) П О И 3 О Б Р Е Т Е Н И )) ) Л И О т К Р Ы т и Я< )<1 ПРИ ГКНТ СССР ОП) )САНИГ- ИЗОБРЕТЕНИЯ К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4539291/13 (22) 17.01.89 (46) 23.01.92. Бюл. 1 ь 3 (71) Курский сельскохозяйственный институт им. проф. И.И.Иванова (72) A.À.Евгелевский, Н.С.Грязев, Ю.П.Киптилый, Б.П.Плеханов и Е.li, Eàãëåâñêàÿ (53) 576.8.093 8(088 0) (56) Бургасов Н.П. Руководство по вакцинному и сывороточному производству. — M., 1978. Осидэе Д.О. Ветеринарные препараты. — M„1981. Дэагуров С.Г.. Резепова M.È. Справочник по применению бактерийных и влрусных препаратов. — M.: Ыедицина, 1975, (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНАТОКСИНВАКЦИНЫ ПРОТИВ СТАО(1ЛОКОККОЗА ПТИЦ Изобретение относится к микробиологии, 0 частности к методу получения анатоксин-вакцины для специфической профилактики стафилскоккоза птиц. Из.;естены способы получения анатоксинов для профилактики столбняка, стафиhoKoKKîL0é инфекци.1, дифтерии, формолвакцины против диплокскксаой септицемии телят, поросят, сальмонеллеза, ссHованные на деTсксикации токсина и инактивзции бактерий, вирусов формалином (1)j (2). Известен способ получения стафилококко;его энатсксина, предусматр<1в=,ющ<ил выра .:.эн;1е стафилскскков на хаэ )нс„„Я 3, „! 706631 2 (57) Изобретение относится к микробиологии, в частности к получению dHGTci<.GMH-sBKцины для специфической профилактики стафилококкоэа птиц, Цель иэсбретения— упр» цение технологии и псвыш ние активности целевого продукта. Способ заключается в выращивании стафилохоккоа на питательной среде и инактивисовании их с детоксикацией токсина в анатоксин с помощью формалина. Сущность лзсбретения заключается в том, что суспенэл<о стафилококксв, выделенных от больных ста4 илококкоэом птиц, после выращивания на жидкой питательной среде с 5-7; хлористого натрия и глицерином в течение " — 10 дней до концентрации 5 — 7 млр.микробных клеток з 1 мл стерилизуют при 85-1С0 С в течение 1,0 — 1,5 ч с детоксикацией экзо- и эндотоксинов 0,6-0,87,-ным раствором формалина при экспозиции 45-55 С е течение 7-10 дней. Используют аэрозольно, гидролизатнсй среде с добавлением сыворотки крови и установками для подачи стерильной углекислоты, кислорода с последующей детоксикацией токсина и инактивацией стафилококков 0,4-0,6,4 -ным раствором формали:)а (3). Недостатками способа являютс отсутствие стерилизации прогреванием стафилскокков, г<есбхсдимость пода и cTBpHльных газов, длительность детоксикации, слабзя активность препэрата из-эа исп.<льзованi)я только продукта аутолиэа и биосинтеэа стафилскскксв, т,е, экзотскс.1нэ, и его внутрикс. кное приманенле. I!!,; 3ovP." -;" "с-тг ) !P " r- : " ":((кo э пт .)ц)): ., > Г. ;.:)к.",с« .Г;ii. т,".:Г,.,;г - Эр;) ) бот) ). ., Гивног„, - ).елогиз1. Г ги П;,ОСГОГО ll l:., ЛЛС TL".-I:".. Koro .. :, С)вэ tlo ш Га)-;)лов -:т.:, »локо,кс:., эы ы.:. юьцих заСолев".)l .)) У Г)т:.1, 1 t ль и" i,: т.нил —;п1>()) )Гн))е т).х)loлог..л Li повь)ье )Italo активно ти целевого rI "-,дyкT3 СОГл=c)to с )особу 33: л)эчг!Огцс;лусл в вь) ц,.ва):.;, с.-. j илокок.;ов и;. питательно!1 среде, Ii:. ". :- .. :в .Ipсва)illè!) : с дгто);сliкoЦ .Oil TG KCi . t. В Э) . ЭТО Кеtt t I С ПО, .1О)ЦЬ)О (, )Ор)лэлинэ, .",спольэ, ют ст3, ил t(OKKè, выделенные От г)T lö, больных ст филоксккозол), и обло,.