Питательная среда для выращивания капсульной формы сибиреязвенного микроба

 

Изобретение относится к микробиологии и касается питательной среды для дифференциальной диагностики сибиреязвенного микроба. Целью изобретения! является упрощение и удешевление питательной среды, р этой цепью солевой раствор в жидкой питательной среде заме- .няется на мочу здорового человека. 1 табл.

СОЮЗ. СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)з С 12 N 1/20

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ ф

60-65

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4799698/13 (22) 05.01;90 (46) 15.02.92. Бюл. М 6 (71) Всесоюзный научно-исследовательский ветеринарный институт (72) Р;Н.Низамов, Н.C.Ñàäûêoâ и Л.С.Саленко (53) 576.8.093.33:576.851.511 (088.8) (56) Колесов С.Г. Питательная среда ГКИ для выявления капсулы сибиреязвенного микроба. Сибирская язва. М.: Колос, 1976, с. 104.

Авторское свидетельство СССР

N 1538508, кл. С 12 N 1/20, 1988.

Большая медицинская энциклопедия.

M,: Советская энциклопедия, 1981; т, 15, с. 481.

Изобретение относится к микробиологии и касается питательной среды для дифференциальной диагностики сибирской язвы.

Известна питательная среда ГКИ для выявления капсулы сибиоеязвенного .мик-. роба, состоящая из 40 g, сыворотки крупного рогатого скота и 60 g раствора Хенкса, К недостаткам известной питательной среды относится то, что она не является оптимальной по Составу, посколькурбеспечивает капсулообразование не более 60-80

Известна также питательная среда.для выращивания капсульной формы сибиреязвенного микроба с использованием.столовой минеральной воды.

Недостатком известной среды является то, что в качестве стимулятора капсулообразования используют пищевой продукт (стоI.

„„ АХ„„1712409 А1

2 (54) ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ КАПСУЛЬНОИ ФОРМЫ СИБИРЕЯЗВЕННОГО МИКРОБА (57) Изобретение относится к микробиологии и касается питательной среды для дифференциальной диагностики сибиреязвенного микроба. Целью изобретения является упрощений и удешевление питательной среды. этой целью солевой раствор в жидкой питательной среде заменяется на мочу здорового человека. 1 табл. ловую минеральную воду), который в экстремальных условиях (в частности, в полевых и особых ситуациях, в отдаленных и южных регионах страны) бывает малодоступ-;. )Я ным.

4 (4 о

Цель изобретения — упрощение и уде- С) шевление питательной среды. : сО

Поставленная цель достигается тем, что среда для выращивания капсульной формы сибиреязвенного микроба и дифференциации возбудителя сибирской язвы,.содержащая сыворотку крупного рогатого скота, взамен столовой минеральной воды содержит свежую мочу человека при следующем соотношении компонентов, об.g:

Сыворотка крупного рогатого скота 35-40

Свежая моча здорового . человека

1712409

Известно, что наиболее оптимальной средой для жизнедеятельности сибиреязвенного микроба является организм челове- ка и животных. Поэтому предлагаемая питательная среда является моделью условий пребывания микроба в естественных условиях, т.е. в организме человека или животного, поскольку содержит те же компоненты (сыворотку крови, соли, аминокислоты, ще- лочность, которые присутствуют в крови и моче)..

Свежевыделенная моча человека имеет слабощелочную реакцию (рН 7,8), является сложным продуктом обмена, веществ, содержит более 150 компонентов органического и неорганического происхождения, г/л: азот 10 — 20; белки 0,02 — 0,07; аминокислоты (1? наименований) 0,02-6,06; соли Са

1,5; Мо 20-40; натрия 0,5 — 13,6; фосфора 1520; хлора 0,01 — 1,0; мальтозы 75; тиамина

5-30. Из аминокислот в моче содержатся, мг/л: аланин 3 — 3,1; аргинин 16 — 60; валин

8 — 70; гистидин 8,3; гликокол 17 — 19; изолейцин 0,3-4,0; лизин 1,5 — 10,5; метионин 0,20,9; треонин 2-5; триптофан 0,5-3,0; тирозин 0,8 — 5,5; фенилаланин 1 — 4,0; цистин

7,0 — 23 0. Иэ приведенного материала видно, что моча человека является естественным химическим раствором, содержащим незаменимые аминокислоты, соли, сахара и витамины, необходимые для нормальной жизнедеятельности сибиреязвенного микроба, которые в производственных условиях приходится готовить по специальной рецептуре (раствор Хенкса, среда Игла и т.д.).

Культивирование сибиреязвенного микроба во всех примерах проводили в колбах емкостью 0,5 л, коэффициент заполнения (К) = 0,5, при 36-38 С, доза посевного материала 5 10 . спор/100 мл, экспозиция инкубации 10-18 ч.

Пример 1. К 35 мл стерильной сыворотки, крупного рогатого скота (кр.рог.ск.) прибавляют 65 мл свежеполученной мочи человека. Среду разливают в колбы по 0,05 л и засевают споровой культурой

Bac. anthracls штамм 11-й вакцины Ценковского из расчета 5 "10 спор/100 мл

5 среды, закрывают резиновыми пробками и культивируют 10 — 18 ч при 36-38 С. По истечении указанного времени стерильно готовят мазки иэ выросшей культуры, окрашивают синькой Леффлера и просматривают в световом микроскопе, используя иммерсионную систему, По наличию и количеству инкапсулированных клеток оценивают степень и характер капсулообразования.

5 Степень капсулообраэования к 18 ч роста в культуральной жидкости 85 M, а титр клеток составил 1,7+0,2 10 /мл (титр

8 клеток определяли методом предельных разведений), 10 Пример 2. Предлагаемая среда(об. ):

38 мл сыворотки кр.рог.ск., 62 мл мочи человека. Условия инкубации как в примере 1.

Степень капсулообразования к 18 ч в культуральной жидкости достигла 92+2, а титр

15 клеток составил 8,4+0,3 10 на 1 мл среды.

40 Формула изобретения

Питательная среда для выращивания капсульной формы сибиреяэвенного микроба, содержащая сыворотку крупного рогато45 ro скота и солевой раствор, о т л и ч а ю щ ая с я тем, что, с целью упрощения и удешевления питательной среды, в качестве солевого раствора она содержит свежую мочу здорового человека при следующем соотно50 шении компонентов, об, :

Сыворотка крупного рогатого скота 35-40

Свежая моча здорового человека

60 — 65

П р и ме р3, Предлагаемая среда(об.о ):

40 мл сыворотки кр.рог.ск., 60,0 мл мочи человека. Условия инкубирования и прове20 дения анализа аналогичны примеру 1. Степень капсулообразования к 18 ч роста в . культуральной жидкости составили 97+3%, а титр клеток составил 2,2й0,1 10 на 1. мл среды.

25 Результаты зависимости капсулообразования Bacillus anthracts от соотношения компонентов среды представлены в таблице.

Таким образом, предлагаемая питатель30 ная среда для культивирования Вас, anthracls имеет по сравнений с известной следующие преимущества: замена пищевого продукта более доступным — продуктом метаболизма человека, который позволяет

35 полностью сохранить диагностическую ценность известной оптимальной дифференциально-диагностической среды и проводить достоверную идентификацию возбудителя.

1712409

Составитель А. Федоров

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор С. Шевкун

Редактор Ю. Середа

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101

Заказ 510 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5