Способ выделения возбудителя сибирской язвы

 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в лабораторной практике для выделения чистой культуры возбудителя сибирской язвы. Цель изобретения - упрощение способа выделения возбудителя сибирской язвы. Способ . заключается в ингибиции роста-посторонней микрофлоры путем обработки исследуемого материала раствором дихлоро-М-(5-нитро-2- фурфурилиден)-4-амино-1,2,4-тризол цинк в концентрации 1-2 г/л. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 С 12 Q 1/04

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4828261/13 (22) 24.05,90 (46) 30.03,92, Бюл, ¹ 12 (71) Киевский государственный медицинский институт и Молдавский государственный университет им. В. И. Ленина (72) В. В. Гылка, T. А. Бурденко, В. И, Цапков и Н. М, Самусь (53) 576,8.093(088.8) (56) Инструкция и методическое указание по лабораторной, клинической диагностике и лечению сибирской язвы у людей. М., 1980, Химико-фармакологический журнал, 1989, N9,,с,,1098 — 1101.

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в лабораторной практике для выделения чистой культуры возбудителя сибирской язвы.

Выделение чистой культуры сибиреязвенного возбудителя из исследуемого материала часто сопряжено с большими трудностями из-за массивного обсеменения

его другими микроорганизмами.

Известен способ выделения сибиреязвенного возбудителя из загрязненного материала по Дольду, заключающийся в насыщении суспензии кристаллами мочевины с последующим прогреванием на водяной бане при 37 С в течение 5-10 мин.

Недостатком этого способа является громоздкость исследования, необходимость использования стерильной посуды, водяной бани, термометра, источника тепла. Часть оставшихся нерастворенными кристаллов мочевины при посеве исследуемого материала на питательную среду способствует угнетению роста сибиреязвенного возбудителя.!

„„5U „„1723130 А1 (54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ВОЗБУДИТЕЛЯ

СИБИРСКОЙ ЯЗВЫ (57) Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в лабораторной практике для выделения чистой культуры возбудителя сибирской язвы. Цель изобретения — упрощение способа выделе ния возбудителя сибирской язвы, Способ . заключается в ингибиции роста-посторонней микрофлоры путем обработки исследуемо о материала растворомдихлоро-N-((5-нитро-2фурфурилиден)-4-эмино- 1.2,4-тризол)цинк в концентрации 1-2 г/л. 2 табл, Кроме того, дополнительные манипуляции с бактериологически загрязненным материалом повышают степень риска для исследователя, а вместе с прогреванием удлиняют время исследования.

Цель изобретения — упрощение выделения возбудителя сибирской язвы.

Поставленная цель достигается тем, что исследуемый материал обрабатывают рас- (л) твором дихлоро-N-((5-нитро-2-фурфурили- — а ден)-4-амино-1,2,4-триазол) цинк e () концентрации 1-2 г/л, Указанное вещество использовалось ранее для синтеза координационных соединений, и

Способ осуществляют, следующим образом.

Нэвеску дихлоро-N-((5-нитро-2-фурфурилиден)-4-амино-1,2,4-триазол цинк растворяют в диметилсульфоксиде иэ расчета

0,5 г на 1 мл и доводят водой или иэотоническим раствором хлорида натрия до концентрации 1 г/л, полученным раствором

1723130 заливают исследуемый материал в соотношении 5:1, время экспозиции от нескольких секунд до 2 м, Раствор может быть использован в течение 2 — 3 мес. Посев производят пипеткой 0,2 мл на чашку Петри с агаром

Хоттингера. Инкубация при 37 С в течение

12 — 24 ч, При наличии в исследуемом материале наряду со спорами бациллы сибирской язвы вегетативных форм других микроорганизмов рост последних ингибируется и растет только В. anthracis.

Таким образом, предлагаемый способ позволяет получить чистую культуру В.

anthracis из материала, загрязненного другими микроорганизмами.