э)оц,ие тс:.си; с))ными и плээл)окоаг"» )„ > !Огци. ли с JL,ol 33)ëè, кОтОр .с оырац;",.л, >-, нэ ж))дко ) ср. ц. 0 течение 7-10 дней r)p;t;8-40 и i 5 — 7 > ", л и; робных K00TcK: . лл с посл,.",;"Ов)сй стерилиэацией м .";к,:no„"räí,13)лов при 85 — 100 С в течсн.ле 1 0-1),5 ) и дзтоксикац ".ей токсина 0,6-0,8%-!IL!, Ор. лэлинол; при 15-55"." 3 течение 7 — 10 дней, а готовь)A препарат применяют двукр:.T)to с и .тер-.ало"1 7 — 10 дней путем аэроз льного ргспылсния в течение 40 мин для цы")ят 10-20-дне -ioro возраста Ll3 p3o÷oT3 1 0-1) 2 л энатокснн-вакцины нэ д,.н .-;тичник с обьемом 5000 I". .3 В связи с,стой LDocibto стаф..лококкового токсина K кипячсни)о д:токсикацию токсина 1 Ор:)алинo!.) прссодят при 45 — 55ОС после прсдэ(ритсльной стерилизации микрооргэнлэмпв при 85 — 100 С в l-..÷P))L)е 1,01 . 5 ч дл .". и о л . ) 0 Г ы и н -" .)(т и в д ц и и cT3филОK0 -:коз .1 вь)дслс)3)": г!)доксинд пpli водно-тер..:))ческол) ги„рол()эс культур. Ре. .L)) с Гсрl)л)1 ) ) ° и ст ф )лcKОккоо спо" Обста"ет l сел() I....; ),)ю кол Г)лc:Koý тиксиНЭ i)POT(V\Vid ). )Ы," Сс..,(3)3 !1С 3 К> Ь У))3.!Ь нсй жид.ос-и дО О,(> — 0,7 )лг/л1Л вместо 0,20-0,25 во э "то" ас::оовэ)1,)H и по - ывзсн:.Io б. Оло..;ч".е;(Ой) 3, <. Ивн эст)л преп"..ðàòã. Отr.t IL T(ь)!=-я осо Он))ест: п .roTO0Лс!)»S И =.PC. -;Ь))Ь"i СП;Сг.> ),:. ИМ Н=Н»Я а;:атоксин- -акц. .ны вм(сто т;эд,"ц )О))ного подкожного BHóòpt,Ko>K)toro введения предоторэ(:;ге-. 95-97Я пс)оловья цыплят 10 — 30-дневного "-озрзс э ст зэоолевэния C ). -., l» ) - n: - - . > -..„° П О и; ° ). ? 1, 0 1)О;,пр; ° лт)) о; ãá (-ю.. ли ) ь со::33::." 3., -. .1 с™;.зэтк, О и с" нте-:,,- -:,". ;ую с ос; -< c 5;- хло;.,»Стог -».-.->-() )я, в ".c"-„„во;.; c,."-.:у, ч.-=. ". 1-., r.-:П,,о;, I, .". i o в;,г;, )л с -)0 м1 rs L,:,е::, :):,, (.") .ц)1 О ср:д >OTO)) Oли в- ли эл))),)..; .. o 0 oxс-,у) ..=;х;О7,7 — 7Я;.,» 3::тOKË" В)" О. .," . а, . П " )t" IL)гатс Ь", V)O I; Ль-, ОУ Рз .—,И )Н.)K ШтаМ. СJ стэ, :I, IOKo :v005).эвг(.1 5t.åp140rп)I(11 вblре!!,oÿ), o vo флл) снах. Рост стаф)1ло.((;яков оо всех среда> проходд!-;T (урне в теч ;))))с 5-7 дней: l)3 средах с сзх:1 Г)а;")(ll Основ) Ом прекрэ)цастся, а с гли«с;".! н Ом rIpo o) ;к:) "Tc)I ggo концентрации 10-!» л)лрд. L 1 мл. Реакция культурэльной :;(L .ДКОСТ)Л С ВЗВЕСЬЮ Стаф)1 IOKOKVO0 Г)ОСЛЕ семиднсо))О;о инкуб. рования составляет 0 сред:!X с сахарами 6,2, а с глицерлном — 6.8. П р и и е р 2. Выраженные о тсчсние 10 7 — 10 дней стэфилококки нэ жидкой питэтельной среде подвсргнуты прогреванию при 85-100 С втечение одного часа с последетоксикации токсина о энатоксин при 45— 55"" в течение 7 дней. Перед аэроэольным рэспь)лснием к об)цсмj Обьему стафилококковой анатоксин-вакцины добавлен глицерин, Аэроэольное распыление энаго<син-вакцины проведено двукратно с интервалом 7 дней по 1 л препарата на одну обработку в течение 40 мин. Заболевания цыплят стафилококкоэом не отмечено. Сохранность птицы, оакцинирооэнной стафилококкоэой анатоксин-вакциной, составляет 97% при увеличении привесов на 15%. Однако при ко)лиссионной проверке и убог вырэгценной птицы выявлено 15 голоо 30 с пэткартиной, характерной для стафилококкоза. Пример 3. После семидневного инкубирования стафилококков на мясокээеиногидролизэтной среде с глицерином 35 суспенэио микроорганизмов подвергают стсоиллзации при 100ОС в течение одного часа и детоксикации 0,7;,-ным фо1 )лэлином при 55 С в течение 7 дней. После проверки нэ стерильность. отсутствие аллсргенных и аллергизируюьцих свойств íà морских свинках суспенэию энэтокс))))-оэ::цины используют для доукратного с интервалом 7 дней ээрозольного распылен:.