Способ диагностики снижения резерва хемотаксиса фагоцитов

 

Изобретение относится к медицине , в частности к клинической иммунологии . Целью изобретения является повышение точности и сокращение времени определения резерва хемотаксиса фагоцитов . Для этого на симметричных участках тела обследуемого формируют два кожных окна, одно из которых облучают излучением гелий-неонового лазера с плотностью мощности излучения 0,64-1,13 мВт/см2 в течение 3 мин. Через 12 ч определяют относительную разницу в числе фагоцитов в облученном и необлученном кожных окнах и при превышении числом фагоцитов в облученном окне числа этих клеток в необлученном на 75% и менее диагностируют снижение резерва хемотаксиса Фагоцитов. Способ прост, его точность выше, чем у известных способов , более чем на 70%, а время его выполнения в 6 раз меньше.1 з.п.. С

СОЮЗ СОВЕТСНИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (щу С 01 И 33/48

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Н A BTOPCHOMY СВИДЕТЕЛЬСТВУ

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРИГИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР (21) 4659033/14 (22) 06.03.89 .(46) 07.05.92. Бюл. Р 17 (71) Владивостокский государственный медицинский институт (72) А.Я.Осин, А.И.Ицкович, И.В.Маковецкая и Т.Д.Осина (53) 616.07 (088.8) (56) Маянский Д.Н. и -др. Комплексная оценка функций фагоцитов при воспалительных заболеваниях: Методические рекомендации. Новосибирск, 1985, с. 3-9. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ СНИЖЕНИЯ РЕЗЕРВА ХЕМОТАКСИСА ФАГОЦИТОВ (57) Изобретение относится к медицине, в частности к клинической иммунологии. Целью изобретения является поИзобретение относится к медицине, в частности к клинической иммунологии, и может быть использовано для определения резерва хемотаксиса фагоцитов.

Целью изобретения является повьппение точности и сокращение времени выполнения способа.

Способ осуществляют следующим образом.

В области средней трети внутренней поверхности обоих предплечий после предварительной обработки этиловым спиртом (96 ) с помощью ланцета остоб рожно удаляют участок эпидермиса размером ЗМ мм. На одной конечности кожное окно" оставляют интактным

„,SU„„1 32271 А1 вьппение точности и сокращение времени определения резерва хемотаксиса фагоцитов. Для этого на симметричных участках тела обследуемого формируют два кожных окна", одно из которых облучают излучением гелий-неонового лазера с плотностью мощности излучения 0,64-1,13 мВт/см в течение

3 мин. Через 12 ч определяют относительную разницу в числе фагоцитов в облученном и необлученном кожных "окнах" и при превьппении числом фагоцитов в облученном "окне числа этих клеток в необлученном на 757 и менее диагностируют снижение резерва хемотаксиса фагоцитов. Способ прост, его точность выше, чем у известных способов, более чем на ?ОЖ, а время его выполнения в 6 раз меньше.1 з.п .ф-лы. (спонтанный тест. миграции клеток), а (6Р на другой конечности кожное "окно" Я однократно облучают низкоинтенсивным (Я гелий-неоновым лазером, (стимулирован- а Я ный тест миграции клеток). При этом плотность потока мощности (ППМ) 0,641,13 мВт/см и экспозиция воздействия составляет 3 мин. Оба кожных "окна" покрывают обезжиренными и стерилизованными предметными стеклами размером ф», 2,5х2,5 см и фиксируют к конечности лейкопластырем. Смену предметных стекол в опытной и контрольной асентической воспалительной реакции производят через 3 и l2 ч от ее начала.

Полученные цитологические препараты

1732271

4 фиксируют в смеси Никифорова в течение 1О мин, промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и окрашивают по методу РомановскогоГимзы. В полученных препаратах прово5 дят дифференцирование и подсчет клеток с помощью светового микроскопа при увелпчении 7 90. Для количественного определения содержания нейтрофи- 10 лов и макрофагов просматривают по

1О полей зрения в каждом препарате, подсчи гывают их сумму и вычисляют; среднее содержание клеток в 1 поле зрения (Иммунологические методы./Под 15 ред. Г.Фримеля. Пер.. с нем. А.П.Тарасова. — И., Медицина, 1987 — с. 33,5).

Показатели резерва хемотаксиса нейтрофилов (PXH) и макро@агов (РХИ) вычисляют по следующим формулам:

ll о — Нк Il -Ик

РХН = - — ° 100%, РХИ =- --о — —

Но Mî

М 100%, где Н g и М o — среднее содержание нейтрофилов и макрофагов в опыте (в стимулированном тесте), Н„ и И„среднее количество нейтрофилов н мак- рофагов в 1 поле зрения в контроле (в спонтанном тесте). Формулы определения РХН и РХМ раэработанына принци- пах математической пропорции, в кото- 30 рой количество клеток в стимулированном тесте (Но или И, ) принимается за

100%, а разница в стимулированном и спонтанном тестах (Н -Н < или И -И )

0 о К является искомой величиной. По величине РХН через 3 ч и РХИ через 12 ч судят о резервных возможностях нейтрофилов (нейтрофильная фаза хемотаксиса) и макрофагов {макрофагальная фаза хемотаксиса) . При.показателях 40 резерва хемотаксиса фагоцитов в пределах 76-100Х устанавливают нормальный резерв, при показателях 51-75Xнезначительно сниженный, 26-50X— умеренно сниженный и 0-25X - резко 45 сниженный резерв хемотаксиса клеток.