Пример 1. Готовят раздельные взвеси микробов в концентрации 10 млрд/мл (кишечная палочка, стафилококк, протей, сальмонелла) и взвесь сибиреязвенных спор в концентрации 1 млрд/мл. Берут по 1 мл каждой взвеси и смешивают. Добавляют 5кратный объем раствора дихлоро-N-((5-нитро-2-фурфурил иден)-4-амино-1,2,4-триа зол) цинк в концентрации 0,1 г/л; Посев производят в чашки Петри на агар, приготовленный на переваре Хоттингера, по 0,2 мл на каждую чашку. Исследование посевов ripoизводят через 12-24 ч после инкубации их в термостате при 37 С. Растут колонии всех вышеперечисленных микроорганизмов, Пример 2, Взвесь готовят по схеме, описанной в примере 1, добавляют 5-кратный объем раствора дихлоро-N-((5-нитро-2фурфурил иден)-4-а ми но-1,2,4-три а зол) цинк, но в концентрации 1 г/л. При посеве смеси культур и инкубации в течение 12 — 24 ч при 37 С растет только сибиреязвенный возбудитель.

Пример 3. Взвесь готовят по схеме, описанной в примере 1, добавляют 5-крат. ный объем раствора дихлоро-N-((5-нитро-2фурфурилиден)-4-амино-1,2,4-триазол) цинк, но в концентрации 2 г/л. При посеве культур и инкубации в течение 12-24 ч при

37 С растет только сибиреязвенный возбудитель.

Пример 4, Взвесь готовят по схеме, описанной в примере 1, добавляют 5-крат5

50 ный обьем раствора дихлоро-N-((5-нитро-2фурфурилиден)-4-амино-1,2,4-триазол) цинк, но в концентрации 10 г/л. При посеве смеси культур и инкубации в течение 24 ч при 37 С растет только сибиреязвенный возбудитель, но в виде отдельных колоний (в 5 — 10 раз меньше, чем в примере 3).

Пример 5. Взвесь готовят по схеме, описанной в примере 1, но добавляют 5кратный объем раствора дихлоро-N-((5-нитро-2-фурфурилиден)-4-амино-1,2,4-триазол) цинк, но в концентрации 100 г/л. При посеве смеси культур и инкубации в течение 24 ч при 37 С роста микроорганизмов нет.

Как видно иэ приведенных примеров и таблиц 1 и 2 отсутствие роста и гибель вегетативных форм микробов происходит при обработке субстрата 5-кратным объемом раствора дихл оро-N-((5-н итра-2-фурфурил иден)-4-амина-1,2,4-триаэол) цинк в концентрации 1 — 2 г/л. Более высокая. концентрация

10 — 1000 -/л ведет к прекращению роста и гибели как вегетативных форм микробов, так и споровых форм сибиреязвенного возбудителя.

Раствор, содержащий 0,1 г/л дихлороN-((5-н итро-2-фурфурил иден)-4-а мино-1,2,4

-триазол) цинк, не приводит к уничтожению вегетативных форм микробов.

Таким образом, использование предлагаемого способа позволяет получить чистую культуру сибиреязвенного возбудителя; сократить время исследования, количество манипуляций с предлагаемым заразным материалом и расход лабораторной посуды в

2-3; исключает необходимость источника тепла; уменьшает риск заражения персонала; все зто значительно упрощает осуществляемость способа выделения сибиреязвенного возбудителя.

Формула изобретения

Способ выделения возбудителя сибирской язвы путем обработки исследуемого материала химическим соединением, о т л ич а ю шийся тем, что, с целью упрощения способа, исследуемый материал обрабатывают раствором дихлоро-N-((5-нитро-2-фурфурилиден)-4-амино-1,2,4-триазол)цинк в концентрации 1 — 2 г/л.

1723130

Таб ли а 1

Культуры

10 100

Eschrichia coli М-17

Staphylococcus aureus

Wood 46

1О

Таблица 2

Концентрация исследуемого вещества, г/л

Культуры

10

1О

Составитель В. Гылка

Техред M.Ìîðãåíòàë Корректор М.Шароши

Редактор А.Долинич

Заказ 1043 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35. Раушская наб„4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина. 101

Protevs vulgaris

Salmonella typhimurium

Bacillus anthracis

Escherchia colli И-17

Staphylococcus aureus

Wood 46

Protevs vulgaris

Salmonella typhimurium

Bacillus anthracis

Концентрация культур млрд/мл

Концентрация культур млрд/мл

У

Концентрация исследуемого вещества, г/л