я в тсчснис 40 мин из расчета 1 0 — 1,2 л на птичник с 40 тысячами цыплят 15-дневного возраста. Заболевэел1ость птиц стэфило:<сккоэол) и падеж от него в средне:л состаоляет 50-75 голоо по каждому птичнику. П р и и е р 4, Культивирование стафилококко". проводят нэ жидкой питательной cp-. дс с глицерином о тече))ие 7 дней до к нцсчтрации 5 ) лрд. микробнь)х клеток в 1 мл. Для получс )..я анэтоксин-озкцинь) суспензию стафилоvîêêo0 инактивируют при 85 С о тсчсни 1,5 ч, э затем проводят деТ0 (си«ацию 0,5"- „--) гым рэстооро;л фсрмали-! ;3 и; .1 "С в Tc t.",с 10 15 дуоьцим добавлением формалина до 0,7 ной концентрации формальдегида для ПоСле и,"О ..;.и !<."..-.(е<:<л,((<)е1<-. то-С И I I I O C T b (.: ;, 1, Э т Г (< P < Ä:, ) "i Q R(! ((l (М ).", пилением ргз" дят q ",.-ooefво,;ом с 5,-ным глицери! l(в с<)с, <о«(внии 1;5, Аэроэольное распыленио, )о! Одят в тече-! 1 Е 40 МИН ИЗ РГСЧЕта 1,и j; <;,-;1.Г. (Ий ИСХОДной а)(ато!; !(II-". кцины н:< Один птичник обьемом <,. f. (0 и с 40 т(, г<ч<(ми цыплят 15дневного oosp с1а, Повтор(:у(с обработку ((роводят 4ере3 1 0 дней, 3» бэ ег аl(ие w 0T),ОД Il û IlR < < T DT стдфилококкоза после l(р(;(. . нен.<. I стафилоко к ко во(1 а)(атoкси(4-е,"гк((1 . (. » составл яе r 1,7,. При при)л:»((el ии а1(атоксин-вгкц::.(4ы отрицательного «лияния препарата (е отмечено, цыплята г;.".(Г зляют в се"е нэ 12-16;ь больше по co! Bl .åíию с K0!(Tpoëü14ûìè. П р и м с р 5, Стафилокгкковую культуру выращива(от на жидкой пит.- тельной среде с глицерином в течение 10 д,(ей до 7 млрд. микробных vflplок в 1 мл подвергают стерилизации при 100"С в течснио. одного часа, Для детокс!Il, ц;(и д!Оба вля!oT формалин дО 0,77,-ной конечной концентрации. Детоксикаци(о проводят при 55"С в те.ание 7 дней, После проверки на стер).льность, отсутствие переход:l анатоксина с)(овь в токсин, препарат использован для двукратного с интервалом 10 д((ей азрозольного распыления из рас.el (,5 л на Один птич(.ик обьсмом 5000 гл с 40 тысячами цыплят 20-дневного возраста, перед распыле <ием препарат разводят физраствором с 5";, глицерина в соотношении 1:5. Защитный эффект от стафилококкоза анатоксин-вакцины составляет 97,57,. П р и и е р 6. Для выоэщивэния стафилококков испол,-зуют мясоказаиног (дролизатную ". cI(l(TeTИ loci:y(o среды с глицери((о(-(без г<ода и углекислоты и кислорода. Ст; .;(лококки культивируют при 38 С в течен <о 10 дней, су -ензию сто рилизуют при i""O Ñ в течение одного часа. К инактивиро()энной суспензии стафилококков добавля)от (ор лальде-ид до 0,8, -ной концентр )ц(ll и выдержив,- .от в термостате При 55"С в тече(4ие 7 дней при пер.(одич»ском по!Иешиван1.и. Зато..l проверчют на стерильнэст:. и полноту и(!< ктивации. Анатохсин-закцину ргспь(ляют аэрозольно д".экд!4 с интер)"лом всс .«" ь дней при эхспозици" 40 мин, За О (евэнил гтицы стафилоко ;-.О.:1 I(тече<(.. 2,5 хлес. нз отмечено. Конг:Ол:ное запг.<: ение 60 голов кур (ПО ДЕСЯТЬ 1;Э Ка: »ДС. О и-. <Ч,- СтафИЛОКОККОВ (а РОЗСЛЬНОЕ РаСПИГ(Е(,.лЕ 1: ния и пэ;,=:.-;3 птицы. il p 1;; е о <. Д !(С(»(((11",;г" i(èÿ I; rри гота лен(4 cfe, и; о.<,к .:. о<о э< à-о<.ñ (на 1G 14а с< iнiеlичеeкс.(ep !lе с гR!(