Пример 1. Больной К., 12 лет (история болезни Р 438). Диагноз: острый бронхит. На 7-й день лечения в связи с ухудшением"состояния ребен- 50 ка было проведено исследование резерва хемотаксиса фагоцитов. С этой целью после предварительной дезинфекции кожи на обоих предплечьях (в области средней тРети) одномоментно сделаны кожные "окна" размером ЗА5 мм скарификационным способом. Одно кожное

"окно" служило дпя спонтанного теста, а другое кожное "окно", — дпя стимулиэованного теста. В качестве стимулятора использовано ниэкоинтенсивное излучение гелий-неонового лазера при

ППИ 0,64 мВт/см и экспозиции облучения 3 мин. Оба кожных ."окна" покрыты предметными стеклами (2,5х2,5 см) и фиксированы к коже конечностей лейкоv пластырем Смену стеклил r проводили через 3 и 12 ч. Результат исследования получен через 13 ч, т.е. в 1-ые сутки обследования ребенка. Через 3 ч количество нейтрофилов в стимулированном тесте — 20,8, в спонтанном тесте—

3,2., резерв хемотаксиса нейтрофилов84,6%; через 12 ч количество макрофагов в стимулированном тесте — 15,2, в спонтанном тесте — О, резерв хемотаксиса макрофагов — 100X. Во время проведения исследований побочных эффектов и осложнений от лазера не наблюдалось. Эаключение: резерв хемотаксиса нейтрофилов и макрофагов соответствует нормальным величинам. Следовательно, данный случай не требует коррекции резерва хемотаксиса фагоцитов.

Пример 2. В связи с реабилитацией ребенок Т. 13 лет (история болезни В 639) находился в дневном стационаре по поводу астматического бронхита (атопическая форма средней тяжести, период клинической ремиссии).

С целью решения вопроса о выборе средств реабилитаций в комплексе обследований было проведено исследование резерва хемотаксиса фагоцитов.

Для этого одновременно было выполнено два кожных "окна" (ЗХ5 мм) в области средней трети обоих предплечий. Одно и It

1 кожное окно оставалось интактным и служило для спонтанного теста. На другое кожное "окно" для стимуляции хемотаксиса фагоцитов воздействовали ниэкоинтенсивным излучением гелийнеонового лазера при ППИ 1,1 мВт/см и экспозиции облучения 3 мин (стимулированный тест). Обе ранки асептического воспаления покрывали стерильными предметными стеклами (2,5 2,5 см) и фиксировали в коже предплечья,с помощью лейкопластыря. Стекла меняли через 3 ч для оценки нейтрофильной фазы миграции и через 12 ч для оценки макрофагальнойФ фазы миграции. Результат исследования получен через

14 ч. Через 3 ч количество нейтрофилов в стимулированном тесте - 40,5, 1732271

Формула изобретения

Составитель А.Аносов

Редактор ?1.Стрельникова Техред А,Кравчук

Корректор С.Пекмар

Заказ 1580 Тираж Подписное

ВЧИИПИ Государственного комитета па изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Иосква, 3-35, Раушская наб., д. 4/5

Производственно-издательский конбимвт "Патент", г.ужгород, ул. Гагарина,!< в спонтанном тесте - 3,2, резерв хемотаксиса нейтрофнлов - 92,1Х; череэ

12 ч количество макрофагов в стимулированном тесте — 5,5Х, в спонтанном тесте — 3,5, резерв хемотаксиса мак5 рофагов " 36,4Х. При проведении обследований и наблюдении в течение

1 мес после лечения осложнений и побочных эффектов не наблюдалось. За- 10 ключение: РХН сохранен, РХМ умеренно снижен. Следовательно, в данном случае необходима коррекция нарушений резерва, хемотаксиса макрофагов.

Предлагаемый способ технически прост и доступен для практического выполнения в лечебно-профилактических и научно-исследовательских учреждениях, позволяет быстро и точно определить резерв хемотаксиса фагоцитов. При использовании низкоинтенсивного лазера в качестве стимулятора. хемотаксической активности фагоцитов в 6 раз сокращается время выполнения способа и на 2-3 суток сокращаются сроки обследования больных. При socпроизведении способа обеспечивается синхронность постановкй стимулированного и спонтанного тестов и устанавливается адекватность клеточного реагирования, а также устраняется неточность результатов, обусловленная динамикой заболеваний и лечения. Ис4 пользование способа в клинике повышает точность оценки функциональных свойств фагоцитов и дает воэможность дифференцированно определить различную степень резерва хемотаксиса фагоцитов не только при острой патоло" < гии, но и при рецидивирующих, затяжных и хронических бронхолегочных заболеваниях. Точность способа цри рецидивирующей, затяжной н хронической, патологии повышается на 72,7-83,37

При оценке резерва хемотаксиса фаго цитов учитываются только абсолютные показатели, отражающие истинные резервные их свойства. Способ позволяет дифференцированно оценивать сте пень резерва хемотаксиса фагоцитов И дает точные критерии его нормы и сни женин. Данный способ безопасен для больных и не имеет ни осложнений, ни побочных эффектов. При наблюдении эа

50 здоровыми и 50 больными детьми в процессе обследования и через 6-12 . месяцев после него ни в одном случае не возникло каких«либо осложнений и побочных действий.

1. Способ диагностики снижения резерва хемотаксиса фагоцитов путем измерения прироста числа этих клеток в стерильном кожном "окне", о т л нч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа и сокращения времени исследования, облучают одно из симметрично расположенных

I! !! кожных окон излучением гелий-неонового лазера, определяют относительную разницу в количестве фагоцнтов в облученном и необлученном !!Окнах!! и при превышении числом Ьагоцитов в облученном "окне" на 75Х и менее диагностируют снижение резерва хемотаксиса фагоцитов..

2. Способ по п.1, о т л и ч а юшийся тем, что используют лазерное излучение с плотностью мощности

0,88%0,245 мВт/см при длительности облучения 3 мин.