ООRь((c и ста t илг<коккозо(л п»цы. ((!) пятt»!! деl(ü культи:.; - .а )Iцгл накопление бэктсриальной масси ссстлвляет 4;((>-.д. микробных клеток в 1 мл, на седьмой день — 5 л:,лрд. микробных клеток в 1 hln, а I(a десятый день — I млрд.h(:vpoÑI<((x кл=- -О. в 1 мл. Б послед ющие дни,.,чьт!(в!(рогэния концентрац((я ((и;;роорган!(з((оо не увел! (!(ьэется. Автоклавирова);ие при 80 С выращенной ку;1)у!)ы сто,) ;лококхо не о . еспечивает noR>(ó;î инак) ивацию микроорггнизмов, г при режиме автоклгвирс<ван((я 85 С в течение 1,5 ч и стсо1 лиззции 100"C в течение одного (5cQ происходит полная инэкти(ация микроорганизмов и максиь(эг(ь(Ье выделение ток" иков в культуральную жидкость. Получение анатоксин-вакцины проводят с по:ощью О.ИЯ-ного раствора формалина при 50 С в течение 10 дней. Отсутствием токсичных свойств культуральной жидкости прогеряют путем подкожного введения ее белым ((ышам по 0,2 — 0,5 мл и морским свинкам — 0,80 мл. Аэро"-ольну(о обработку проводят в соответствии с примерами 2-6. Пример 8. Посев маточной суспензии штгмма Ят.ацгепь,выделенного от сельскохоэяйственн(4х животных, проводят на мясо казеиногидролизгтной среде с глицерином. На пятый день накопление бактериальной массы составляет 4,5 млрд. микробных клеток в i MR, на седь;-.Ой день — 5,2 млрд. микробных клеток в 1 мл, на десятый день — 7 млрд. микробных кл ток B 1 мл. Получение и применение анатоксина проводят по режиму пр; (леоа 7. Таким образом, преимуществами способа получения анатоксин-ва.:цины против стафилококкоза птиц являются использов".ние мясоказеиногидрол(.затной или синтетической среды с глицср1(но!л без сахаров и подачи стерильной углекислоты, (ермическая и .-,активация с< с(<ензии стафl(лококков, д Tоксиvация тоvсинов фopмэлинок( при 45 — 55ОС и аэрозольно6 распыление препарата. Пит.".Ter ьные средь< без сахаров при повышен)(О)л ре:киме стерилизации Обеспе Чивают Ьыстрь(1(рост стэ<1
Формула изобретения Сnacc ) пол »чс<
Б((РЭ(! -; ЗаН((Е k)fj(ÜTУРЫ Ст, ô.": С< 1 "O!(ГИЭ Л!(;O СР - -Р1»«<(З-<,i«v> П,: (<«--<«1705С31 Состзеитель Г.Сс о;.сàл Т:-"..p ãä ЛЖор;енил Корректор С.Черни Редактор !1Жулла Захзэ 220 Тиром Подоисное ВНЫ. ПИ Госудзрст-: .нно:о к :."..тет-" "о .зо -,:.гснияч и открытиям при ГХНТ СССР 113031., Моск".: ", . .,- .., Ре ;иск.-1л нзб., 4/5 че Г!г 3 .з й;-одстленг." - 1. =- . .лт.;. " i"">, кс, ...,!: .т : ..т";нт, ".. ужГс род, уй.i с . зринс, 4 посладу1оv. -.:i, етокс кзи .-.:> т:;с.",нл фо-.1. валином, о л и ч л ю } ;.,. с т-.".. . ;то, „ целью у,про...ения текноло-.:и и 1 г.ь,ьн:нир Октиености ц i е:АЛОГО про,„ /i; тй i1," g д еь рз щи(3яние я r - y до « .ъеу)г1:ъ» 4 5, r» i! 4 рина, культ;. ру еирзщиезхд s теч;.ние g-)Q > колрнтГ;.;я 5=-7 t "ïðä.vv„" р:,Гних :,;-; -, - 1:зл, стерил лоцию про;-.едят при - ---1 " 1 С е т-е. ениг. — 1 5 ч д р Tg. сикзцию .. ог.." -",линз ри экспозиции 45-Ь5 С з течение г 10 дней.
